PLoS ONE: østrogen-receptor 1 genekspression og dens Kombination med østrogen receptor 2 eller Aromatase Expression Forudsiger overlevelse i ikke-småcellet lungekræft

Abstrakt

De biologiske roller østrogen receptor 1 (

ERS1

), østrogen receptor 2 (

ERS2

), og aromatase (

CYP19A1

) gener i udviklingen af ​​ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) er uklar, ligesom brugen af ​​deres ekspression som prognostisk faktor. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge den prognostiske værdi af østrogenreceptorer og aromatase-mRNA-ekspression, sammen med aromatase proteinkoncentration, i resektion NSCLC-patienter. Tumor- og ikke-tumor lung vævsprøver blev analyseret for mRNA-ekspression af

ERS1

,

ERS2

CYP19A1

ved RT-PCR. Aromatase koncentration blev målt med en ELISA. I alt 96 patienter blev inkluderet.

ERS1

ekspression var betydeligt højere i ikke-tumorvæv end i tumorprøver. To genekspression kategorier blev skabt for hvert gen (og protein): høj og lav.

ERS1 høj

kategori viste øget samlet overlevelse (OS) i forhold til den lave udtryk kategori. Aromatase proteinkoncentration var signifikant højere i tumorprøver. Højere

ERS1

udtryk i tumorvæv var relateret til længere samlet overlevelse. Analysen af ​​genekspression kombinationer giver evidens for længere OS når begge

ERS1

ERS2

er stærkt udtrykt.

ESR1

, alene eller i kombination med

ERS2

eller

CYP19A

en, er den mest bestemme prognostiske faktor inden for de analyserede 3 gener. Det ser ud til, at

ERS1

kan spille en rolle i NSCLC prognose, alene eller i kombination med andre gener, såsom

ERS2

eller

Cyp19a1

.

ERS2

i kombination med aromatase fusion kan have en lignende funktion

Henvisning:. Aresti U, Carrera S, Iruarrizaga E, Fuente N, Marrodan I, de Lobera AR, et al. (2014) østrogen receptor 1 genekspression og dens Kombination med østrogen receptor 2 eller Aromatase Expression Forudsiger overlevelse i ikke-småcellet lungekræft. PLoS ONE 9 (10): e109659. doi: 10,1371 /journal.pone.0109659

Redaktør: Harriet Wikman, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Tyskland

Modtaget: April 8, 2014 Accepteret: September 2, 2014; Udgivet: 13. oktober 2014

Copyright: © 2014 Aresti et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at for godkendte årsager, nogle adgangsbegrænsninger anvendelse på de data, der ligger til grund for resultaterne. Offentlig aflejring af datasættet ville bryde etiske overholdelse, da datasættet indeholder identificere menneskelige information. En de-identificerede sæt data er tilgængelige efter anmodning, og anmodninger kan sendes til López-Vivanco på [email protected]

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af en bevilling (proyect BIO07 /CA /012 ) fra den baskiske Broadcasting Corporation (EITB; www.eitb.com) Cancer Marathon. Finansiering til at betale Open Access publicering gebyrer for denne artikel blev leveret af Instituto de Salud Carlos III i det spanske økonomi- og konkurrenceevne (tilskud: RD06 /0020/0067, ISCIII). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Under statistikker fra USA som et eksempel på udviklingen af ​​lungekræft i de udviklede lande, er det klart, at forebyggelse og helbredelse af denne særlige form for kræft skal forbedres. Prognoserne for 2014 er 159,260 dødsfald på grund af lungekræft (27,2% af alle kræftdødsfald), mens denne kræft forårsager flere dødsfald end summen af ​​de tre næste mest almindelige kræftformer (tyktarm, bryst og prostata) [1]. Endvidere til udviklingen i lungekræft femårige overlevelsesrater, anslået være omkring 12%, 13% og 16% i perioderne 1975-1977, 1987-89 og 2001-2007 henholdsvis [2], har været klart utilfredsstillende.

østrogener er involveret i udviklingen af ​​flere typer af kræft: bryst, endometrie, ovarie, skjoldbruskkirtlen, og lunge [3] – [8]. I lungen, østrogener inducerer celleproliferation gennem aktivering af visse vækstfaktor-gener, såsom epidermal vækstfaktor og insulin-lignende vækstfaktor, mediatorer af mitogenese i lungetumorer [9]. De udøver deres funktion gennem to forskellige specifikke østrogenreceptorer, østrogenreceptor-a (ERa) og østrogenreceptor-β (ERp), medlemmer af den nukleære receptor superfamilien af ​​transkriptionsfaktorer [10], og gennem to forskellige veje, genomiske og ikke- genomisk, med de samme biologiske virkninger: proliferation, vækst, apoptose, differentiering og angiogenese.

ERS1

ERS2

gener udtrykkes i de fleste af de mere almindelige kræftformer, lunge, bryst, mave-og endokrine, men deres rolle kan variere meget afhængig af tumor typen [10] – [ ,,,0],16].

Produktion af de to mest talrige og vigtige østrogener (estradiol og estron) katalyseres af cytochrom P450 19A1 (aromatase), produktet fra

CYP19A1

gen, der er aktiv i lunge væv. Derudover er der en tilbagekoblingssløjfe, fordi østrogener inducerer aktiveringen af ​​epidermal vækstfaktor, som fører til en stigning i aromataseaktivitet ekspression og aktivitet [17], til gengæld øge østrogenproduktion. Det er klart, disse kendsgerninger viser, at aromatase spiller en bemærkelsesværdig rolle i udviklingen af ​​kræft, og det er blevet en hypotese, at dets forhøjede udtryk indikerer en dårligere prognose [18].

Dette arbejde forsøge at bekræfte (eller afvise), hvis nogen af disse gener udtryk er nyttigt som prognostisk redskab og at afklare uenighed mellem tidligere studier primært baseret i immunhistokemi (IHC) metoder [6], [12], [19], og nyere dem, der har brugt real time PCR teknik til at bestemme gen udtryk [20], [21]. I denne forstand forskellige udtryk niveauer grupper vil blive etableret, og i relation til overlevelse.

Materialer og metoder

1.-etiske retningslinjer

Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité for Klinisk Forskning af Cruces Universitetshospital (CEIC /Hospital de Cruces) og blev udført i henhold til erklæringen fra Helsinki. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver patient efter fuld forklaring af formålet med og karakteren af ​​alle procedurer, der anvendes.

2.-Patienter

Blandt 110 rekrutterede patienter, kun 96 patienter opfyldte udvælgelseskriterierne. At indgå patienter skal diagnosticeret med NSCLC og gennemgik resektion kirurgi; patienter, der fik neoadjuverende kemoterapi og patienter, hvis primære tumor blev ikke placeret i lungerne, blev udelukket. Deres kliniske karakteristika er beskrevet i tabel 1. For hver deltager, tumor og frisk vævsprøver ikke-tumor, blev fremstillet ved anatomopathologist. Prøverne blev opnået gennem makro dissektion og ikke-tumorvæv svarede til tilstødende normale lungevæv.

3.-Teknikker

3.1-REAL TIME RT-PCR.

Total RNA fra tumor- og ikke-tumorvæv blev ekstraheret med RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen). Et-trins real-time RT-PCR’er blev udført under anvendelse Platinum kvantitativ RT-PCR Thermoscript One-Step System og 7900HT Hurtig Real-Time PCR System (begge fra Life Technologies). Østrogen receptorer og aromatase udtryk analyser samt RPLPO (endogen kontrol) blev købt fra Life Technologies:

ERS1

/Hs00174860_m1,

ERS2

/Hs00230957_m1,

CYP19A1

/Hs00903411_m1 og RPLPO /NM_053275.3. Hvert assay forstærker en række forskellige transkripter. Detaljerede oplysninger om transkript længde, associeret protein længde, probe exon-exon grænse, amplicon amplifikation og protein funktionalitet er inkluderet i File S1.

Totalt RNA blev tilsat til opnåelse af en koncentration på 100 pg /pl i et slutvolumen 10 pi reaktion. En standard tid /temperatur profil blev anvendt. En positiv kontrol blev inkluderet i hver plade: RNA-prøver ekstraheret fra MCF-7-celler (HTB22), købt (november 2009) fra ATCC. HTB22 blev valgt som reference (kalibrator) prøve for sammenlignende kvantisering (af Delta Delta Cq metoden). Genekspression rapporteres som RQ-værdier opnået fra sammenlignende kvantificering, hvor RQ = Normalized Relativ Mængde = 2

-.. (ΔΔ Cq)

3.2-ELISA

enzymmaerket assay kits til human aromatase (ARO) (USCN Life Science Inc.) blev anvendt til aromatase detektion protein. Protein blev ekstraheret fra tumor og ikke-tumorprøver, følger denne kit protokol. Vedrørende denne procedure, væv var tilgængelige fra 85 patienter. Proteinkoncentration blev målt i en Polar Star Microplate Reader (BMG Labtech) under anvendelse af bicinchoninsyre protein metode. Data blev analyseret ved hjælp af

Fire Parameter Logistic Fit

, udviklet af MyAssays, Analysis Software Solutions.

4-Statistisk analyse

For statistisk analyse, SPSS /V.17, Graphpad -Prism /v.3 og MedCalc /12.7.5 softwarepakker blev udvalgt. Kort fortalt blev disse brugt til beregning af beskrivende statistik, og til at udføre: Kolmogorov-Smirnov test for normalitet, ikke-parametriske tests (Mann-Whitney, Kruskal Wallis), når man sammenligner medianer, korrelation, overlevelse og Cox regressionsanalyse. Alle tests var to-sidet og signifikansniveau var 0,05. For overlevelse analyse blev Kaplan-Meier kurver konstrueret og betydningen blev vurderet ved hjælp af Log Rank (Mantel-Cox) test. For at vurdere indflydelsen af ​​variable på samlet overlevelse, blev udført Cox regressionsanalyse. Først blev parvise sammenligninger foretaget og eventuelle variabler med en signifikans på mindre end 0,2, blev tilbageholdt i en anden generel analyse. Derefter blev de fjernet, en efter en, hvis betydning overskredet tærsklen på 0,05. Analysen blev gentaget efter fjernelse af hver variabel. Den samlede overlevelse (OS) blev beregnet fra tidspunktet for kirurgi /resektion til datoen for sidste opfølgning eller død, i måneder.

Resultater

1-

ERS1

Den første sammenligning mellem ikke-tumor og tumorvæv

ERS1

niveauer fået en p 0,0001, betragtes som yderst signifikant. Statistik over RQ sammenligning resultater er vist i tabel 2. Som det kan ses,

ERS1

genekspression var signifikant lavere i tumor end ikke-tumorvæv.

Til analyse af forholdet mellem overlevelse og

ERS1

genekspression, prøver blev opdelt i to grupper, ifølge medianen ekspressionsniveauerne (Lav til lavere værdier end medianen, blev høj for højere værdier end median værdier Kaplan-Meier overlevelseskurver beregnet for både , afslører store forskelle inden for tumor prøver;. Log Rank = 0,050, figur 1a for tumorvæv, den mediane overlevelse var 28,0 måneder i den nederste

ERS1

udtryk gruppen og 34,0 måneder i højere

ERS1

udtryk gruppe (tabel 3), en Mann-Whitney test viste, at dette er en væsentlig forskel, p = 0,042, der peger på en sammenhæng mellem højere

ERS1

genekspression i tumorvæv og længere patient overlevelse .

patientprøve er opdelt i lav og høj (lavere og højere udtryk end medianen). Paneler: a.)

ERS1

ERS2

, b)

CYP19A1

og ARO, og c),

ERS1 + ERS2

og CYP19A1 + ARO

for at bekræfte eller udelukke, på grundlag af overlevelse resultater om genekspression blev ændret i tumorprøver blev den samme analyse udført for ikke-tumor prøver fra de samme patienter, og ingen signifikante forskelle i overlevelse blev fundet mellem disse undergrupper; Log Nummer = 0,524; . P = 0,815

ERS1

udtryk i tumorprøver var den eneste variabel, inden for de tre gener og proteiner, som var signifikant når der udvikles en Cox regressionsmodel: Den samlede signifikansniveau var 0,031 for modellen, p = 0,027 for

ERS1

tumor mRNA-niveau med en Exp (B) af 0,002. P-værdi for ikke-tumor vævsprøver var 0,529, ikke signifikant, så det ikke var inkluderet i modellen. Som forholdet tumor /ikke-tumor, der gik første runde, p = 0,105, men så synes ikke at være væsentlig. Bare histologi (herunder blot adenokarcinomer og skællede-celle karcinomer) var også signifikant med ap = 0,007 og en Exp (B) på 0,462.

2-

ERS2

ERS2

genekspression blev sammenlignet i tumoren /ikke-tumorvæv og i dette tilfælde fandtes ingen signifikante forskelle (Mann-Whitney-test, p = 0,364). Det kan ses i tabel 2, genekspression resultaterne var meget ens i de to typer væv. Analysere overlevelse som en funktion af ERS2 genekspression niveau som tidligere (figur 1a), blev ikke fundet nogen signifikante forskelle mellem lav- og høj ekspression undergrupper af tumor (p = 0,253) eller ikke-tumor (p = 0,078) prøver. Det var en bemærkelsesværdig tendens i retning af en bedre overlevelse hos patienter med lavere ERS2 niveauer i deres ikke-tumor vævsprøver, hvilket tyder på en mulig lavere udtryk /længere overlevelse forening.

holde disse data i tankerne, betydningen af ​​forskelle i OS blev også vurderet med en Mann-Whitney-test. Som det fremgår af tabel 3, mønstret i tumorprøver var det omvendte af, at i ikke-tumor prøver: median OS satser i lavt /tumor gruppe var betydeligt lavere end i høj /tumor gruppe, selv om disse forskelle ikke var signifikante (p = 0,11). I modsætning hertil median satser var betydeligt højere i den lave /ikke-tumor gruppe end den høje /ikke-tumor-gruppe, 33,1 versus 25,9 måneder respektivt og denne forskel var signifikant (p = 0,024).

Ved at kombinere tumor og ikke-tumor og lav og høj klasser, er fire kategorier oprettet. Forskellene i OS mellem disse kategorier var signifikante (Kruskal Wallis p = 0,017; Log Rank = 0,021), med den laveste overlevelsesrate i kategorien lav tumor + høj non-tumor, dvs. patienter med

ERS2

/lav ekspression i tumorvæv og

ERS2

/høj ekspression i ikke-tumorvæv (median = 16,6 måneder), og den højeste overlevelsesrate i høj tumor + lav ikke-tumor, dvs. dem med

ERS2

/høj ekspression i tumorvæv og

ERS2

/lav udtryk i ikke-tumorvæv (median = 36,9 måneder).

Ingen af ​​

ERS2

relaterede variabler var inkluderet i Cox model, fordi deres oprindelige Cox univariate test overstige 0,2 tærskel:. p = 0,278, p = 0,990 og p = 0,691 for tumorvæv, ikke-tumorvæv og forholdet tumor /ikke tumor henholdsvis

3-

CYP19A1

/aromatase

Som rapporteret i tabel 2, blev aromatase målt både på mRNA og protein niveauer (ng /ml). Der var ingen signifikante forskelle mellem tumor og ikke-tumor prøver ved måling mRNA, p = 0,32. I modsætning hertil sammenligne proteinniveauer forskellen viste sig at være yderst signifikant, p 0,001. For at analysere nogen sammenhæng mellem de enkelte mRNA ekspression niveauer og proteinkoncentrationer en korrelation blev udført, men ingen signifikante resultater blev opnået (Spearman, p = 0,133).

For at overleve analyse, igen, det samlede patientprøve blev delt i lav og høj (lavere og højere end median) udtryk /koncentration grupper. Kaplan-Meier tests ikke afsløre eventuelle signifikante forskelle enten for genekspression, tumorprøver p = 0,154 (figur 1b), ikke-tumorprøver log-rank p = 0,578, eller protein koncentration, tumorprøver p = 0,266 (figur 1b) og ikke-tumor prøver log-rank p = 0,532

Selv i overlevelse analyse var der ingen signifikante forskelle, tabel 3 viser, at mønstret i genekspression og protein koncentrationen var nogenlunde ens:. Lav udtryk grupper tendens til at have en længere overlevelse, mens høje ekspressionsniveauer grupper tendens til at have kortere overlevelse. Inddele den samlede prøve i tidligt stadium NSCLC (I-II) og sent (III-IV) NSCLC, var der en signifikant forskel i overlevelse i tilfælde debuterende mellem lav (median = 31,4 måneder) og høj (median = 25,0 måneder) aromatase genekspression grupper: Log Rank = 0,07; Mann-Whitney p = 0,016. Der var ikke sådan forskel, når ikke-tumorvæv prøver blev sammenlignet, eller overvejer aromatase proteinkoncentration.

Som det skete med

ERS2

ingen af ​​

CYP19A1

eller aromatase protein relaterede variabler indgik i den endelige Cox regressionsmodellen, selv om en af ​​dem passerede indledende analyse (p 0,200):

CYP19A1

tumorvæv p = 0,966,

CYP19A1

ikke-tumorvæv p = 0,810,

CYP19A

en tumor /ikke tumor-forholdet p = 0,727, aromatase tumorvæv p = 0,240, aromatase ikke-tumorvæv p = 0,692 og aromatase tumor /ikke-tumor-forholdet p = 0,038.

4-kombinerede genekspression-overlevelsesanalyse

for nylig er det blevet vist [22], at kombinationer af forskellige genekspression resultater i detaljer kan definere den generelle situation i NSCLC. Som tidligere en given variabel er opdelt i lave og høje grupper, og derefter, hvis to variable kombineres, kan defineres, fire undergrupper; for

ERS1

ERS2

, undergrupperne er Lav-

ERS1

+ Lav-

ERS2

, Lav-

ERS1

+ høj-

ERS2

, høj-

ERS1

+ Lav-

ERS2

og High

ERS1

+ High

ERS2

. Når man sammenligner prøver, se tabel 4, dem med det højeste udtryk for de to gener var dem med størst OS. Forskellen mellem lav-

ERS1

+ Lav-

ERS2

og High

ERS1

+ High

ERS2

grupper var signifikant, Mann-Whitney test p = 0,025 imidlertid en Kaplan-Meier OS test var ikke, p = 0,057 (fig 1c). Medianer for undergrupper Lav-

ERS1

+ High

ERS2

og High

ERS1

+ Low

ERS2

(26.63 og 28.80 måneder henholdsvis) var tæt på til dem for Lav-

ERS1

+ Lav-

ERS2

gruppe; selvom sammenligninger af de fire kategorier ikke afsløre eventuelle signifikante forskelle, det opnåede mønster tendens til at foreslå, at høj ekspression af de to gener er forbundet med bedre overlevelse.

Så,

CYP19A1

ekspression og aromatase proteinkoncentration blev overvejet. Der var ingen signifikante forskelle mellem Low

CYP19A1

+ Low-aromatase protein og High

-CYP19A1

+ Høje aromatase protein grupper (tabel 4). I dette tilfælde højere ekspression og koncentrationer tendens til at være forbundet med kortere overlevelse, men ikke signifikant, p = 0,088 (Fig 1c).

Endelig ekspressionsniveauer af østrogen receptor-gener blev kombineret med aromatase-genekspression og protein koncentrationer og mediane OS satser vurderet (tabel 5). Igen blev fire kategorier i analyserne. Den stærkeste association blev fundet for

ERS1

kombineret med

CYP19A1

genekspression: de højeste OS satser blev fundet for kategorier Høj

-ERS1

+ Low

-CYP19A1

og High

-ERS1

+ høj

CYP19A1

(begge indeholder det

ERS1-

høj udtryk gruppe), mens den for kategori Lav-

ERS1

-high-

CYP19A1

var betydeligt lavere. Disse forskelle var signifikante (Kaplan-Meier Log Rank = 0,0001; Kruskal-Wallis p = 0,011).

For at kvantificere, i hvilket omfang overlevelse var lavere i Low

-ERS1

+ høj

-CYP19A1

kategori, blev de tre andre kategorier slået sammen til ét sæt og en Cox regression blev udført. Resultaterne var yderst signifikant: p = 0.000007; Exp (B) = 4,041. I denne Lav-

ER

S1 + High

CYP19A

en kategori, en patients sandsynlighed for overlevelse var fire gange lavere end i resten af ​​patienterne (samlet i ét sæt). På den anden side, i betragtning af aromatase proteinkoncentration stedet genekspression, forskellene var ikke længere signifikant.

For

ERS2

/

CYP19A1

fire-kategori sammenligning nej signifikante forskelle blev fundet (se tabel 5). Den laveste overlevelse svarede til kategori Lav-

ERS2

+ Høj

-CYP19A1

langt fra de resterende kategorier. Faktisk gentage Kaplan-Meier-test for lav

-ERS2

+ Høj

-CYP19A1

andre kategorier individuelt, de tre parvise sammenligninger gjorde udbytte signifikante forskelle (Low

-ERS2

+ Low

-CYP19A

vs. Low

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

p = 0,031; høj

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

vs. Low

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

p = 0,045, og High

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

vs. Low

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

p = 0,035). Som det var tilfældet for

ERS1

, sammenligning af kategorierne Low

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

, Høj

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

og High

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

samlet i blot ét sæt, med kategori Low

-ERS2

+ høj

-CYP19A1

, ved hjælp af Cox regression at kvantificere overlevelse forskelle, gav et meget signifikant resultat: p = 0,009, Exp (B) = 2,307

i betragtning af protein koncentration i stedet for

CYP19A1

genekspression. , den kategori med den laveste overlevelse var igen lav

-ERS2

+ High-aromatase, men satser var dramatisk højere for High

-ERS2

+ Low-aromatase og især lavere for kategorier lav

-ERS2

+ Low-aromatase og High

-ERS2

+ High-aromatase. Forskelle mellem de fire kategorier var ikke signifikant med Kaplan-Meiers test (p = 0,093), men de var med Kruskal-Wallis test (p = 0,049).

ERS1

+ aromatase og

ERS2

+ Aromatasehæmmere kombinationer dele en interessant feature: Høj-

ERS1 /2

+ Low-aromatase er de underklasser med højere overlevelse i begge tilfælde. En Cox regression af High-

ERS1

+ Low-aromatase mod de andre tre

ERS1

+ Aromatasehæmmere kombinationer var ikke signifikant p = 0,114, Exp (B) = 1,89. Høj-

ERS2

+ Low-Aromatase giver samme resultat p = 0,061 Exp (B) = 2,12.

Diskussion

Selvom realtid RT-PCR tidligere har været anvendt at bestemme østrogenreceptorer udtryk i lunge tumor prøver, har disse undersøgelserne været begrænset på grund af den lille prøvestørrelse anvendt [23], eller fordi de var begrænset til cellekulturer [9], [24]. Endvidere har IHC været den metode mest almindeligvis anvendes til at påvise tilstedeværelsen af ​​ERa- og ERp-proteiner og variationer i deres koncentration. Forskning i aromatase har fulgt et lignende mønster [11], [18], [25].

Til dato har der været betydelige forskelle i IHC resultater rapporteret (selv bruger samme antistof, teknik og vævstype) : afsløring satser varierer fra 0 til 80% for ERa, 30 til 100% for ERp og 60 til 100% for aromatase. Gomez-Fernandez et al. [26], Raso et al. [27] og Miki et al. [28] drøftede problemet, om en kilde til disse forskelle: de forskellige antistoffer, der virker mod forskellige epitoper. Brueckl et al. [21] og Atmaca et al. [20], offentliggjort deres

ERS1

udtryk resultater baseret på RT-PCR-metode og humane prøver (herunder større samling af patienterne), tilføjer en ny uoverensstemmelse kilde, mangfoldigheden af ​​splejsning varianter af ESR1 mRNA.

ERS1

genet blev udtrykt i 100% af tumor og ikke-tumor prøver. Inden for tumorprøver der var en betydelig mønster i overlevelse: dem med højere

ERS1

genekspression havde længere overlevelse og det står i kontrast til tidligere undersøgelser. For eksempel i Fasco et al. [23] ingen korrelation blev fundet, måske på grund af den lille gruppe af patienter, mens Olivo-Marston et al. [29] rapporterede en omvendt korrelation mellem ER-α positivt udtryk og overlevelse i serumprøver og i en af ​​de to væv kohorter undersøgt. De forskellige resultater kan forklares delvist ved tilgangen til analyse: de tog det første tertil som negativ udtryk og de to andre som positiv. Tidligere undersøgelser har tendens til at bruge IHC metoder, og resultaterne har været meget blandet, lige fra ikke registreres til tilstedeværelsen af ​​ER-α forbundet med dårligere overlevelse, alene eller i kombination med den epidermale vækstfaktor receptor [6] proteiner, [12] [19], [22], [30], [31]. Andre årsager til disse forskelle, ud over den førnævnte antistof problemet og alternativ splejsning, er virkningerne af post-translationel regulering på opdagelse [9], [26], [28], [32].

Vores

ERS1

udtryk resultater relateret med overlevelse er i overensstemmelse med Brueckl et al. [21] og Atmaca et al. [20]. Faktisk brugte de en analyse tilgang svarer til, hvad det er blevet brugt her, Delta Cq metode med medianen at opdele patienterne i lav og høj udtryk undergrupper.

Med hensyn

ERS2

genekspression patienter med høj og lav

ERS

2 udtryk i tumor og ikke-tumorvæv henholdsvis en tendens til at have højere overlevelsesrater; og dem med det modsatte udtryk profil (Low

ERS2

i tumor /høj

ERS2

i ikke-tumorvæv) har den dårligste prognose. Nogle forfattere fandt ikke nogen sammenhæng mellem ER-β protein-ekspression og overlevelse [22], [23], [33], mens andre efter aftale med vores resultater, observeret, at tilstedeværelsen af ​​ER-β protein er relateret til bedre prognose. Når herunder i Cox regression multivariat model

ERS2

udtryk i tumor, ikke-tumor og dens forhold ikke gav nogen signifikante resultater. Vedrørende

CYP19A1

udtryk, patienter tidlige fase udtryk grupper (Lav /Høj) overlevelse resultater er i konkordans med de Mah et al. [18], selv om deres resultater var baseret på IHC metoder til protein detektion Som med

ERS2

ingen af ​​

CYP19A1

eller aromatasehæmmere variabler blev inkluderet i Cox multivariat mocel.

i betragtning gen /protein udtryk kombinationer, Høj-

ERS1

/Højt

ERS2

klart forudsiger højere OS og kunne bruges som prognostisk faktor. Tidligere rapporter der bruges denne fremgangsmåde var baseret på IHC metoder og de opnåede betydelige sammenligninger ved at kombinere variabler, der beskriver tilstedeværelsen af ​​ER-p og aromatase proteiner [22], [34], [35].

Den mest kraftfulde gen kombination viste sig at være Lav-

ERS1

+ High

CYP19A1

udtryk, og dette var forbundet med kortere overlevelse. Efter at have analyseret de fire undergrupper involverer

ERS1 /CYP19A1

, ser det ud til, at lav-

ERS1

er mere afgørende for overlevelse end High

CYP19A1

genekspression, da overlevelse ulempe ikke fundet, når høj

CYP19A1

genekspression er kombineret med høj

ERS1

udtryk, men OS sats for lav-

ERS1

+ /Lav-

CYP19A1

udtryk peger på den konklusion, at det er den nøjagtige kombination, der resulterer i kortere OS. Forskellen i mønstret mellem udtryk for

CYP19A1

og tilstedeværelse af det tilsvarende protein (tabel 5) fører os til at konkludere, at noget opvejer en stigning i OS i kategorien Lav-

ERS1

+ høj

-CYP19A1

, og et fald i High

ERS1

/højt

CYP19A1

/høj. Dette kan være splejsning, post translationel modifikation eller en anden endnu ikke identificeret biologisk mekanisme, selvom det også kan tilskrives den relativt lille stikprøve.

For at opnå en sammenlignelig indikator for OS baseret på

ERS2

kombinationen Lav-

ERS2

+ High

CYP19A1

skulle modregnes de tre andre mulige kombinationer (tabel 5) grupperet i et enkelt sæt. Den hazard ratio fra en Cox regression for patienter med lav-

ERS2

+ High

CYP19A1

udtryk versus de tre andre kategorier er 2,307, mens den samme test for lav-

ERS1

+ Høj-

CYP19A1

udtryk gav et hazard ratio på 4,041, hvilket understreger den relative styrke af

ERS1

niveauer som en prædiktor. På den anden side, i tilfælde af

ERS2

/Aromatase protein, de store forskelle i overlevelse var bemærkelsesværdigt, et mønster, der ikke var set med

ERS1

. Som med de

ERS1

/CYP19A1 kombinationer, kan det konkluderes, at lav-

ERS2

er vigtigere end High

CYP19A1

genekspression, når man overvejer forskellen i overlevelse mellem de fire undergrupper. Endvidere skal den potentielle eksistens af en eller anden form for regulering overvejes på grund af variationer i satserne for kategorierne Lav-

ERS2

+ Lav-

CYP19A1

, Høj-

ERS2

+ Lav-

CYP19A1

og High

ERS2

+ High

CYP19A1

og forskellene i opførsel af

ERS1

ERS2

profiler, når de kombineres med udtryk eller produktet af

CYP19A1

gen.

Som konklusion

ERS1

, alene eller i kombination med

ERS2

eller

CYP19A1

, er den mest bestemme prognostiske faktor inden for de analyserede 3 gener under hensyntagen sin deregulering i tumorvæv, dets forhold til overlevelse, og at hazard ratio, når det kombineres med andre variabler er højere end for

ERS2

. Oprindelsen af ​​deregulering, som synes at være årsag underekspression af

ERS1

RNA er endnu ikke klarlagt. Sagen om

ERS2

er helt anderledes, da mønstret for patientens overlevelse ændres betydeligt, når man overvejer udtryk i ikke-tumor eller tumorvæv. Igen mener vi, at der er nogle endnu ukendt faktor forstyrre denne proces. Der kræves yderligere forskning for at identificere disse faktorer og på hvilket niveau de handler.

Støtte Information

File S1.

Detaljerede oplysninger om ERS1,

ERS2

CYP19A1 gener udskrift længde, associeret protein længde, sonde exon-exon grænse, amplicon forstærkning og protein funktionalitet. Tabel S1a.

CYP19A1

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for Assay ID Hs00903411_m1. Tabel S1b.

CYP19A1

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra ENSEMB, for Assay ID Hs00903411_m1. Tabel S2a.

ERS1

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for Assay ID Hs00174860_m1. Tabel S2b.

ERS1

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra ENSEMB, for Assay ID Hs00174860_m1. Tabel S3a.

ERS2

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for Assay ID Hs00230957_m1. Tabel S3b. .

ERS2

gen udskrifter og protein information, tilpasset fra ENSEMB, for Assay ID Hs00230957_m1

doi: 10,1371 /journal.pone.0109659.s001

(DOC)