PLoS ONE: Interaktioner mellem genetiske varianter i Adiponectin, Adiponectin Receptor 1 og miljøfaktorer har for risikoen for kolorektal Cancer

Abstrakt

Baggrund

metabolisk syndrom træk spiller en vigtig rolle i udviklingen af kolorektal cancer. Adipokiner, centrale metaboliske syndrom cellulære mediatorer, når unormale, kan fremkalde carcinogenese.

Metode /vigtigste resultater

For at undersøge om polymorfier af vigtige adipokiner,

adiponectin

(

ADIPOQ

) og dets receptorer, enten alene eller i kombination med miljøfaktorer, er impliceret i kolorektal cancer, blev en to-trins case-kontrol undersøgelse. I første fase, vi evalueret 24 tag enkelt nukleotid polymorfier (tag SNP’er) på tværs

ADIPOQ

ligand og to

ADIPOQ

receptorer (

ADIPOR1

ADIPOR2

) blandt 470 tilfælde og 458 kontroller. En SNP med lovende Foreningen blev derefter analyseret i fase 2 blandt 314 tilfælde og 355 kontroller. I vores undersøgelse,

ADIPOQ

rs1063538 konsekvent forbundet med øget kolorektal kræftrisiko, med en odds ratio (OR) på 1,94 (95% CI: 1,48-2,54) for CC genotype sammenlignet med TT genotype. I to-faktor-gen-miljø interaktion analyser, rs1063538 præsenteret signifikante interaktioner med rygning status, familie historie af kræft og alkoholbrug, med yderste periferi af 4,52 (95% CI: 2,78-7,34), 3,18 (95% CI: 1,73-5,82) og 1,97 (95% CI: 1,27-3,04) for rygere, personer med familie historie af kræft eller drikker med CC genotype sammenlignet med ikke-rygere, personer uden familie historie af kræft eller ikke-drikkende med TT genotype, hhv. Multifaktor gen-miljø interaktioner analyse viste signifikante interaktioner mellem

ADIPOQ

rs1063538,

ADIPOR1

rs1539355, rygning status og BMI. Individer, der bærer en, to og mindst tre risikofaktorer præsenterede 1.18-fold (95% CI: 0,89 gange til 1,58 gange), 1,87-fold (95% CI: 1,38 gange to2.54 gange) og 4,39 gange (95% CI: 2,75 gange til 7,01 gange) øget kolorektal cancer risiko sammenlignet med dem, der uden risikofaktor, henholdsvis (

P

trend 0,0001)

konklusioner. /betydning

Vores resultater tyder på, at varianter i

ADIPOQ

kan bidrage til øget kolorektal cancer risiko i kinesisk og dette bidrag kan ændres af miljøfaktorer, såsom rygning status, familie historie af kræft og BMI

Henvisning:. Liu L, Zhong R, Wei S, Yin JY, Xiang H, Zou L, et al. (2011) Interaktioner mellem genetiske varianter i

Adiponectin

,

Adiponectin

Receptor 1 og miljøfaktorer har for risikoen for tyktarmskræft. PLoS ONE 6 (11): e27301. doi: 10,1371 /journal.pone.0027301

Redaktør: Takeo Yoshikawa, Rikagaku Kenkyusho Brain Science Institute, Japan

Modtaget: Juli 5, 2011; Accepteret: 13. oktober 2011; Udgivet: November 7, 2011

Copyright: © 2011 Liu et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China [NSFC-30972534 til NS, NSFC-81001275 og 81171878 til MX https://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default124.htm] og Program for New Century Excellent Talenter i University [NCET-10-0388 til MX https://www.edu.cn/]. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Tyktarmskræft er en af ​​de førende årsag til kræft sygelighed og dødelighed, der tegner sig for en anslået 1, 330, 000 nye tilfælde og 608, 000 kræftdødsfald i 2008 på verdensplan [1]. Kolorektal cancer har været lang udbredt i de vestlige befolkninger og blev anslået til at forårsage 142, 570 nye tilfælde og 51, 370 kræftdødsfald i Unite stat i 2010 [2]. I de seneste årtier, incidensraten af ​​kolorektal cancer steget markant i Kina. For eksempel udviklede område i Kina, såsom Shanghai oplevet en årlig stigning på 4,2% i kolorektal cancer incidens, som var endnu betydeligt højere end den gennemsnitlige stigning på 2% på verdensplan i løbet af de sidste tyve år [3].

Selv om årsagssammenhæng af kolorektal cancer ikke er helt forstået, fundet epidemiologiske undersøgelser at vestlige kosten og adfærdsmønstre, såsom højt fedtindhold, lavt indtag fiber og mangel på fysisk aktivitet, var den væsentligste årsag til stigende forekomst af kolorektal cancer i udviklingslandene. Det metaboliske syndrom, en konsekvens af vestlige kost-og adfærdsmønstre og karakteriseret ved fedme, insulinresistens og hypertension, blev efterfølgende påvist at bidrage til kolorektal cancer risiko [4], [5], [6]. Epidemiologiske undersøgelser har rapporteret en øget risiko for kolorektal cancer i overvægtige personer sammenlignet med normalvægtige individer [7], [8]. Tilsvarende markører for insulinresistens, såsom høje omløb niveauer af C-peptid og insulin-lignende vækstfaktor-bindende protein 1 (IGFBP-1), var viste at være direkte forbundet med kolorektal cancer risiko [9], [10]. I mellemtiden, observation af en økologisk sammenhæng mellem adipokiner sekretion lidelser og metabolisk syndrom træk, har affødt en række epidemiologiske undersøgelser af sammenhængen mellem vigtige adipokiner, især mellem adiponectin (ADIPOQ) og dets receptorer (ADIPORs) med fedme og insulinresistens, som viste, at cirkulerende ADIPOQ niveau var signifikant negativt, mens ADIPORs niveau var positivt, forbundet med metaboliske syndrom træk [11], [12].

i betragtning af sammenhængen mellem metaboliske syndrom træk og tyktarmskræft risiko og den centrale rolle,

ADIPOQ

og dets receptor gener i udviklingen af ​​fedme og insulinresistens, spirende interesse var fokuseret på den rolle,

ADIPOQ

og dets receptor gener i kolorektal carcinogenese. In vitro ADIPOQ præsenterede tendens væksthæmning og apoptose induktion i kolorektale cancercellelinjer [13]. In vivo mus med forstyrrelser i serum ADIPOQ udviklet flere intestinale tumorer [14]. For nylig har flere linjer af beviser vist omvendt sammenhæng mellem serum ADIPOQ og kolorektal cancer risiko [15], [16], [17]. I en prospektiv, indlejret case-kontrol undersøgelse, fandtes mænd i den højeste ADIPOQ kvintil at have en 68% lavere risiko for colorectal cancer sammenlignet med mænd i laveste kvintil (relativ risiko [RR], 0,42; 95% konfidensinterval [CI ], 0,23-0,78) [18]. Anticancer rolle ADIPOQ var primært induceret af dets receptorer, der har vist sig at undertrykke tyktarmskræft cellelinjer (herunder HCT116, HT29 og LoVo) proliferation via ADIPOR1- og -R2-medieret 5′-AMP -aktiverede proteinkinase (AMPK) . Desuden knockdown af

ADIPORs

kunne aflaste den undertrykkende effekt af ADIPOQ på væksten af ​​tyktarmskræft celler [19]. Desuden kunne overekspression af ADIPORs aktivere peroxisomproliferatoraktiveret receptor-a (PPAR-a), som blev rapporteret at spille en rolle i inhibering af FAS og aktivering af epidermal vækstfaktor-receptorfamilien at fremme cancerdannelse [20], [21 ]. Desuden har nylige epidemiologiske undersøgelser også påvist forhøjede ekspression af ADIPORs i colorektale carcinomer end i normalt gastrointestinal væv [22].

Adskillige polymorfismer i

ADIPOQ

og dets receptor gener er blevet påvist at påvirke ekspression af disse gener og efterfølgende risiko for kræft [23], [24], [25]. Kaklamani et al. viste, at nogle polymorfier af

ADIPOQ

og dets receptor gener var forbundet med brystkræft [26], prostatacancer [27] og kolorektal cancer [28] risiko kaukasisk. Men til dato, disse har været nogle undersøgelser vedrørende betydningen af ​​genetiske varianter i

ADIPOQ

og dets receptor gener som kræft modtagelighed faktorer i kinesiske befolkning. Derfor udførte vi en to-trins case-kontrol undersøgelse til systemisk evaluere enkelt nukleotid polymorfier (SNP) af

ADIPOQ

og dets receptor gener som en indikator for kolorektal kræftrisiko i kinesiske befolkning.

Resultater

Karakteristik af undersøgelsespopulationen

tabel 1 viser de karakteristika for enkeltpersoner, der indgår i totrins case-kontrol undersøgelse. Der var ingen signifikante forskelle i fordelingen af ​​alder, køn, alkoholforbrug og BMI mellem cases og kontroller i begge trin. Den mediane alder var 58 år (interkvartile område, 48-67 år) og 56 år (interkvartile område, 46-67 år) i kontrol i første og anden fase, sammenlignet med 58 yeas gamle (interkvartile interval , 51-67 år) og 59 yeas gamle (interkvartile område, 49-68 år) i de tilfælde, hhv. Flere rygere blev observeret i tilfælde end i kontrollerne (odds-ratio [OR] = 1,95, 95% CI: 1,56-2,45 i kombineret analyse). Desuden flere tilfælde besad familie historie af kræft i både case-kontrol studier (OR = 1,78, 95% CI: 1,34-2,38 i kombineret analyse).

Risiko forbundet med individuelle SNP

Siden 2 SNPs i

ADIPOR1

og en SNP i

ADIPOR2

blev undladt i udformningen af ​​PCR-primere i den første fase, i alt 24 tag SNPs i

ADIPOQ

og dets receptor gener blev analyseret, og derfor blev den cut-off punkt i

P Drømmeholdet værdi indstillet som 0,002 til multi-sammenligning i den første fase. Alle SNP’er monteret Hardy-Weinberg ligevægt blandt kontroller. Hyppigheden af ​​T-allelen var 0,55 og 0,54 i kontrol i første og anden fase, sammenlignet med 0,46 og 0,46 i tilfælde hhv. I den første fase blev en potentiel forening fundet (

P

0,001).

ADIPOQ

rs1063538 CC genotype var forbundet med øget kolorektal kræftrisiko, med en OR på 1,94 (95% CI: 1,37-2,74) sammenlignet med TT genotype. I valideringsundersøgelsen (etape 2), blev rs1063538 også forbundet med øget kolorektal kræftrisiko, med en OR på 1,91 (95% CI: 1,23-2,95) for CC vs TT genotype. Kombineret analyse af de 2 undersøgelser viste, at rs1063538 signifikant var forbundet med øget kolorektal kræftrisiko. Individer, der bærer rs1063538 CC genotype eller C allel præsenteret 1,94 gange (95% CI: 1,48 gange til 2,54 gange) og 1,79 gange (95% CI: 1,43 gange til 2,25 gange) øget kolorektal cancer risiko sammenlignet med dem, hvis gennemføres TT genotype (tabel 2). For at teste den statistiske effekt af vores stikprøvestørrelse, vi beregnet magt til at detektere en OR på 1,90 ved den første fejl af 0,002 i to-sidet test ved hjælp af en prævalens på 0,55 (forekomst af T allel af rs1063538 i kontroller). Resultaterne var som følger: kombineret undersøgelse, magt = 0,99; Trin 1, magt = 0,94; og fase 2, magt = 0,81. Resultater for ikke-signifikante SNPs er vist i tabel S1.

To faktor-gen-miljø interaktion og undergruppeanalyser

At udforske de potentielle interaktioner mellem

ADIPOQ

rs1063538 og BMI, rygning status, brug af alkohol og familie historie af kræft, vi udførte to-faktor-gen-miljø interaktion analyser af Logistisk regression i samlet befolkning. Resultaterne vises i Tabel 3. Rygere transporterer CC genotype signifikant øget kolorektal cancer risiko sammenlignet med ikke-rygere transporterer TT genotype, med en OR på 4,52 (95% CI: 2,78-7,34). Personer med arvelig kræft huser CC genotype var også forbundet med signifikant øget risiko kolorektal cancer, med en OR på 3,18 (95% CI: 1,73-5,82) sammenlignet med personer uden familie historie af kræft transporterer TT genotype. Alkohol brugere med CC genotype præsenterede 1,97 gange (95% CI: 1,27 gange til 3,04 gange) øget kolorektal cancer risiko sammenlignet med aldrig drikker transporterer TT genotype. Vi foretog også stratificerede analyser for

ADIPOQ

rs1063538 at udforske den rolle, polymorfi i forskellige undergruppe befolkning. I aldrig rygere, CC genotype signifikant øget kolorektal cancer risiko, med en OR på 1,74 (95% CI: 1,26-2,40) sammenlignet med TT genotype. Personer uden familie historie af kræft huser CC genotype af rs1063538 udviste en signifikant øget risiko for tarmkræft, med en OR på 1,95 (95% CI: 1,44-2,65) sammenlignet med TT genotype. I aldrig alkohol brugere, CC genotype signifikant øget kolorektal cancer risiko, med en OR på 1,87 (95% CI: 1,35-2,58) sammenlignet med TT genotype. Desuden er der i undergruppe af BMI 25 kg /m

2, personer med CC genotype rs1063538 var signifikant forbundet med øget kolorektal kræftrisiko, med en OR på 2,05 (95% CI: 1,45-2,90) sammenlignet med personer, der bærer TT genotype (tabel 4).

Multifaktor gen-miljø interaktioner med klassificering og regression Trees

Vi brugte data i den første fase til vidt udforske potentialet gen-miljø interaktioner ved hjælp Klassificering og Regression Trees (CART). I CART analyse blev den indledende opdeling af roden node rygning status, og nogensinde rygerne havde prævalens meget højere kræft end aldrig rygere (

P

0,05), hvilket tyder på, at rygning status var den stærkeste faktor i kolorektal kræft modtagelighed. Yderligere inspektion af klassificering træstruktur konsekvent angivet

ADIPOQ

rs1063538 var den stærkeste split, uanset rygning status. Kombinationen af ​​stadig ryge og rs1063538 CC genotype udstillet den højeste risiko for kolorektal cancer, med en 82,4% patient sats, mens kombinationen af ​​aldrig at ryge og rs1063538 T allel præsenterede den laveste risiko for kolorektal cancer, med en 41,4% patient sats. I nogensinde rygere transporterer rs1063538 T-allelen,

ADIPOR1

rs1539355 var den stærkeste virkning forbundet faktor, og kombinationen af ​​stadigt ryge, rs1063538 T allel og rs1539355 G allelen udstillet en næsthøjeste risiko for kolorektal cancer, med en 66,7% patient sats. I aldrig rygere transporterer

ADIPOQ

rs1063538 CC genotype, BMI var den stærkeste virkning forbundet faktor, og kombinationen af ​​aldrig at ryge, rs1063538 CC genotype og ikke-overvægtige præsenteret en 52,4% patient sats (figur 1). (Receiver opererer karakteristik [ROC] kurve i en 10-fold krydsvalidering for CART analyse er tilvejebragt som figur S1 Areal under kurven var 0,62, dens 95% CI:. 0,59-0,66,

P

. 0,001)

Terminal knuder viser antallet af deltagere i fase 1. Disease status blev klassificeret som sager (1) og kontroller (0)

kombinerede effekt af risikofaktorer

for at forbedre den statistiske effekt, er data fra kombineret analyse anvendes til at detektere den kombinerede effekt af risikofaktorer identificeret ved CART. Da

ADIPOR1

rs1539355 præsenteret interaktioner med andre faktorer, selv om den vigtigste effekt af denne polymorfi ikke blev påvist i den første fase, vi stadig gennemført genotypning for denne SNP i fase 2 (tabel S2), som vil bidrage til at give data for faktor-dosering effekt analyse i samlet befolkning. For at evaluere den kombinerede effekt af flere faktorer forbundet med kolorektal kræftrisiko, vi opsummerede antallet af risikofaktorer for rygning status,

ADIPOQ

rs1063538, BMI og

ADIPOR1

rs1539355 i hvert enkelt og analyseret den resulterende kolorektal cancer risiko. Af miljømæssige faktorer, rygning og BMI≥25 kg /m

2 blev valgt som risikofaktorer. De genotyper af

ADIPOQ

rs1063538 og

ADIPOR1

rs1539355 blev kategoriseret som binære variabler i overensstemmelse med split resultater af CART, nemlig rs1063538 CC, og rs1539355 AG eller GG-genotypen blev betragtet som risikofaktorer. Vi delte den samlede befolkning i fire undergrupper baseret på antallet af risikofaktorer. Vi fandt en signifikant dosis effekt forening for øget kolorektal kræftrisiko, med et stigende antal risikofaktorer (

P

for trend 0,0001). Sammenlignet med personer uden risikofaktor, enkeltpersoner der bærer 1, 2 og mindst 3 risikofaktorer udstillet en gradient af øget kolorektal cancer risiko med yderste periferi på 1,18 (95% CI: 0.89-1.58), 1,87 (95% CI: 1,38-2,54) og 4,39 (95% CI: 2,75-7,01). (tabel 5)

diskussion

Denne undersøgelse systematisk undersøgt sammenhængen mellem et sæt af polymorfier i

ADIPOQ

og dets receptor gener og tarmkræft. Den største fund var signifikant association af en polymorfi i

ADIPOQ Hotel (rs1063538) med øget kolorektal kræftrisiko. Desuden kolorektal carcinogenese rolle

ADIPOQ

rs1063538 blev ændret af miljømæssige faktorer såsom rygning status, familie historie af kræft, brug af alkohol og BMI, og den kombinerede effekt af flere potentielle faktorer, herunder rygning,

ADIPOQ

rs1063538, BMI og

ADIPOR1

rs1539355, viste en signifikant dosis effekt i et gen-miljø interaktion tilgang.

i vores vigtigste effekt analyse,

ADIPOQ

rs1063538 var den eneste SNP udviste en statistisk signifikant sammenhæng med øget kolorektal kræftrisiko. Denne forening er biologisk plausibelt. Først blev

ADIPOQ

og dets receptor gener nyligt vist sig at spille en rolle i carcinogenese især i fedme-associerede maligne sygdomme. Det er blevet vist, at ADIPOQ kunne undertrykke væksten af ​​nogle maligne celler ved at regulere AMPK eller β-catenin-Wnt pathway, som begge udøvede kraft i carcinogenese [29]. ADIPOQ kan også bidrage til anticancer ved at fremme apoptose. ADIPOQ niveauer har været forbundet med aktiveringen af ​​apoptotiske enzymer i caspasekaskaden, som førte til celledød, modulering af ekspressionen af ​​adskillige apoptoserelaterede gener i myelomonocytiske celler, og reduktion af tumor-neovaskularisering [30]. ADIPOQ eksponering Højt niveau har vist sig at hæmme udbredelsen af ​​kolorektale cancer cellelinjer [13], mens, knockout af

ADIPOQ

kunne fremme tumorvækst i mus ved at reducere makrofag infiltration [31]. Desuden har epidemiologiske undersøgelser vist, underekspression af ADIPOQ eksisterende i en lang række forskellige humane cancere, der stærkt støttet betydningen af ​​ADIPOQ i suppression af cancer initiering og udvikling [32]. For det andet er de SNP rs1063538 placeret i 3’UTR-regionen i

ADIPOQ

og tidligere undersøgelser har vist, at polymorfier i 3’UTR præsenterede væsentlig indvirkning på ADIPOQ niveau. For eksempel blev rs6773957 og rs3774261 fundet at være de mest stærkt forbundet SNPs i amerikansk i et genom-dækkende kobling og association scanninger af ADIPOQ niveau, og som begge er placeret i 3’UTR af dette gen og taget til fange af rs1063538 [33 ]. I betragtning af den vigtige rolle, som ADIPOQ i regulering af celledeling og apoptose [34], [35], og den rolle, 3’UTR i regulering af genekspression, blev det udledes, at polymorfier i 3’UTR af

ADIPOQ

kan spille en rolle i colorektal carcinogenese, hvilket blev dokumenteret af Kaklamani et al. [26]. Efterfølgende kan vi udlede, at rs1063538 kunne påvirke tarmkræft risiko ved sin bindingsuligevægt med andre SNPs i 3’UTR at regulere ekspressionen af ​​

ADIPOQ

, men det forblev at blive bekræftet. Desuden er det også sandsynligt, at denne SNP er blot et tag SNP, som er i koblingsuligevægt med den virkelige kausale SNP. Den virkelige kausale SNP kan være placeret i den kodende region og påvirke protein funktion på posttranslationelle niveau [36].

Udover den beskedne væsentligste virkning af

ADIPOQ

rs1063538, vi også observeret signifikant effekt af gen-miljø interaktioner, som var i stand til at forstærke den beskedne effekt af den enkelt genetisk variant, og forbedre den forudsigende magt. I to-faktor-gen-miljø interaktion analyser og stratificerede analyser, fandt vi, at personer, der bærer

ADIPOQ

rs1063538 CC genotype præsenteret forskellige kolorektal cancer risiko i forskellige rygning status, familie historie kræft kategorier, brug af alkohol og BMI. Konsekvent blev en signifikant interaktion også påvist blandt

ADIPOQ

rs1063538,

ADIPOR1

rs1539355, rygning status og BMI i CART analyse. Selvom statistiske interaktioner ikke nødvendigvis biologiske interaktioner, flere linjer af beviser tyder på, at vores resultater kan være biologisk plausibel. Som en af ​​de vigtigste adipokiner, ADIPOQ virker ved tværbinding med dets receptorer, ADIPOR1 og ADIPOR2 [32]. Tidligere undersøgelser har dokumenteret, at ADIPOQ undertrykt tyktarmskræft cellelinjer (herunder HCT116, HT29 og LoVo) spredning via ADIPOR1- og -R2-medieret AMPK, mens, knockdown af ADIPORs såsom ADIPOR1 lettet den undertrykkende effekt af ADIPOQ på væksten af ​​kræftceller [19]. Selv om

ADIPOR1

rs1539355 blev ikke identificeret funktionelle SNP blev denne polymorfi også fundet at være forbundet med nedsat insulinresistens, hvilket tyder på at der kan være nogle kobling mellem denne polymorfi og genekspression eller funktion [37]. Desuden kunne de

ADIPOR1

rs1539355 fremhæve betydningen af ​​

ADIPOQ

SNPs i fedme genotype [38]. Da både insulinresistens og fedme genotyper blev påvist i forbindelse med kolorektal kræftrisiko, var det rimeligt at tro samspillet mellem varianter af

ADIPOQ

og dets receptor gener spiller en rolle i carcinogenese af kolorektal cancer [39]. Ud over de interaktioner inde

ADIPOQ

signal pathway, funktionen af ​​

ADIPOQ

og dets receptor gener blev også ændret af nogle kolorektal cancer risiko forbundet miljømæssige faktorer, såsom rygning status og BMI. Tidligere undersøgelser har vist, at fedme kan potentielt påvirke aktivering af

ADIPOQ

og dets receptor gener og efterfølgende risiko for kræft [40], [41]. For eksempel Tang et al. tilkendegivet, at en positiv association af genetiske varianter af

ADIPOQ

med prostatakræft var begrænset til personer, der var overvægtige [42] og Petridou et al. viste, at kvinder med høj BMI og lav plasma ADIPOQ havde 6,5 gange øget risiko for endometriecancer sammenlignet med kvinder med normal BMI og højere ADIPOQ koncentrationer [43]. Røg eksponering blev også påvist at hæmme mRNA ekspressionen af ​​

ADIPOQ

i adipocytter. Sammenlignet med ingen blev tobaksrøg eksponering på mere end 10 cigaretter om dagen i forbindelse med lavt ADIPOQ niveau [44]. Omvendt blev rygestop fundet at være forbundet med øget plasma ADIPOQ niveau [45], [46]. Familie historie af kræft og alkohol blev også etableret risikofaktorer for kolorektal cancer, men undersøgelser for påvirkning af disse to faktorer i udtrykket af

ADIPOQ

og dets receptorer gener var begrænset. Selv om der var stadig nogle mekanisme bør rettes, kan samspillet afsløre en biologisk fremme af disse faktorer.

Der er nogle begrænsninger i vores undersøgelse. Først denne to-trins case-kontrol undersøgelse er sygehus-baserede og selektionsbias kan eksistere, da kontrollerne var fra en helbredsundersøgelse befolkning, der måske ikke er ideelle repræsentanter for geografisk matchede population i lignende eksponering af miljøet. Men kontrollerne kom fra samme region med sager og blev tilfældigt udtaget, hvilket kan reducere effekten af ​​selektionsbias. For det andet er de oplysninger for patienternes BMI opnået ved den første diagnose af colorektal cancer. Da carcinogenese er en kompleks og kroniske forbrug, kan den seneste BMI bringe nogle skævhed under lokalunionen i fedme og kolorektal cancer risiko. Men en nylig stor case-kontrol undersøgelse offentliggjort i Journal of National Cancer Institute viste, at BMI baseret på de seneste selvrapporterede foranstaltninger rapporterede lignende resultat med BMI fra prospektive studier i kolorektal kræftrisiko [47], [48], [49] . Derfor mener vi nylig BMI i vores undersøgelse vil ikke bringe væsentlig skævhed til resultaterne af vores undersøgelse. For det tredje er der nogle manglende data i miljømæssig eksponering i både case-control studier, såsom familie historie af kræft, da deltagerne ikke kunne give præcise oplysninger om relaterede emner under interviewe. Derfor gennemførte vi gen-miljø interaktion analyser i samlet befolkning, hvilket kan bringe mere statistisk styrke til resultaterne og reducere skævhed forårsaget af manglende data. For det fjerde, prøvens størrelse er ikke stor nok for nogle statistisk analyse, især for nogle undergruppe analyser, som kan bringe en vis indflydelse på stabiliteten og pålideligheden af ​​resultaterne. Så yderligere undersøgelser med mere stikprøvestørrelse, flere SNPs og funktionelle udforske er berettiget til identificerede rolle

ADIPOQ

gen familie og gen-miljø interaktioner i kolorektal carcinogenese.

Sammenfattende er dette den første undersøgelse til systematisk vurdere virkningen af ​​kim line genetiske varianter i

ADIPOQ

og dets receptor gener og gen-miljø interaktioner på kolorektal cancer risiko på kinesisk. Vi fandt en SNP i

ADIPOQ

(rs1063538) var forbundet med øget kolorektal cancer risiko og de potentielle gen-miljø interaktioner kunne spille mere vigtig rolle i reguleringen kolorektal cancer risiko. Identifikationen af ​​nye genetiske modtagelighed markører for tarmkræft ætiologi vil ikke blot hjælpe os med at forstå biologi kolorektal carcinogenese men kan også integreres med kendte kliniske, epidemiologiske og genetiske viden til at hjælpe os med at forbedre risiko forudsigelse af kolorektal cancer.

Materialer og metoder

Etik erklæring

undersøgelsen blev informeret samtykke indhentet fra alle endelige deltagere og godkendt af revisionen bestyrelse Tongji Medical College of Huazhong Universitet for Videnskab og Teknologi.

undersøgelse deltagere

En to-trins case-kontrol undersøgelse design blev anvendt i denne undersøgelse. Den første case-kontrol undersøgelse blev anvendt til at evaluere

ADIPOQ

og dets receptor gener polymorfier i forhold til kolorektal kræftrisiko, og derefter at validere lovende foreninger i den anden uafhængige befolkning. I den første fase, blev sager nyligt diagnosticeret med tyktarmskræft mellem den 1. januar, 2007 og November 31, 2009 i ottende Hospital i Wuhan, uden en forudgående diagnose af kræft, og i live på tidspunktet for interviewet. Rekruttering til Fase 2 opstod mellem den 1. januar, 2009 og den 31. august 2010 i Taihe Hospital i Shiyan, og herunder kriterier var samme sager rekrutteret i fase 1. Kontroller blev udvalgt fra sundhedsundersøgelsen befolkning i samme hospital i samme periode og ofte matchet med sager fordelt på alder (± 5 år) og køn i hver fase. Ingen af ​​kontrollerne havde nogen personlig historie af kræft, fordøjelsessygdomme, forhøjet blodtryk eller diabetes på tidspunktet for afgivelse af blod, der blev konstateret med et spørgeskema udfyldt af hver sund kontrol. Blodprøve og personlig information om sex, fødselsår, rygning status, brug af alkohol, nylig vægt, højde og familie historie af kræft blev indsamlet fra hver deltager, og yderligere oplysninger om alder ved kolorektal cancer diagnose og kliniske karakteristika blev optaget fra sager. Af de støtteberettigede deltagere, 470 tilfælde (94,0%) og 458 kontroller (91,6%) og 314 tilfælde (87,22%) og 355 kontroller (98,61%) gennemført i-personers interviews og doneret blodprøver i første og anden fase, hhv.

SNP valg

i alt 100 SNP markører med en mindre allel frekvens (MAF) ≥0.1 af

ADIPOQ

og dets receptor gener var downloades fra HapMap (http: //www.hapmap.org/) ved hjælp af fase 1 og fase 2 data Slip 24 (Build 36,3) for den kinesiske befolkning (kinesisk Han fra Beijing-CHB). Tag SNPs blev valgt til hvert gen ved hjælp af Tagger i Haploview (https://www.broadinstitute.org/haploview/haploview). Vi anvendte den parvise tilstand og valgt et minimalt sæt af markører, således at alle alleler, som skal tages ville være korreleret med en r

2≥0.8 med en markør i det pågældende sæt.

ADIPOQ

,

ADIPOR1

ADIPOR2

gav 10, 9 og 8 tag SNP’er hhv. (Nærmere oplysninger vises i tabel S1).

Polymorfi analyse

Genomisk DNA fra perifere blodprøver blev isoleret ved hjælp af blod Genomisk DNA Purification Kit (Tiangen Biotech, Beijing, Kina) efter fabrikantens protokol . Genotypebestemmelse blev udført i to faser.

I den første fase, den Sequenom MassARRAY platform (Sequenom San Diego, CA, USA) blev anvendt til high throughput gentype- og assay design [50]. Genotypebestemmelse blev udført ved anvendelse af IPLEX-kemi på en matrix assisteret laser desorption /ionisering time-of-flight (MALDI-TOF) massespektrometer. Multiplex SNP assays blev konstrueret med anvendelse SPECTRODESIGNER software. PCR-reaktioner, cykelforhold og post-PCR forlængelsesreaktioner blev udført som producentens protokol. De IPLEX reaktionsprodukterne blev behandlet med SpectroCLEAN (Sequenom) harpiks til fjernelse af salte og spottet på en 384 SpectroChip, og derefter bearbejdet og analyseret ved MALDI-TOF massespektrometer. Genotyper blev kaldt hjælp MassARRAY Typer 4.0 software [51]. For hver 384 brønde, blev 20 prøver duplikeret og 4 brønde blev indgivet med H

2O (blank) til krydskontrol forurening og pålidelighed af systemet. En hel plade blev anset for at have undladt, hvis: (i) ingen SNPs havde passeret opkald på 80%; og /eller (ii) hvis succesraten for dublerede kontrol var 99,5% og af den tomme 90%; og /eller (iii) succesraten for blankocheck alene havde været 75%. SNPs blev fjernet fra analysen, når: (i) de var ikke kalde på mindst 80% af patienterne og kontrol; og /eller (ii) de var monomorfe, da disse er oplysende; og /eller (iii) deres genotypefrekvenser afveg fra Hardy-Weinberg ligevægt (HWE) forventning, sandsynligvis på grund af genotypebestemmelse fejl [52].

I den anden fase, polymorfier blev vurderet ved hjælp af 5′-nuklease ( Taqman) assay (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Primere og prober blev designet af Primer Express 3.0 (Applied Biosystems). Reaktioner blev afsluttet og læse i en 7900 HT TaqMan sekvens detektor-system (Applied Biosystems). Amplifikationsblanding (12,5 pi) af polymerasekædereaktion indeholdt 50 ng DNA, 900 nM af hver forward og reverse primer, 300 nM af hver specifik probe, og 6,25 pi Taqman Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA) . Amplifikation blev udført under følgende betingelser: 95 ° C i 10 minutter efterfulgt af 45 cyklus på 94 ° C i 30 s og 62 ° C i 1 min. Data blev analyseret ved anvendelse Allelic Discrimination Program (Applied Biosystems). Opkaldet sats var 99,2%. I alt 10% prøver blev genotype i to eksemplarer og viste 100% konkordans.

Statistisk analyse

Pearsons χ

2 test blev anvendt til at sammenligne forskellene i fordelingen af ​​kategoriske variable (køn