PLoS ONE: Biomarkører af TGF-β signalvejen og Prognose for pancreas Cancer

Abstrakt

Baggrund

transformerende vækstfaktor

(TGF) -β

signalvejen, kan fungere både som en tumorsuppressor og som en tumor promotor i bugspytkirtelkræft, afhængigt af tumor scenen og cellulære kontekst. TGF-β-vejen har været under intensiv undersøgelse som et potentielt terapeutisk mål i behandlingen af ​​cancer. Vores hypotese en korrelation mellem TGF-βR2 /Smad4 ekspression i tumoren, plasma TGF-β1 ligand niveau, genetiske variation i

TGF-B

pathway og prognose af kræft i bugspytkirtlen.

Metode

Vi undersøgte TGF-βR2 og Smad4 proteinekspression i biopsi eller kirurgiske prøver fra 91 patienter med pancreatisk duktalt adenokarcinom (PDAC) under anvendelse immunohistokemi. Plasmaniveau af TGF-β1 blev målt i 644 patienter med PDAC anvendelse af ELISA. Tyve-otte single nukleotid polymorfier (SNP) i

TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, TGF-βR1, TGF-βR2

, og

Smad4

gener blev bestemt i 1636 patienter med PDAC hjælp af Sequenom metoden. Sammenhæng mellem proteinekspression i tumoren, blev plasma TGF-β1 niveau, og genotyper med samlet overlevelse (OS) evalueret med Cox proportional regressionsmodeller.

Resultater

Udtrykket niveau af TGF-βR2 og Smad4 som en selvstændig markør var ikke forbundet med OS. patienter med både lav nukleare farvning af TGF-βR2 og høj nukleare farvning af Smad4, kan imidlertid have bedre overlevelse (

P

= 0,06). Den gennemsnitlige og mediane niveau af TGF-β1 var 15,44 (SD: 10.99) og 12,61 (interkvartile område: 8,31-19,04) ng /ml. Patienter med fremskreden sygdom og i den øverste kvartil vifte af TGF-β1 niveau havde betydeligt reduceret overlevelse end dem med lave niveauer (

P

= 0,02). En væsentlig sammenslutning af

Smad4

SNP rs113545983 med samlede overlevelse blev observeret (

P

0,0001).

Konklusion

Vores data giver værdifuld baseline information vedrørende TGF-β-vejen i bugspytkirtelkræft, som kan udnyttes i målrettede terapi kliniske forsøg. Høj TGF-β1 plasmaniveau,

Smad4

SNP eller TGF-βR2 /Smad4 tumor protein-ekspression kan foreslå en afhængighed af denne vej hos patienter med fremskreden kræft i bugspytkirtlen

Henvisning:. Javle M, Li Y, Tan D, Dong X, Chang P, Kar S, et al. (2014) biomarkører for TGF-β-signalvejen og prognose af kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 9 (1): e85942. doi: 10,1371 /journal.pone.0085942

Redaktør: John Souglakos, University Hospital of Heraklion og Laboratoriet for Tumor Cell Biology, School of Medicine, University of Crete, Grækenland

Modtaget: August 12, 2013; Accepteret: December 4, 2013; Udgivet: 20 Jan 2014

Copyright: © 2014 Javle et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af en bevilling fra Imclone Corporation /Eli Lilly og donormidler, en samling af midler fra patienter med kræft i bugspytkirtlen eller fra deres familier. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Denne forskning blev delvist finansieret af Imclone Inc (nu Eli Lilly). Forfatterne bekræfter, at denne finansiering sponsorering ikke ændrer deres tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Transforming growth factor-β (TGF-β) spiller en afgørende rolle i cellecyklusstop, apoptose, homeostase, sårheling og immunregulering. I tilfælde af cancere, TGF-β-signalering spiller en kontekst-afhængige dobbeltrolle, både som en tumorsuppressor i sygdommens tidlige stadium og som en tumor promotor i etablerede cancere [1]. Der er tre TGF-p-isoformer, TGF-β1, 2 og 3. Af disse TGF-β1 er den mest rigelige i mennesker. TGF-β-signalering sker på flere stadier, begyndende med aktivering og frigivelse af TGF-β1 efterfulgt af binding til tre højaffinitetsreceptorer (TGF-βR1, 2 og 3). TGF-βR1 og TGF-βR2 receptorer dimerisere efter binding TGF-β ved celleoverfladen [2]. Disse receptorer, når sekventielt aktiveret phosphorylere en familie af transkriptionsfaktorer, de SMADs. En nylig exome sekventering undersøgelse viste, at

TGF-βR2

er en af ​​de 16 mest muterede gener i bugspytkirtelkræft [3]. SMAD2 og SMAD3 aktiveres af TGF-βR1 og binder til den fælles partner Smad4. SMAD6 og SMAD7 er hæmmende SMADs der blokerer phosphorylering af SMAD2 eller SMAD3. Den aktiverede SMAD kompleks ved translokation til kernen regulerer transskriptionen af ​​flere TGF-p-afhængige gener, der kan have en kontekst-afhængige, tumor-undertrykkende eller progressiv rolle. Udover denne “kanoniske” TGF-β-signalvejen findes der en række forskellige intracellulære signalveje, der aktiveres af TGF-β uafhængigt af SMAD2 eller SMAD3 aktivering [4]. TGF-β-signalering er aktiveret i adskillige kendte humane cancere og er derfor et område med aktiv undersøgelse [5].

TGF-β-vejen er et af de 12 centrale signalveje, der er involveret i pancreascancer [6]. Mutation i mindst et af TGF-β pathwaygener forekommer i 100% af de pancreatiske tumorer. LOH ved 18q hvor Smad4 genet er lokaliseret forekommer i 90% af pancreascancer mens gen-deletioner og tab af protein-ekspression forekommer i 50% [7], [8]. Tab af Smad4 (DPC4) er blevet anvendt til at bestemme pancreas oprindelse i tilfælde af metastaser af ukendt primær. Det menes, at kompromitteret TGF-β-signalering kan forklare tumorudvikling snarere end dens initiering [4]. Imidlertid er den faktiske rolle Smad4 i bugspytkirtelkræft stadig betragtet som kontroversiel. For eksempel Biankin

et al

viste, at Smad4 udtryk tegnede sig for en dårligere prognose i tilfælde af kirurgisk resektabel sygdom; patienter med Smad4 overekspression ikke drage fordel af kirurgisk resektion i deres undersøgelse [9]. På den anden side, hurtige obduktion data antyder, at Smad4 tab er associeret med dissemineret sygdom [10]. Der er begrænsede data vedrørende TGF-β-receptor og Smad4 udtryk eller deres prognostisk betydning i avancerede bugspytkirtlen kræftpatienter. Endvidere er der ingen data vedrørende TGF-β1 plasmaniveauet i bugspytkirtelkræft og dens korrelation med prognose.

Genetiske variationer af TGF-p pathway-gener er blevet rapporteret i bryst-, ovarie-, colon-, ikke-småcellet lunge og tyktarmskræft og kan forudsige kræft modtagelighed eller har prognostisk betydning [11] – [15]. Men der er ingen data til vores viden i forhold til det samme i kræft i bugspytkirtlen. Vi hypotesen, at TGF-β-aktivering er almindelig i bugspytkirtelkræft og genetiske variationer af vejen, plasma TGF-β1 niveau og tumor TGF-βR2 eller Smad4 ekspression er associeret med kliniske resultater af pancreascancer. Identifikationen af ​​en kohorte bugspytkirtlen kræfttilfælde, hvor vejen er aktiveret kan potentielt føre til patientens valg for TGF-β-målrettet terapi.

Metoder

Patient Befolkning og Biospecimens

Alle patienter med patologisk bekræftet pancreas duktalt adenokarcinom (PDAC), og som underskrev et informeret samtykke til journal gennemgang og korrelationsmaalinger undersøgelser til forskning blev inkluderet. Den Institutional Review Board of MD Anderson Cancer Center godkendt undersøgelsen. Klinisk information om datoen for patientens diagnose, dato for død eller sidste opfølgning, tumor resektion status klinisk tumor stadie, og niveauet af serum kulhydrat antigen 19-9 (CA19-9) ved diagnose blev hentet fra patienter medicinske journaler. Vævsprøver, plasma og tumor-DNA blev hentet fra MD Anderson Tissue Banks.

Immunhistokemi

Immunhistokemi blev udført på formalin fikseret paraffinindlejret (FFPE) sektioner. De primære antistoffer mod TGF-βR2 (Novus Biologicals, LLC, Littleton, CO) og Smad4 (Proteintech Group, Inc. Chicago, IL) blev anvendt ved 1:350 og 1:450 fortyndinger hhv. Antistoffet kompleks blev påvist under anvendelse af ABC-kittet (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Nuklear og cytoplasma farvning blev registreret for begge mærker. Den farvningsintensitet blev scoret som 0 for negativ, 1 for svag, 2 for mellemliggende og 3 for stærk farvning. Procentdelen af ​​celler med positiv farvning blev bedømt som 0 for ingen, 1 for 1-50%, og 2 for 50%. Det endelige farvning score var produktet af intensitet og procentvise scoringer. Hver slide blev evalueret af to efterforskere (Drs. Dongfeng Tan og Yanan Li) og konsistente data fra begge Evaluatorerne blev anvendt i den endelige statistiske analyse.

plasmaniveau af TGF-β1

Plasma-niveau TGF-β1 blev målt ved immunovervågning Core Laboratory of MD Anderson hjælp af MSD® 96-Well MULTI-ARRAY®Human TGF-β1 Assay kit (Meso Scale Discovery, Rockville, MD). Alle prøver blev analyseret in duplo, og hver analyse havde en positiv og en negativ kontrol. Variansen af ​​de dobbelte prøver var under 10%. Alle patienter, der deltager i denne analyse blev rekrutteret til en sag kontrol undersøgelse på MD Anderson Cancer Center [16], [17]. Blodprøver blev indsamlet før kræftbehandling eller på tidspunktet for diagnose i 95% af tilfældene. Plasmaprøver blev opbevaret ved -80 ° C uden optøning før anvendelse i dette assay.

Genotypning

DNA blev ekstraheret fra perifere lymfocytter i størstedelen af ​​prøverne og fra FFPE i 27 prøver. Genotypebestemmelse brugte Sequenom metoden som tidligere beskrevet [18]. I alt 28 SNPs i

TGF-β1

,

TGF-β2

,

TGF-β3

,

TGF-βR1

,

TGF-βR2

Smad4

gener blev udvalgt med fokus på potentielt funktionelle SNPs, dvs. SNPs i den kodende region (ikke-synonyme eller synonyme), uoversatte region (UTR), promoter region og splejsning sites, eller ins /del og ramme-skift SNPs. SNP’er blev identificeret fra NCBI SNP-databasen og SNP500 Cancer database eller via litteraturgennemgang og funktionel analyse ved hjælp af F-SNP software (https://compbio.cs.queensu.ca/F-SNP/). Omkring 10% af prøverne blev analyseret dobbelt og inkonsistente data blev udelukket fra den endelige statistiske analyse.

Statistisk analyse

IHC score og plasma TGF-p1 niveauer blev præsenteret som gennemsnit ± standardafvigelse . Den gennemsnitlige forskel mellem grupperne blev sammenlignet ved anvendelse af t-test. De sammenslutninger af disse markører og OS blev analyseret ved hjælp af Kaplan Meier plot, log-rank test og Cox proportionel risiko modeller med justering for køn, race, alder, tumor stadie, og CA19-9 niveauer. Disse markører blev også analyseret som kategoriske variable ved hjælp af median eller kvartiler som cutoff-værdier.

Fordelingen af ​​genotyper blev undersøgt for Hardy-Weinberg ligevægt med goodness-of-fit chi-squared test. Genotype og allelfrekvens af SNP’er blev bestemt ved direkte gen tælling. De homozygote og heterozygote genotyper blev kombineret, hvis hyppigheden af ​​homozygot var meget lav, eller hvis begge genotyper havde samme tendens virkning [fx kortere samlet overlevelse (OS) i forhold til referent gruppe]. Associationen mellem genotype og OS blev estimeret ved anvendelse af Kaplan-Meier plot og log-rank test. Hazard ratio (HR) og 95% konfidensinterval (CI) blev estimeret ved hjælp af de multivariat Cox regression proportionale farer modeller. Alle statistiske test anvendte SPSS software (SPSS Inc., Chicago, IL).

P

værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Falsk positive fund i forbindelse med flere tests blev kontrolleret af Bonfferoni korrektion.

Resultater

Undersøgelsen befolkning blev identificeret fra en case-kontrol undersøgelse af kræft i bugspytkirtlen udført på University of Texas MD Anderson Cancer Center fra 1999 gennem 2012 [16], [17]. Tre grupper af patienter blev identificeret: 1) 120 patienter havde tilstrækkelig biopsi eller kirurgisk prøver til immunhistokemi; 2) 644 patienter havde blodprøver for plasma TGF-β1 måling; og 3) 1636 patienter havde tilstrækkelig DNA-prøver til rådighed for genotypning. De demografiske og kliniske karakteristika for de tre studiepopulationer er beskrevet i tabel 1. alder, køn og race /etnisk fordelinger af patienterne var repræsentative for MD Anderson patientpopulation. Gennemsnitsalderen er 60,6, 61,4 og 62,1 år for patienter indgår i IHC, ELISA og genotypning undersøgelse, hhv. Mænd bestod 72,5%, 61,5% og 59,0% af de tre studiepopulationer. Mere end 85% af forsøgspersonerne var ikke-spansktalende hvide. Næsten 74% af patienterne i IHC gruppe havde metastatisk sygdom og derfor vævsprøver anvendes til IHC var for det meste biopsiprøver [Stage II: 8 (8,8%); Stage III: 16 (17,6%); Stage IV: 67 (73,6%)]. Oplysninger om tumor klasse var til rådighed i 60 prøver, hvoraf 20 var moderat differentieret og 40 var dårligt differentierede tumorer.

Protein Expression

I alt 91 prøver blev farvet for TGF βR2 og Smad4. Kvantitativ evaluering blev opnået i 88 prøver for TGF-βR2 og 81 prøver til Smad4 (fig. 1). Nukleare og cytoplasma farvning blev observeret i henholdsvis 81 (92%) og 87 (99%) prøver for TGF-βR2 og i 47 (58%) og 72 (89%) prøver til Smad4 (fig. 1). Den overordnede IHC score for hver markør var ikke forbundet med OS (data ikke vist). Patienter med en højere nuklear score farvning for TGF-βR2 havde en relativt kortere OS end dem med en lavere score (gennemsnitlig overlevelsestid [MST] 12,0 versus 8,6 måneder, tabel 2), men denne forskel var ikke statistisk signifikant. Nuklear farvning af Smad4 var til stede oftere (16/20, 80%) i dårligt differentierede tumorer end i moderat differentierede tumorer (19/40, 47,5%) (

P

= 0,016, χ

2 test ). Endvidere, når TGF-βR2 og Smad4 nuklear ekspression blev analyseret i kombination, bemærkede vi, at patienter med lav ekspression af TGF-βR2 og høj ekspression af Smad4 havde en signifikant længere OS end andre (fig. 2), selv om denne forskel ikke var statistisk signifikant efter justering for andre kliniske prædiktorer (tabel 2)

a:. Positiv nukleare udtryk for TGF-βR2 i et moderat differentieret duktalt adenokarcinom i bugspytkirtlen (Forstørrelse: 10 × 40). B: Positiv nukleare udtryk for Smad4 i moderat differentieret duktalt adenokarcinom i bugspytkirtlen (Forstørrelse: 10 × 40).

Nuklear farvning score 0-1 defineres som lav for TGF-βR2 og en score 0 så lavt for Smad4. Rød linje: TGF-βR2 er høj og Smad4 er lav (HL); sorte linje: både høj (HH); grønne linje: begge er lave (LL); lilla linje: TGF-βR2 er lav og Smad4 er høj (LH). De median overlevelse er 7,8, 8,6, 11,3 og 15,6 måneder for HL, HH, LL og LH-grupper, hhv. Log-rank test P-værdier og resultater af Cox regressionsanalyse er vist i tabel 2. Således kan TGF-R2 /Smad4 forholdet være prognostisk, med lave værdier svarende til en forbedret overlevelse.

Plasma TGF-β1 Level

plasmaniveau af TGF-β1 blev målt i 644 patienter. Den gennemsnitlige og mediane niveau af TGF-β1 var 15,44 (SD 10.99) og 12,61 (interkvartile område: 8,31-19,04) ng /ml. Niveauet af TGF-β1 var relativt højere hos patienter med lokaliseret tumor end dem med avancerede tumorer. Middelværdien ± SD af TGF-β1 var niveauet 17,2 ± 14,3, 13,9 ± 8,7 og 15,5 ± 10,0 ng /ml hos patienter med lokaliseret lokalt fremskreden og metastatiske tumorer, henholdsvis (

P

= 0,02, ANOVA). Imidlertid blev niveauet af TGF-β1 ikke forbundet med OS hos patienter med lokaliseret tumor (tabel 3) eller på hele undersøgelsespopulationen (MST = 12,9 og 11,1 måneder for dem i de nedre kvartiler versus dem i den øverste kvartil interval,

P

= 0,78, log-rank test). Imidlertid havde patienter med lokalt fremskreden eller metastatisk sygdom og i den øverste kvartil vifte af TGF-β1 niveau væsentligt reduceret overlevelse end deres kolleger (tabel 3). TGF-β1 forblev som en væsentlig indikator i en Cox regressionsmodel med justering for demografi og andre kliniske faktorer.

Genotypning

Genotypning blev udført i 1636 patienter. Den rapporterede mindre allel frekvens og potentielle funktionelle betydning af de 28 testede SNP’er er beskrevet i tabel 4. Ingen variant allel blev påvist i ni SNP’er. Blandt de seks fælles SNPs med mindre allel frekvens større end 5%, tre fulgte Hardy Weinberg ligevægt (HWE) og tre afveget fra HWE (tabel 2). Den genotype fordeling og samlet overlevelse tid ved genotype af de 19 informative SNPs er præsenteret i tabel 5. En væsentlig sammenslutning af

Smad4

SNP rs113545983 med OS blev observeret (panel A, fig. 3), og foreningen var stærkere hos patienter med fremskreden sygdom (Paneler C og D, fig. 3) end dem med lokaliseret sygdom (felt B, fig. 3). Mutant G allel af SNP rs113545983 forblev som en væsentlig prædiktor for død i Cox regressionsmodel efter justering for scenen og resektion status blandt alle patienter (HR: 1,54, 95% CI: 1,21-1,96,

P

0,001). Ingen andre SNPs viste signifikant sammenhæng med OS. TGF-βR2 SNP rs2248048 havde en svag sammenhæng med OS uden statistisk signifikans (

P

= 0,09, log rank test)

Blå linje:. AA genotype; grønne linje: AG /GG genotype. AA-genotypen var forbundet med en forbedret overlevelse i hele studiepopulationen. På undergruppe analyse, denne overlevelse forskel var mere relevant for fremskreden sygdom fase. P-værdier ved log-rank test er 0,0001, 0,369, 0,007, og 0,031 til paneler A, B, C og D, henholdsvis Vejviser

Diskussion

Vores mål i den aktuelle undersøgelse var at undersøge biomarkører i TGF-β-vejen, der kunne have prognostisk værdi og potentielt prædiktiv værdi for målrettet behandling med inhibitorer. Vi forhørt tumor biorepository på MD Anderson Cancer Center og undersøgt arkivmateriale, herunder DNA, plasma og prøver tumor væv for SNP’er, TGF-β1 plasmaniveauet og protein udtryk for TGF-βR2 og Smad4. Vi observerede, at patienter med lav ekspression af TGF-βR2 og høj ekspression af Smad4 i deres tumorer havde en signifikant længere OS end andre undergrupper i vores undersøgelse. Vi bemærkede også, at patienter med fremskreden sygdom og høj TGF-β1 plasmaniveau væsentligt havde reduceret overlevelse end dem med et lavere niveau af TGF-β1. Endelig har vi fundet en signifikant sammenhæng på

Smad4

SNP rs113545983 med patientens overlevelse. Disse observationer giver værdifulde baseline oplysninger om TGF-β-signalvejen i bugspytkirtelkræft, som kan anvendes i fremtiden målrettet terapi kliniske forsøg. TGF-β-signalvejen omfatter liganderne og receptorerne; og ligand-receptor-interaktioner fører til signaltransduktion via SMADs. Forrige IHC analyse har vist tilstedeværelsen af ​​ligand TGF-β1, TGF-β2 og TGF-β3 i PDAC cancerceller og tilstedeværelsen af ​​TGF-β2 blev forbundet med fremskreden tumor stadium [19]. TGF-βR2 mRNA blev udtrykt i de fleste cancerceller og forøgede niveauer af TGF-βR2 er blevet foreslået at have en rolle i reguleringen af ​​human pancreascancer cellevækst [20].

TGF-β2R

Smad4

genet blev muteret i 4% og 50% af den humane PDAC henholdsvis [21]. Manglende Smad4 ekspression i tumoren er blevet forbundet med en mere aggressiv sygdom [22]. Der er meget begrænsede data, der undersøger den prognostiske værdi af TGF-β pathway proteiner i avancerede bugspytkirtlen kræftpatienter. Selvom vi ikke fandt en signifikant sammenhæng mellem Smad4 og TGF-βR2 udtryk individuelt med prognose, vi observeret, at TGF-β2R og Smad4 proteinekspression blev påvist i 81% og 47% af tumorer og patienter med lav ekspression af TGF-βR2 og høj ekspression af Smad4 havde en signifikant længere OS end andre undergrupper i vores undersøgelse. Hua et al, rapporteret lignende resultater i en mindre retrospektiv undersøgelse af patienter med fremskreden kræft i bugspytkirtlen [23]. En tidligere undersøgelse fra vores institution foreslog, at Smad4 tab korrelerer med komplikationer hos patienter med lokalt fremskreden kræft i bugspytkirtlen modtager gemcitabin, oxaliplatin og cetuximab [24]. Som tidligere nævnt, blev Smad4 tab forbundet med formidling sygdom i lokalt avancerede og metastatisk sager bugspytkirtelkræft af Iacobuzio-Donahue, et al i en obduktion serie [10]. På den anden side, har en litteratur-baserede metaanalyse af biomarkører i drevet bugspytkirtelkræft ikke understøtter den prognostiske værdi af Smad4 i kirurgisk resektabel sygdom [25]. Disse resultater stemmer overens med en scene-afhængig rolle af TGF-β-vejen.

Endvidere fandt vi, at patienter med fremskreden sygdom og høj TGF-β1 plasmaniveau havde signifikant nedsat overlevelse end med en lavere TGF β1 niveau. Denne forening blev ikke set hos patienter med lokaliseret sygdom. En tidligere undersøgelse har vist, at mangel på TGF-β1-ekspression i tumorvæv var forbundet med øget postoperativ overlevelse [19]. Årsagen til associationen mellem høje TGF-β1 plasmaniveauet og ringe overlevelse på fremskreden sygdom stadium (og ikke med tidlig fase sygdom) er uklar. Disse resultater er konsistente med præklinisk data, der tyder på, at tab af vækstinhiberende reaktion på TGF-β-signalering varierer direkte med ondartet trin af tumoren og de mere aggressive former faktisk skifter til autokrine og /eller parakrin vækst stimuleres af TGF, β. Tumorer kan også udskille TGF-β1, der fører til ændret antitumorimmunitet [26], [27]. Så vidt vi ved, er der ingen kendte data, der undersøger den prognostiske rolle af TGF-β1 plasmaniveauet i bugspytkirtelkræft. Tidligere undersøgelser i bryst-, prostata-, esophageal og blærecancer indikerer en sammenhæng mellem høj TGF-β1 plasmaniveauet og dårlig prognose [28] – [31]. Overensstemmelse med disse rapporter og den relativt store stikprøvestørrelse på vores undersøgelse øger styrken af ​​vores resultater. På grund af de udfordringer med hensyn til målvævene i patienter med fremskreden sygdom, kan plasma biomarkører for TGF-β1 pathway have en større klinisk værdi.

Genetiske variationer af TGF-β-vejen er blevet knyttet til prognose og overlevelse i lungekræft med en anden undersøgelse foretaget på vores institution. Hos patienter, der fik platinbaseret kemoterapi; BMP-2: rs235756 og SMAD3: rs4776342 var signifikant forbundet med overlevelse [15]. Der er dog ingen undersøgelser i bugspytkirtelkræft korrelere genomiske variationer af denne vej med prognose. Vi bemærkede en signifikant sammenhæng mellem

Smad4

SNP rs113545983, et synonym SNP, med OS i denne undersøgelse. Patienter der bærer variant allel havde signifikant kortere OS og øget risiko for død efter justering for andre kliniske prædiktorer. Denne SNP er en synonym SNP, der ikke producerer ændrede kodende sekvenser og aminosyre-substitution. Imidlertid har en tidligere undersøgelse viste at et synonym SNP kunne resultere i et proteinprodukt med ændret lægemiddel og inhibitor interaktioner 32. Således funktionelle konsekvens af denne SNP skal undersøges. Det er også muligt, at denne SNP er i bindingsuligevægt med andre funktionelle SNP’er i dette gen eller nogle vigtige gener i dette kromosom placering. Yderligere undersøgelser vil bidrage til at afgøre, hvordan denne SNP er funktionelt knyttet til Smad4 signalering transduktion og overlevelse i bugspytkirtlen kræftpatienter.

Undersøgelsen har flere begrænsninger. På grund af den begrænsning af vævsprøver og den lave MAF SNP valgt i undersøgelsen, kunne vi ikke undersøge sammenhængen mellem genotyper, plasma markør niveau og væv markører. Vi målte kun nogle få udvalgte markører fra de mange molekyler, der er involveret i denne komplekse signalvej. Ikke desto mindre er vores data give værdifulde baseline oplysninger om denne vej udtryk i bugspytkirtelkræft, som kan udnyttes i målrettede terapi kliniske forsøg. Baseret på de ovenstående resultater kan det antages, at påvisning af høj TGF-β1 plasmaniveau, SMAD4SNP rs113545983 eller høj TGF-βR2 /Smad4 tumor proteinekspression forholdet kan foreslå en afhængighed af denne vej hos patienter med fremskreden kræft i bugspytkirtlen, og denne delmængde kan potentielt drage fordel af TGF-β-målrettet terapi.