PLoS ONE: REG4 udtrykkes kraftigt i mucinøs kræft i æggestokkene: En potentiel Novel Serum Biomarker

Abstrakt

Præoperative diagnostik af æggestokkene neoplasmer stole på ultralydsscanning og serum biomarkører ca125 og HE4. Imidlertid kan disse markører være forhøjet i ikke-neoplastiske tilstande og kan ikke identificere de fleste ikke-serøse epithelcancer undertyper. Formålet med denne undersøgelse var at identificere histotype-specifikke serum biomarkører for mucinøs kræft i æggestokkene. De kandidatgener med mucinøs histotype særligt udtryk profil blev identificeret fra offentligt tilgængelige gen-ekspression databaser og yderligere i silico data mining blev udført udnytte MediSapiens databasen. Kandidat biomarkør validering blev udført under anvendelse QRT-PCR, western blotting og immunhistokemisk farvning af tumorvæv microarrays. Ekspressionsniveauet af kandidat-genet i serum blev sammenlignet med serum CA125 og HE4 niveauer hos en patient kohorte af prospektivt indsamlet fremskreden ovariecancer. Database søgninger identificeret REG4 som en potentiel biomarkør med specificitet for mucinøs ovariecancer undertype. Den specifikke udtryk i epiteliale tumorer i æggestokkene blev yderligere bekræftet af mRNA-analyse. Immunohistokemisk farvning af ovariale tumorer vævsarrays viste karakteristiske cytoplasmiske ekspressionsmønster kun i mucinous carcinomer og foreslog differentiel ekspression mellem benigne og maligne mucinous neoplasmer. Endelig et ELISA baseret serum biomarkør assay demonstrerede forøget ekspression kun hos patienter med mucinøs ovariecancer. Denne undersøgelse identificerer REG4 som en potentiel serum biomarkør for histotype-specifik påvisning af mucinøs ovariecancer og foreslår serum REG4 måling som en ikke-invasiv diagnostisk værktøj for postoperativ opfølgning af patienter med mucinøs ovariecancer

Henvisning.: Lehtinen L, Vesterkvist P, Roering P, Korpela T, Hattara L, Kaipio K, et al. (2016) REG4 udtrykkes kraftigt i mucinøs kræft i æggestokkene: En Potentielle Novel Serum Biomarkør. PLoS ONE 11 (3): e0151590. doi: 10,1371 /journal.pone.0151590

Redaktør: Kwong-Kwok Wong, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, UNITED STATES

Modtaget: November 19, 2015; Accepteret: 1 marts 2016; Udgivet: 16 marts 2016

Copyright: © 2016 Lehtinen et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af Sigrid Juselius Foundation, https://www.sigridjuselius.fi/foundation, til LL, TK, KK; Finsk Cancer Society, https://www.cancersociety.fi/grants/, til LL, PR, TK, KK; Turku Universitetshospital Research Fund, https://www.vsshp.fi/en/toimipaikat/tyks/Pages/default.aspx, til LL, PR, KK; Europæiske Fond for Regionaludvikling (A31859), https://ec.europa.eu/regional_policy/EN/funding/erdf/, til LL, PR, KK, PV, LH, KI, HS, OC. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Epithelial ovariecancer (EOC) er den mest dødbringende gynækologisk kræft [1]. Selvom nye behandlingsmetoder har forlænget overlevelse under de seneste årtier har den overordnede prognose ikke forbedret [2,3]. De symptomer, såsom mavesmerter, øget abdominal størrelse, oppustethed eller kvalme, er ofte uspecifikke indtil sent i sygdomsprogression, hvilket fører til forsinket diagnose. De fleste patienter er diagnosticeret på et fremskredent stadium og behandles ved operation kombineret med platin-taxan kemoterapi. EOC består af seks vigtigste histologiske undertyper (histotypes); lav kvalitet serøst carcinom (LGSC), high-grade serøst carcinom (HGSC), klar celle carcinom (CC), endometrioide carcinom (EF), mucinøs carcinom (MC) og overgangsordning celle carcinom (TC) med tydelige genetiske profiler, biologisk adfærd og resultat.

diagnosen kræft i æggestokkene er afhængig af kliniske funktioner, ultralyd billedbehandling og serum biomarkør cancer antigen 125 (CA125). Derudover kan de hidtil ukendte serum biomarkør Menneskelige epididymis 4 (HE4) bringe yderligere oplysninger differentierede diagnostik af kvinder med underlivsbetændelse masse [4]. Disse biomarkører er imidlertid ikke helt pålidelig til diagnosticering ikke-serøse histotypes. CA125 værdier har vist sig at være lavere for patienter med MC sammenlignet med patienter med SC [5,6]. Da diagnosen ikke kan baseres på de nuværende serum biomarkører, i de fleste tilfælde den korrekte diagnose er kun afsløret efter kirurgiske indgreb. Globalt mucinøse carcinomer udgør ~ 11% af EOC [7]. Selvom prognosen er sædvanligvis gunstig, i nogle tilfælde carcinomer gentage sig og fremskridt aggressivt [8,9]. Desuden mucinøse ovarietumorer har vist, at have lavere svarprocent på platinbaseret kemoterapi sammenlignet med HGSC [5,6]. Et stigende antal undersøgelser viser, at forskellige ovariecancer histotypes bør betragtes som særskilte sygdomme og kræver derfor forskellig behandling [10]. Ikke-invasive diagnostiske metoder, såsom histotype differentiere serum test, kunne være værdifulde til optimering af behandlingsstrategi før operation.

Denne undersøgelse har til formål at identificere mucinøs histotype specifikke serum biomarkører for kræft i æggestokkene. Baseret på

i silico

analyser, studerede vi udtryk for Regenerating Islet-Afledt Protein IV (REG4) i et sæt af mucinøse kræft i æggestokkene væv, patient sera og ascites væsker. Desuden blev REG4 koncentration målt i en tidsserie af serumprøver at bestemme korrelationen til tumorbyrde. Derudover undersøgte vi CA125, HE4 og REG4 i de samme prøver at sammenligne deres præstationer.

Materialer og metoder

I silico

data mining

MediSapiens database (www.medisapiens.com) blev påført studere genekspressionsniveauer tværs af alle normale og neoplastiske humane væv [11]. Prøverne indeholdt i denne database er blevet analyseret på Affymetrix platform, og på grund af de unikke normaliserings- og datakvalitetsproblemer kontrol, kan genekspressionsprofilerne indsamlet fra forskellige undersøgelser kombineres til at generere en oversigt over ekspressionsprofilen i humane væv. Data fra normal ovarie (n = 10) og kræft i æggestokkene prøver (n = 288) til rådighed i MediSapiens databasen blev udnyttet i vævsspecifik udtryk analyse.

Klinisk materiale

De undersøgelser, der involverer klinisk materiale er blevet udført i overensstemmelse med de etiske standarder, der er fastsat i 1975-erklæringen af ​​Helsinki. Den ovarievæv microarray (TMA) blev konstrueret fra kirurgiske prøver indsamlet fra vævet arkiv af Patologisk Institut, Turku University Central Hospital som tidligere beskrevet [12]. Brugen af ​​prøverne blev godkendt af Den Etiske Komité for Hospital District of Southwest Finland. Patient sera og en del af de frosne tumor vævsprøverne blev indsamlet fra patienter, der behandles ved Turku Universitetshospital. De serumprøver omfattede både behandlingsnaive præoperative prøver og langsgående prøver under behandling. Brugen af ​​al klinisk materiale blev godkendt af Den Etiske Komité for Hospital District of Southwest Finland (ETMK, 53/180/2009 § 238) og Den nationale tilsynsmyndighed for velfærd og sundhed (Valvira, DNRO 6550 /05.01.00.06 /2010 og STH507A). Yderligere frisk frosset mucinøs æggestokkene tumor materiale blev opnået fra Oslo Universitetshospital, Norge. Undersøgelse godkendelse blev givet af det regionale udvalg for Medical Research Ethics i Norge og informeret samtykke blev underskrevet af norske patienter.

Tissue microarray og immunhistokemi

TMA indeholdt 185 prøver fra 100 patienter med æggestokkene neoplasmer ; serøse cystadenomas (n = 16), serøse borderline tumorer (n = 27), serøse carcinomer (n = 47), mucinous cystadenomas (n = 14), mucinous carcinomer (n = 36), endometroid carcinomer (n = 45). TMA blev farvet med monoklonalt muse REG4 antistof [13], som beskrevet [14]. REG4 immunfarvning blev uafhængigt evalueret af to efterforskere (TK og OC); i tilfælde af disconcordance konsensus point er anvendt til yderligere vurdering.

Kvantitativ RT-PCR

Total RNA blev ekstraheret fra frosne æggestokkene tumor prøver (10 mg stykke) og primære celler ved hjælp RNeasy Mini kit (Qiagen) ifølge producentens protokol og forarbejdet til cDNA (Applied Biosystems, Foster City, CA). TaqMan prober blev erhvervet fra Universal Probe Library (Roche Diagnostics, Espoo, Finland) og primere blev bestilt fra Oligomer (Helsinki, Finland) til REG4 (fremad: atgcggctgctcctattg; omvendt: taaaaccatccaggagcaca) og GAPDH (fremad: tggctctaccttagaaccctga; omvendt: ttttgctctttgccgtacct) . Real-time kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR) blev udført med ABI Prism 7900 (Applied Biosystems). Kvantificering blev udført med RQ Manager 1.2 software ved hjælp af

ΔΔCT metoden (Applied Biosystems). Tre eller flere gentagne prøver blev anvendt til at undersøge mRNA-ekspression af REG4 og GAPDH. Gennemsnitlig ekspression af kontrolprøverne blev anset for beregningen af ​​folden ændringer og GAPDH blev anvendt som en endogen kontrol. Tre eller flere gentagne prøver blev undersøgt for påvisning af mRNA-ekspression. Statistisk signifikans blev bestemt med t-test, og p-værdier 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Western blotting

For proteinlysater, ca. 20 mg stykker blev skåret fra frosne tumorer og lyseret med lydbehandling i RIPA lysisbuffer. Proteinkoncentrationer blev målt under anvendelse BioRad proteinassay-kit ifølge producentens instruktioner (Bio-Rad Laboratories, CA). Prøver blev fremstillet blanding af passende mængder af protein lysat med 5 x Laemmli-buffer og kogt i 5 min. Lige store mængder protein (20 ug) blev separeret på 15% SDS-PAGE-gel og overført til nitrocellulosemembran (pore bredde 0,2 um). Lige belastning blev bekræftet med Ponceau-farvning. Membraner blev blokeret med 5% mælk-TBST og probet med polyklonale REG4 antistof (1: 1000, AF1379, R 500 i enhver prøve) og deres tilsvarende raske væv (Fig 1B). Høj udtryk for

REG4

mRNA blev fundet i malign gastrisk, kolorektal og pancreas væv samt i sund kolorektal og pancreas væv. Det højeste niveau af

REG4

mRNA-ekspression blev set i mucinous ovariecancer, mens ekspressionsniveauet forblev meget lav i sund ovarievæv. Mere specifik analyse af

REG4

mRNA ekspression i sund æggestok (n = 10) og maligne (n = 288) æggestokkene væv af forskellige histologier bekræftede mucinøs histotype særligt udtryk profil (p 0,001, figur 1C). I andre ovariecancer histotypes,

REG4

mRNA-ekspression forblev på niveau med sunde væv

(A) Ondartede væv med høj REG4 mRNA-ekspression (exp værdi .. 500, n = 14 ). (B) REG4 mRNA-ekspression i tilsvarende raske væv (hvis tilgængelig, n = 8). (C) Detaljeret analyse af REG4 mRNA-ekspression hos raske og maligne æggestokkene væv. Boksen refererer til kvartil distribution (25-75%) område, med medianen vist som en lodret linie (grøn hos raske prøver, rød i maligne). Dataobservationer der ligger mere end 1,5 * inter-kvartil rækkevidde højere end den tredje kvartil, betragtes som outliers og angivet separat.

REG4 er stærkt udtrykt i tumorprøver afledt mucinøs ovariecancer

i silico

analyse viste specifikt udtryk for

REG4

mRNA i mucinøs histotype af tumorer i æggestokkene. For at validere disse data,

REG4

mRNA og protein-ekspression blev undersøgt i prøver fra mucinøs (MUC) og high-grade serøs (SER) tumorer i æggestokkene.

REG4

mRNA-ekspression blev undersøgt med QRT-PCR ved anvendelse af mRNA fra serøse tumorer som negativ kontrol. Resultaterne er opsummeret i fig 2A. Den REG4 mRNA viste høj samlet udtryk i mucinøse carcinomer (MUC_C_4-10, Fig 2A), mens ingen ekspression blev fundet i high-grade serøse tumorer (SER_1-3). Interessant,

REG4

blev ikke udtrykt i mucinøs cystadenoma (MUC_A_1) og viste signifikant lavere mRNA-ekspressionsniveauer også i mucinøse borderline tumorer (MUC_B_2-3). REG4 proteinekspression i det samme sæt af tumorprøver blev vurderet med western blotting. Resultaterne viste høj REG4 protein niveauer i

REG4

mRNA positive tumorer (Fig 2B). Samlet set REG4 proteinekspression var enten meget høj eller meget lav i disse prøver, mens mRNA analyse også identificeret prøver med mellemliggende eller lav udtryk. Disse resultater validerer resultaterne af

i silico

analyse og viser, at REG4 udtryk er specifik for mucinøs ovariecancer histotype.

(A) Kvantitativ RT-PCR-analyse af REG4 mRNA-ekspression i serøse carcinomer (SER_C), mucinøse cystadenomas (MUC_A), mucinøse borderline tumorer (MUC_B) og mucinøse carcinomer (MUC_C). (B) Western blot-analyse af REG4 proteinekspression i samme sæt prøver. Det totale indhold af hver prøve protein var 20 ug og lige belastning blev bekræftet med Ponceau farvning.

REG4 udtrykkes ved bæger-lignende celler i maligne mucinøse tumorer i æggestokkene

REG4 udtryk mønster blev undersøgt i TMA’er indeholder kliniske prøver fra ovarietumorer med forskellige histotypes. Resultaterne er opsummeret i tabel 1 og i fig 3. Samstemmende med de tidligere analyser, blev ingen farvning detekteret i serøs (n = 90) eller endometrioide neoplasmer (n = 45), mens positiv REG4 farvning blev fundet i 83% (30 /36) af mucinous carcinomer. Dette indikerer, at REG4 udtryk er specifik for mucinøs histotype. I alle REG4 positive prøver farvningen var meget stærk. De mucinøse vævsprøver blev bekræftet at være af primær ovariecancer tumor oprindelse ved at undersøge den langsgående elektroniske patientjournal information om hver enkelt patient med særlig henvisning til tidligere diagnoser, diagnostiske undersøgelser og laparotomi status, samt med CK7 /CK20 farvning. TMA indeholdt også prøver af godartede mucinous cystadenomas (n = 14). Vigtigt er det, blev der ikke REG4 ekspression påvises i disse prøver. Korrelation af farvningsresultater med patientdata viste ingen sammenslutning af REG4 udtryk for andet end mucinøs histotype. Stærk REG4 farvning blev opdaget lige i lav og høj kvalitet mucinous karcinomer. Mere detaljeret gennemgang af REG4 farvningsmønster afslørede stærkeste farvning i og mellem de mucinøse indeslutninger af bæger-lignende tumorceller. Endvidere REG4 var placeret udelukkende på den apikale overflade af tumorcellerne, mens stroma var negativ.

Immunhistokemisk farvning af REG4 i en TMA af maligne æggestokkene væv. Eksempler på serøs karcinom (AB), endometrioide carcinom (CD) og mucinøs carcinom (EF) præsenteres.

Udskilt REG4 kan påvises ud fra serum og ascites af mucinøse kræftpatienter

for at analysere potentialet i REG4 som serum biomarkør for mucinous ovariecancer, brugte vi en REG4 specifik sandwich ELISA-assay. Prøverne omfattede sera og ascites væske fra patienter med serøse eller mucinøse ovarietumorer. Detaljeret prøve beskrivelse og resultater er præsenteret i S2 tabel. Serumprøverne blev taget før (præ-operative) og efter (post-operative) kirurgi på flere tidspunkter under opfølgning. Ascitesvæsken blev opsamlet under operationen. For at vurdere specificiteten af ​​REG4 for mucinøs ovariecancer histotype, vi analyserede CA125, HE4 og REG4 koncentrationer fra præoperative serumprøver fra patienter med ovariecancer med høj kvalitet serøse (n = 4) eller mucinøs (n = 3) kræftformer. Alle præoperativ sera var fra patienter med dissemineret (stadium III-IV) sygdom. Resultaterne er vist i fig 4A. For at være i stand til direkte sammenligne ELISA-assays med forskellige måleenheder er resultaterne præsenteret som fold-ændring (FC) af den respektive malignitet indikerer afskæringsværdi (35 kU /l for CA125 og 150 pM for HE4 ). De valgte cut-off værdier er baseret på de nuværende anbefalinger. Numeriske værdier er præsenteret i S2 tabel. For REG4 cut-off-værdien blev indstillet til 2 ug /l baseret på det højeste REG4 koncentration opnået fra raske mandlige og et større sæt ikke-mucinøse serumkontroller (S3 Table). En FC værdi 1 betragtes som et positivt resultat suggestiv for malignitet,

jeg

.

e

. højere koncentration markør end normalt til stede i raske individer. FC værdier ≤ 1 betragtes som en negative resultater. Den almindeligt anvendte serum biomarkører CA125 og HE4 viste forhøjede koncentrationer i sera af high-grade serøse kræftpatienter (FC 1) hvorimod REG4 koncentrationen forblev under cut-off værdi (FC 1) (Fig 4A). I sera fra mucinous kræftpatienter, koncentrationen af ​​CA125 og HE4 forblev lav. I disse tre prøver den REG4 niveau var 10-70 gange over afskæringsværdi. Skønt mængden af ​​prøver var lav, indikerer disse resultater, at REG4 er specifik for mucinøse typen tumorer og kan påvises ved høje koncentrationer i sera fra patienter med dissemineret mucinøs cancer. Foruden serumprøver blev REG4 koncentration målt fra cellefrie ascitesvæskerne af to patienter med mucinous tumorer (M1 og M2, S2 tabel). Begge prøver var positive (33 pg /ml og 187 pg /ml) for REG4 protein indikerer, at mucinøse tumorceller udskiller REG4 også ascitesvæsken.

(A) ELISA-analyse af koncentrationen REG4 protein i sera af patienter diagnosticeret med serøs (SER) eller mucinøse (MUC) ovariecarcinomer. (B) REG4 protein koncentrationer i en række præ- (dag -1) og postoperative serumprøver fra en patient med diagnosticeret mucinøs carcinoma.

For at bestemme korrelationen af ​​REG4, CA125 og HE4 koncentrationer til tumor byrde, blev serumprøver målt på forskellige tidspunkter fra en patient (M1) behandlet for dissemineret mucinøs karcinom (se S4 tabel til detaljerede resultater). Resultaterne (FC af afskæringsværdi, fig 4B) viste, at den høje koncentration af REG4 (FC = 73,6) påvist i den præoperative prøve (dag 0) faldt hurtigt efter kirurgi (dag 13; FC = 4,9) og opholdt sig på en lavt niveau omend højere end cut-off-værdien 2 ug /l. Koncentrationen af ​​CA125 angivet malignitet i de tre første tidspunkter (47 kU /l, 67 kU /l og 43 kU /l, henholdsvis), hvorefter den faldt under cut-off værdi på 35 kU /l, mens niveauerne af HE4 forblevet under cut-off værdi på 150 pM i alle prøver. Dette antyder, at REG4 koncentrationen korrelerer med tumorbyrde bedre end CA125 eller HE4 i mucinøs ovariecancer. Mens CA125 måling angivet malignitet i den præoperative prøve, HE4 måling undladt at påvise tumor i serumprøver.

Diskussion

æggestokkene neoplasmer forskellige i deres genetiske profiler, biologisk adfærd og resultat, og bør være behandles som særskilte sygdomme allerede under kirurgiske indgreb. En specifik præoperativ diagnose er således afgørende for valg af optimal behandling strategi. I øjeblikket er der ingen metoder til præoperativ diskrimination af kræft i æggestokkene undertyper og den specifikke diagnose er nået kun af perioperativ frosne sektion eller postoperativ histopatologisk analyse. Her foreslår vi REG4 som et lovende serum biomarkør til adskillelse mucinøse kræftformer fra andre epitelial kræft i æggestokkene undertyper. Ifølge vores resultater, kan serum REG4 analyse også har potentiale for differentiering mellem godartede og ondartede mucinøse neoplasmer og for opfølgning af mucinøse ovariecancerpatienter.

Den specifikke mucinøs slægt udtryk for REG4 inden æggestokkene neoplasmer blev påvist ved flere måder. blev opnået de første beviser fra

i silico

analyser som angivet meget specifik mRNA-ekspression profil REG4 i mucinøse kræftformer blandt forskellige æggestokkene tumor undertyper. REG4 udtryk blev yderligere valideret med QRT-PCR og western blotting fra friske frosne æggestokkene tumor vævsprøver stammer fra serøse og mucinous undertyper. Som forventet baseret på

i silico

data, REG4 blev stærkt udtrykt kun i maligne mucinøse tumorer i æggestokkene. Endelig bekræftede immunhistokemisk farvning af et tumorvæv microarray består af 185 tumor kerner fra godartede og ondartede serøs, endometroid og mucinøse neoplasmer begrænset udtryk i mucinøs afstamning. Interessant nok blev der ikke REG4 ekspression detekteret i mucinous cystadenomas tyder på, at immunhistokemisk REG4 analyse kan anvendes som en alternativ metode til at skelne mellem benigne og maligne mucinøse ovarietumorer. Alle mucinøse prøver blev bekræftet at være af primær ovariecancer tumor oprindelse. Vores prøvesæt indeholdt ikke eksemplarer af de mere sjældne former for mucinøs ovariecancer; såsom endocervikale /seromucinous eller foveolar typer. Derfor, for at bestemme den sande potentiale REG4 som en immunhistokemisk markør, ekstra analyser med bredere vifte af forskellige typer af prøver er nødvendige.

serum biomarkører CA125 og HE4 anvendes til æggestokkene kræftdiagnostik og opfølgning op. Disse markører hovedsageligt opdage serøse kræftformer [4,18,19], men er upålidelige til diagnosticering af ikke-serøse histotypes, især den mucinøs subtype [20,21]. Her har vi sammenlignet serumprøver fra patienter med high-grade serøs eller mucinøs ovariecancer. Vores resultater bekræfter med tidligere undersøgelser siden i vores prøve indstille både CA125 og HE4 var signifikant forhøjet i præoperative serumprøver af serøse carcinom patienter, men fortsat lav i de mucinous karcinomer. I modsætning hertil i alle tre mucinøse kræftpatienter sera blev REG4 niveau forhøjet mere end ti gange i løbet af den højeste værdi af kontrol sera. Serum REG4 niveau blev ikke forhøjet i nogen af ​​de serøse kræftpatienters serumprøver. Således kunne en kombination af REG4 med CA125 og HE4 give en mere omfattende markør panel til præoperativ diagnose af potentielt neoplastiske æggestokkene masserne, og muliggøre skelnen af ​​mucinøs ovariecancer fra andre kræft i æggestokkene histotypes. Men da nogle ondartede tumorer ikke viste positive REG4 farvning, vi kan ikke udelukke muligheden for, at en brøkdel af mucinøse kræftformer kunne forblive målbart i serum REG4 analyse. Da vores serum prøvetagning var begrænset, er der behov for yderligere analyser for at fastlægge den rolle, REG4 serum måling som en præoperativ metode til mucinøs ovariecancer diagnose.

REG4 tidligere er blevet angivet som en serum biomarkør i gastrisk , tyktarms og prostatakræft [22-24]. Således kan REG4 serumanalyser alene ikke kunne skelne mellem primær mucinøs ovariecancer og æggestokkene metastaser oprindelse fra mavetarmkanalen. På den anden side kunne tilsætning af REG4 analyse fra serum på siden af ​​CA125 og /eller HE4 tilvejebringe en mulighed for postoperativ opfølgning af mucinøse ovariecancerpatienter med en bekræftet diagnose. Indikation for dette kom fra en langsgående serie af serumprøver fra en patient med mucinøs cancer. I denne patient, blev den høje præoperativ serum REG4 koncentration reduceres hurtigt postoperativt og forblev lav under begivenhedsløs opfølgningsperiode. For at opnå konkret bevis på nytten af ​​serum REG4 i sygdomsbekæmpelse, dog bør testes flere patienter med langsgående serumprøver.

Funktionen af ​​REG4 i kræft i æggestokkene er dårligt forstået, og er ikke blevet bredt undersøgt. En nylig undersøgelse viser, at REG4 modulerer proliferation, apoptose, migration og invasion af ovariecancerceller, og har en vigtig rolle i tidlig ovariecancer carcinogenese [25]. Denne undersøgelse rapporterer også immunhistokemisk farvning af REG4 fra forskellige ovariecancer undertyper. Serum REG4 værdier blev ikke kvantificeret i nogen kræft i æggestokkene undertyper. I modsætning til vores resultater, positive REG4 farvning (fra svag til stærk) blev også fundet i serøse prøver. I vores materiale REG4 proteinekspression var enten meget høj eller meget lav, og blev ikke observeret nogen mellemliggende farvning. Men QRT-PCR-analyse af REG4 mRNA-ekspression fra friske frosne mucinøse ovarietumorer identificeret prøver med mellemliggende eller lav udtryk, men ingen ekspression blev påvist i prøver fra serøse tumorer i æggestokkene. Dette kan skyldes forskelle i antistof-specificitet og skalering af farvning styrke.

Afslutningsvis identificerede vi REG4 som en potentiel biomarkør for undertype specifik diagnose af mucinøs ovariecancer samt for sygdom opfølgning. Ifølge vores resultater REG4 protein udskilles i omløb af mucinøse ovarietumorceller og kan påvises med en ELISA-baseret test. Vi målte tre biomarkører fra patient sera; CA125, HE4 og REG4 og fundet høje koncentrationer af REG4 i præoperative prøver af mucinøse æggestokkene kræftpatienter, mens CA125 og HE4 ikke overbevisende opdage malignitet i disse prøver. Vores undersøgelse tyder på, at kombinere REG4 med CA125 og HE4 kunne give merværdi for præoperative diagnostik af æggestokkene masser af potentiale neoplastisk oprindelse, og muliggøre skelnen af ​​mucinøs ovariecancer fra andre ovariecancer undertyper med ikke-invasive metoder.

Støtte Information

S1 Table. Gener med mucinøs særligt udtryk profil i kliniske ovariecancer prøver

doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s001

(XLSX)

S2 Table. Detaljeret prøve beskrivelse og resultater af ELISA-assay

doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s002

(DOCX)

S3 Table. REG4 afskæringsværdi er indstillet baseret på det højeste REG4 koncentration opnået fra raske mandlige og et større sæt ikke-mucinøse serum kontroller

doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s003

(DOCX)

S4 tabel. Detaljerede resultater af serum ELISA-analyse på forskellige tidspunkter fra én patient

doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s004

(DOCX)

S1 Fig. .

I Silico

analyse af

REG4

mRNA-ekspression i databasen MediSapiens tværs maligne menneskelige vævsprøver (n = 15392)

doi: 10,1371 /journal.pone.0151590.s005

(PDF)

S2 fig. .

I Silico

analyse af

REG4

mRNA-ekspression i databasen MediSapiens tværs sunde menneskelige vævsprøver (n = 3082)

doi: 10,1371 /journal.pone.0151590.s006

(PDF)

tak

Vi vil gerne takke Sinikka Kollanus og Piia Mikkonen for fremragende teknisk bistand. Læge Kaisa Huhtinen er takkede for vejledning i data-analyse.