Den ZAK siRNA udviklede ikke forbi mål konsekvenser

For at sikre ZAK siRNA udviklede sig ikke forbi mål konsekvenser, vi brugte endnu en kollektion af siRNA rettet fra fem procent af ZAK mRNA. SiRNAmediated knock-down af ZAK hjælp snor 2 også undertrykte doxorubicin induceret fosforylering af p38 og JNK MAPK. Desuden siRNA-medieret knockdown af ZAK anvendelse sekvens 2 undertrykte doxorubicin forårsagede spaltning af PARP, men ikke så effektivt som sekvens 1. Derfor anvendte vi sekvens 1 i efterfølgende eksperimenter.

En invariant karakteristisk for ribotoxic årsager er deres evne til at hæmme protein oversættelse. For at konstatere, om doxorubicin inhiberer proteinsyntese, vi udsat HaCaT celler til doxorubicin i forskellige tidsrum, på hvilke tidspunkter celler blev udsat for leucin i 30 minutter. Løbende undersøgelse af celler ved mikroskopi vist mindre mobile frigørelse, selv 24 timer efter tilsætning af doxorubicin. Emetin blokke map E aktivering efter at have en høj dosis af doxorubicin. Transduktion af ribotoxic stressfaktorer af signaler, der fører til aktivering af SAPKs kræver, at ribosomerne være involveret i proteinsyntese på det tidspunkt, at celler udsættes for stressor. oral Syk inhibitor

Blokade af proteinsyntese ved hurtigt virkende hæmmere såsom emetin, forud for eksponering af celler til ribotoxic udløser, stopper transduktion af det tegn, der fører til aktivering af p38 og JNK MAPK. vist, at emetin blokeret proteinsyntese i under 1 minut efter tilsætningen til cellerne. For at finde ud af, om forudgående behandling af HaCaT celler med emetin kunne forhindre aktivering af p38 og JNK MAPK blev celler eksponeret for emetin eller køretøj inden tilsætningen af ​​doxorubicin. Vi anvendte en højere koncentration af doxorubicin til fremme af hurtig phosphorylering af p38 og JNK MAPK. Tillæg på emetin før udsættelse for doxorubicin helt blokeret fosforylering af JNK og p38 MAPK.

Doxorubicin undertrykt inkorporering af leucin med 50% helt og 1 time ved 2 timer. Vi har udført en lignende test med CDC, det er ikke virkelig en ribotoxic stressorand resulterer i aktivering af p38 og JNK MAPK gennem forskellige elementer. I modsætning til doxorubicin, blev phosphoryleringen af ​​p38 og JNK MAPK ikke undertrykt af emetin. Inhibitorer af ZAK blok doxorubicin induceret apoptose og MAP K initial i HaCaT celler. Et vigtigt mål i cancerkemoterapi ville være at reducere yderligere skade i normale væv og organer. Forvaltningen af ​​effektive doser af doxorubicin til kræftpatienter er ofte bundet til vækstpotentiale kardiotoksicitet og andre negative reaktioner.

Id af midler, der selektivt kunne undertrykker ødelæggelse af normalt væv ved doxorubicin kan muliggøre administration af større eller hyppigere doser af doxorubicin til kræftpatienter. Tidligere undersøgelser har vist, at inhibering af ZAK ved en eksperimentel lille molekyle inhibitor reducerer ribotoxic stressor induceret celledød. Ikke desto mindre, DHP 2 er ikke længere skabt af Eli Lilly og er ikke tilgængelig.

I et omfattende arbejde med at anerkende målet på 38 små molekyler kinase hæmmere, Karaman et al. bestemmes dissociationskonstanterne af en celle af 287 specifikke proteinkinaser, herunder ZAK. Sorafenib, en variabel kinase inhibitor, der er blevet anvendt ved behandling af renalcellecarcinom og hepatocellulært carcinom, viste sig at besidde en virkelig høj bindingsaffinitet for ZAK.