PLoS ONE: Serum Inhibin A og Inhibin B Niveauer i Epithelial kræft i æggestokkene Patients

Abstrakt

Formålet

i vores undersøgelse var at undersøge serum inhibin A og inhibin B koncentrationer i æggestokkene kræftpatienter i forhold til klinisk-patologiske træk og 5-års overlevelse.

Materiale og metoder

Vi indskrevet 90 epitelial ovariecancer patienter i vores undersøgelse, i alderen 45-81 år, som gennemgik optimal cytoreduktive kirurgi. Hos alle patienter blev inhibin A og inhibin B serum målt ved hjælp af en to-trins sandwich enzym immunoassay før operation.

Resultater

I gruppen af ​​patienter med kræft i æggestokkene median serumkoncentration af inhibin A var 3,87 pg /ml (0,96 til 10,09) og inhibin B var 13,9 pg /ml (5,1 til 45,0). Median koncentrationer af inhibin A og B i forhold til FIGO stadie og histologisk subtype ikke adskiller sig væsentligt. Inhibin A-niveauer var signifikant højere hos patienter med lavere grading (G1 og G2) i forhold til dem med højere kvalitet G3 (p = 0,001). Der var ingen forskel i inhibin B koncentrationer i forhold til sortering. Kaplan-Meier analyser viste ingen forskelle i overlevelsen i forhold til inhibin A-niveauer, mens der var en trinvis forringelse af 5-års overlevelsen med øget inhibin B-niveau. I gruppen af ​​patienter med inhibin B niveauer højere end 20 pg /ml overlevelsesraten var lavere (p = 0,00625, log-rank test).

Konklusion

1. Højere inhibin A serum blev fundet hos patienter med stærkt differentieret ovariecarcinom sammenlignet med gruppen af ​​patienter med en dårligt differentieret kræft, som kan bekræfte indflydelsen af ​​inhibin A på celleproliferation processer. 2. En væsentlig betydning inhibin B blev påvist i forudsigelsen af ​​døden inden for mindre end en femårig periode. Sandsynligheden for overlevelse hos patienter med vægt på høj inhibin B-niveauer var lavere med statistisk signifikans. Dette kan indikere behovet for yderligere undersøgelser af, hvordan at blokere inhibin B aktivering pathway i ovariekarcinom terapi

Henvisning:. Walentowicz P, Krintus M, Sadlecki P, Grabiec M, Mankowska-Cyl A, Sokup A et al. (2014) Serum Inhibin A og Inhibin B Niveauer i Epiteliale Ovariecancerpatienter. PLoS ONE 9 (3): e90575. doi: 10,1371 /journal.pone.0090575

Redaktør: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, USA

Modtaget: November 8, 2013; Accepteret: 1. februar, 2014 Udgivet: 5 mar 2014

Copyright: © 2014 Walentowicz et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

epitelovariecancer er den femte hyppigste dødsårsag. i kvinder i Europa og USA [1]. Selvom forståelse af ovariecancer har forbedret meget, ætiologien og forløbet af sygdommen er stadig ukendte [2]. De betingelser, der gør det muligt kræftcellerne til at iværksætte metastaser til fjerne steder udgør et afgørende, men stadig dårligt forstået klinisk problem. Selv om nye markører blev introduceret til klinisk praksis, mere end 70% af patienterne til stede med fremskreden sygdom (stadium III eller IV), og langsigtede overlevelsesrater er lave (ca. 30% kun) [3], [4 ], [5].

Inhibiner blev oprindeligt isoleret fra gonadale fluider baseret på deres respektive evner til at inhibere follikelstimulerende hormon (FSH) sekretion fra hypofysen. Efterfølgende blev disse proteiner identificeret som medlemmer af en familie af vækstfaktorer, den transformerende vækstfaktor-beta (TGF) superfamilien, med flere funktioner som lokale regulatorer af gonadal biologi [6], [7]. Inhibin A og inhibin B tilhører en lille undergruppe af TGF-β-superfamilien, der virker som antagonister og er strukturelle homologer af activiner, omfattende activin β-underenhed og en unik α-underenheden. Heterodimerisering giver anledning til inhibin A (α /βA) og B (α /pB) [8], [9]. I sin struktur, den modne inhibin En dimer ligner activin A [10].

Inhibiner blokere handlinger activin på hypofysen [11]. Deling af β-underenheden, kan inhibin binde activin type II receptorer, med en lavere affinitet [12]. En membranbundet proteoglycan, betaglycan, virker som et inhibin co-receptor og desuden betaglycan er blevet karakteriseret som tilbehør receptor for beslægtede TGF-β ligander, TGF-β1, -β2 og -β3 [13]. I nærvær af betaglycan, inhibin danner en høj affinitet kompleks med activin type II receptor [13]. Denne interaktion hæmmer activin adgang til dets type II receptorer og blokerer intracellulær signalering kaskade [14].

Det faktum, at inhibiner ekspression er begrænset til æggestokkene granulosaceller hos kvinder, førte til at etablere inhibinniveauer som et nyttigt serum markør for granulosa celle tumorer (GTCs).

desuden så inhibin a og B tilhører transformerende vækstfaktorer familie og deres repræsentanter spiller en vigtig rolle i ovariecancer carcinogenese, kan det antages, at de også kan spille en rolle i æggestokkene carcinogenese. Det blev vist, at nogle regioner af gener, der koder inhibiner tendens til at blive svækket i ovariecarcinomer dog en sammenhæng mellem disse skader og karcinogenicitet processer i epitelial æggestokkene kræftpatienter ikke er klarlagt [15]. En af foreslåede mekanismer, der deltager i carcinogenese af ovariekarcinom er activin pathway forstyrrelser resulterede fra reduceret ekspression af p-glycaner. I lighed med andre neoplasmer, er ovariecancer kendetegnet ved tabet af β-glycan udtryk, men den rolle, activin pathway, og samspillet mellem inhibiner, activiner og andre komponenter af TGF-β-familien, stadig uklare [15].

i betragtning af disse forhold formålet med denne undersøgelse var at undersøge inhibin a og koncentration inhibin B i serum hos epitelial æggestokkene kræftpatienter i forhold til klinisk-patologiske træk, såsom en patologisk undertype af tumoren, FIGO stadie, sortering, overgangsalderen status og den samlede 5-års overlevelse.

patienter

Vi indskrevet 90 epitelial ovariecancer patienter i alderen 47-81 år (gennemsnit 59,6 +/- 10,3 år) behandlet i Institut for Gynækologi og Obstetrik, Ludwik Rydygier Collegium Medicum i Bydgoszcz i perioden 2005-2006. Alle kvinder var postmenopausale.

Kun kvinder, der gennemgik optimal cytoreduktive kirurgi blev anset for yderligere analyse, alle af dem med resterende kræft fokuserer mindre end 1 cm i diameter. Alle patienter blev opereret af erfarne gynækologisk onkolog. Standarden kirurgiske protokol omfattede tumorectomy, hysterektomi med bilateral salpingoovariectomy, bækken lymphadenectomy, omentectomy og appendectomy. International Federation of Gynækologi og obstetrik (FIGO) kræft i æggestokkene iscenesættelse system blev anvendt til at vurdere den kliniske fase af sygdommen. Tidlige stadier blev bekræftet i 26 patienter (FIGO I i 16 kvinder, II 10) og fremskreden sygdom i 64 patienter (FIGO III-56, IV-8). Alle æggestokkene kræfttilfælde var med histologisk bekræftelse, hvoraf 68 (75%) serøs, 7 (8%) mucinøs and15 (17%) endometrioide. Histologisk undersøgelse blev udført på Patologisk Institut, University Hospital i Bydgoszcz, og histologisk grading blev bestemt (G1 i 13, G2 i 28 og G3 i 49 patienter).

Efter optimal cytoreduktive kirurgi, alle kvinder gennemgik 6 kurser kemoterapi baseret på carboplatin og paclitaxel. Baseline karakteristika undersøgelsens deltagere er vist i tabel 1.

bioetiske udvalg ved Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University i Torun har behandlet og godkendt denne undersøgelse. Alle deltagere har givet skriftligt, informeret samtykke.

Metoder

Blodprøver blev opsamlet (10 ml) efter indlæggelse på hospitalet, dagen før operation. Efter centrifugering i standard betingelser serum blev opnået, alikvoteret og opbevaret ved -70 ° C indtil analyse.

Serum inhibin A og inhibin B koncentrationer blev målt under anvendelse af et enzymatisk amplificeret to-site totrins sandwich-immunoassay ( inhibin-A /B-ELISA; Diagnostiske Systems Laboratories, Inc., Webster, Texas, USA). Den unøjagtighed analysen for inhibin A var 6,2% ved 23 pg /ml og 3,0% ved 781 pg /ml. De laveste inhibin A koncentrationer i en prøve, der opdages var 1 pg /ml (nedre detektionsgrænse). Som en referenceværdi for kvinder over 45 år, vi har accepteret inhibin En koncentration på 1-3,88 pg /mL.

intra- og inter-assay variationskoefficienter med serum styringer til inhibin B var ca. 3,5% -5,6% og 6,2% -7,6%, hhv. Den nedre detektionsgrænse var 6 pg /mL. Assay målte interval for inhibin B var 10-531 pg /mL.

Kolmogorov-Smirnov test blev anvendt til at vurdere normalitet fordeling af undersøgte parametre. Data blev udtrykt som middelværdier ± standardafvigelse og median med 25.-75. percentiler. Sammenligning mellem grupperne blev udført ved anvendelse af Mann-Whitney-test og Kruskal-Wallis-test for ikke-Gaussiske fordelte variable med post hoc Dunns test. P-værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Samlet overlevelse blev undersøgt for signifikans ved hjælp log-rank test og Kaplan-Meier kurver

univariate og multivariate Cox regressionsanalyse blev udført… Til analysen blev en forreste markering med en P-værdi på mindre end 0,05 for indtastning anvendt. Virkningerne af variablerne blev udtrykt som hazard ratio pr 1 SD ændring at muliggøre en bedre sammenlignelighed mellem effekt størrelser af de forskellige testede variabler.

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af Statistica 10,0 til Windows (StatSoft, Tulsa , OK, USA).

Resultater

i gruppen af ​​patienter med kræft i æggestokkene median serumkoncentration af inhibin A var 3,87 pg /ml (0,96 til 10,09) og inhibin B var 13,9 pg /ml (5,1-45,0).

Median koncentrationer af serum inhibin A og B i forhold til FIGO stadie ikke adskiller sig væsentligt. Der var imidlertid en tendens til statistisk signifikans for inhibin A (tabel 2).

Median serum inhibin A-niveauer var signifikant højere hos patienter med lavere grading (G1), samt hos patienter med G2 i forhold til dem med højere lønklasse G3 (p = 0,001). I betragtning af serum inhibin B koncentrationer i forhold til sortering, var der ingen observerede forskelle (tabel 3).

Der blev ikke fundet signifikante forskelle mellem inhibin A og B-koncentrationer og histopatologisk undertype af tumoren (tabel 4) .

Vi evaluerede ROC kurver at vurdere diagnostiske nøjagtighed af undersøgte variabler til forudsigelse af døden inden for fem år (tabel 5, fig. 1). Det højeste niveau af diskrimination blev fundet for inhibin B (areal under kurven [AUC] = 0,705), men dette var ikke signifikant forskellig fra den diagnostiske nøjagtighed med to andre variabler: alder (AUC = 0,629) og inhibin A (AUC = 0.640)

desuden er sammenhængen mellem inhibin A, inhibin B og overlevelsesrate blev også udført i overensstemmelse med univariable og multivariable Cox regressionsanalyse (herunder variabler såsom:. alder, histologisk undertype (serøs), høj kvalitet (G2 + G3), avanceret FIGO stadie (tabel 6, 7). Grade og avancerede FIGO stadie var statistisk vigtige prognostiske faktorer i univariat analyse for samlet overlevelse (tabel 6). i multivariat analyse kun avancerede FIGO stadie var statistisk vigtigt (tabel 7).

Desuden Kaplan-Meier analyser blev udført. Der var ingen forskel i overlevelsen i forhold til inhibin A-niveauer (figur 2). Kaplan -Meier analyser viste en trinvis forringelse af kræft 5-års overlevelse med øget inhibin B-niveau. The Log-rank test viste signifikante forskelle mellem inhibin B koncentration og overlevelse; i gruppen af ​​patienter med inhibin B niveauer højere end 20 pg /ml overlevelsesraten var lavere (p = 0,00625, log-rank test) (figur 3).

Diskussion

Ovariecancer stadig et betydeligt problem for den foreliggende onkologisk gynækologi forbundet med en sen diagnose, en lav behandlingseffektivitet og en høj dødelighed. Nye metoder til de ovariecarcinom diagnostik introduceres på en regelmæssig basis, men sådanne aktioner ikke signifikant forbedrede kliniske resultater [16]. Det er af stor betydning for at søge efter nye faktorer, der gør os i stand til at prognosticate behandlingsresultater og hjælpe os med at vælge en gruppe af kvindelige patienter med dårlig prognose, der kræver en mere aggressiv behandling.

I vores undersøgelse, vi har evalueret serumniveauer af hormoner, der tilhører TGF-β-familien, nemlig inhibin A og inhibin B. Vi fandt, at A og B inhibin koncentrationer ikke signifikant forskellig afhængigt af niveauet af den kliniske udvikling (FIGO stadie) og typen af ​​histopatologisk undersøgelse. Inhibin A-niveauer korrelerede ikke med en 5-års overlevelsesraten. På grund af vores viden, vi er de første til at have evalueret inhibin A-niveauer med hensyn til 5-års overlevelse hos kvinder med epitelial ovariecancer. Der er nogle rapporter i litteraturen om inhibin A-niveau i patienter med epitelial ovariecancer. I deres undersøgelse, Roberts et al. demonstreret blodplasma forhøjede koncentrationer af inhibin a-underenheden i ovariecancer patienter [17]. Forfatterne fandt ikke nogen sammenhæng mellem inhibin A og klinisk-patologiske karakteristika tumoren, hvilket er i tråd med vores egne undersøgelser.

Men vi har vist en positiv sammenhæng mellem stigende inhibin A niveauer og graden af ​​histologiske differentiering. I undergruppen af ​​patienter, hos hvem tumoren var præget af en lav kvalitet (G1), blev de højeste inhibin A niveauer noteret (8,23 pg /ml for G1 vs. 0,96 pg /ml for G3, p = 0,001).

Knight og GLISTER bevist, at balancen mellem inhibiner og aktiviner, produceret af granulære celler, er af afgørende betydning i reguleringen af ​​en lang række faktorer, der er forbundet med follikeludvikling herunder celledeling [18]. Måske, hvis en ubalance i et sådant system sker, vil det påvirke en forbedret spredning af ovariecancer celler.

Baseret på vores studieresultater, har vi fundet forskelle i inhibin A niveauer blandt ramt af ovariecancer kvinder, mens der ikke var nogen forskel på inhibin B-niveauer blandt dem. Måske er dette fænomen – i nogen udstrækning – relateret til tumorcelleproliferation lidelse hos ovariecancer patienter. Vi anser det skal bekræftes af yderligere undersøgelser herunder også evaluering af activin niveauer.

Vores undersøgelser er banebrydende værker om den rolle, inhibin A i epitelial ovariecancer. For første gang, var vi uheldige at bekræfte målbevidsthed af inhibin A-niveau rutine evaluering i forudsigelsen af ​​klinisk-patologiske karakteristika hos patienter ramt af epitelial kræft i æggestokkene.

Vi har også studeret niveauerne af inhibin B, en anden hormon tilhører TGF-β-familien. Inhibin B-niveauer afslørede ikke statistisk signifikante forskelle afhængigt af graden af ​​den kliniske udvikling, niveauet for histologisk malignitet og den histologiske type af cancer. Men ved hjælp ROC’er (Receiver Operating Kurver), har vi fundet en sammenhæng mellem en præoperativ blodplasma inhibin B-niveau og en 5-års overlevelsen tid. Ved at udføre en overlevelsestid analyse ved hjælp af Kaplan-Meier-kurver, har vi observeret en signifikant kortere tid til død i gruppen af ​​patienter med inhibin B-niveauer over 20 pg /mL.

På grund af vores viden vi var de første til at have analyseret en sammenhæng mellem inhibin B niveauer og patienternes overlevelsestid. I den tilgængelige litteratur, har vi ikke fundet rapporter om inhibin B effekt på ovariecancer patienternes overlevelsestid. Vi mener, at stigningen i inhibin B-niveau kan være formentlig på grund af blokeringen i transduktion signalvejen af ​​activin. Nogle forfattere foreslår, at activin signalvejen udøver en hæmmende virkning på tumorvækst, helt magen til TGF-β handling i normale epitelceller. Svækkelsen af ​​activin aktivitet kan føre til tab i enzyminhiberende evne induceret på vækst, og inhibin B overproduktion. En reduceret β-glycan udtryk kan være en mulig formidler mekanisme involveret i denne proces, dog interaktioner, der deltager blandt respektive agenter for TGF-β familien er usædvanligt komplekse [19]. Både inhibin A og inhibin B binder β-glycan alene ved bindingsstedet ligger i det proximale område af cellemembranen [20], [21]. Det er blevet afsløret, at bindingsstederne er fælles for inhibiner og andre dele af TGF-β-familien, men de adskiller sig blandt hinanden med hensyn til specifikke aminosyrerester karakteristiske for respektive faktorer [20]. Det synes at være sandsynligt, at inhibin A og inhibin B præsentere en anden affinitet for β-glycan [22]. Inhibin A binder med en højere affinitet for β-glycan og type II receptor i modsætning til inhibin B [23]. Ikke desto mindre er inhibin B kendetegnet ved en større evne til at antagonisere FSH frigivelse fra hypofysen, hvilket indikerer mulig inhibin B binding til activin type II receptoren via en anden vej [22].

Vi postulerer, at activin medieret vækststandsning ledsaget af en deraf følgende forhøjelse af inhibin koncentrationer kan muligvis udgøre en vigtig fase i carcinogenese af ovariekarcinom.

Inhibin a, der tilhører TGF familie, har en indvirkning på NF-KB (Nuclear Factor kappa let kæde-enhanceren af ​​aktiverede B-celler) signalvej. NF-KB er et proteinkompleks, der fungerer som en transskriptionsfaktor. NF-KB signalvej aktivering forekommer i ovariekarcinom tumorer af epiteloprindelse [24]. Indledningen af ​​denne fremgangsmåde, kan være ikke kun på grund af en mutation, men også af tilstedeværelsen af ​​inflammatoriske proces induktorer i tumormikromiljøet. Som følge af NF-KB-aktivering, målgener ansvarlig for en forøget proliferation, infiltration, metastaserende, og angiogenese få aktiveret [25]. De ovenfor nævnte processer bestemme en aggressiv fænotype af tumoren [26], [27].

Komponenterne i TGF-β superfamilien ofte udøve en synergistisk virkning med FSH, er det derfor afgørende at overveje det faktum, at en antal signaltransduktionsveje kan aktiveres samtidigt. Det har vist sig, at activin, via Smad2 /3-receptorer, aktiverer PI3 Akt pathway, i de epiteliale ovariecarcinomer, og påvirker overekspression af antiapoptotiske gener [28], [29]. Komplicerede samspil mellem inhibin activin, østrogener og NF-KB signalvej har vist sig [30]. Det er almindeligt kendt, at TGF-p-familien faktorer og østrogener spiller en afgørende rolle i æggestokkene funktioner, stadig dog NF-KB rolle obskure [31], [32], [33]. På den anden side er det sandsynligt, at inhibin, activin, østrogener og NF-KB spiller en vis rolle i patogenesen af ​​ovariekarcinom. Mekanismer bag denne proces dækker nedskrivning af proliferation og apoptose. Hver af signaltransduktionsveje ovenfor beskrevne indeholder gensidige faktorer. Derfor krydsninger interaktioner er mulige.

epitelovariecancer stadig en af ​​de mest aggressive sygdom, især hos kvinder i en høj socioøkonomisk status, der bor i de industrialiserede lande. I løbet af de senere år, sammen med en intensiv udvikling af molekylær biologi, talrige undersøgelser af mekanismen i æggestokkene carcinogenese er blevet offentliggjort [34], [35]. På trods af dette, er sygdommen ofte diagnosticeret efter tumorceller har formidlet i bughulen, i de sene stadier af klinisk udvikling, og procentdelen af ​​velbehandlede patienter har været næsten på et uændret niveau i flere årtier. Epitelovariecancer er en aggressiv sygdom, for hvilken der er få effektive biomarkører og terapier [36].

Betydningen af ​​inhibin A og inhibin B i epitelial kræft i æggestokkene er relevant. Ændring af inhibin /activin pathway kan bidrage til udviklingen af ​​epitelial ovariecancer grund af ændring af krydstale mellem granulosa og epitelceller. I deres seneste undersøgelser Tournier på al. identificeret en enkelt de novo mutation (c.1157A G /p.Asn386Ser) inden for INHBA gen, der koder βA-underenheden af ​​inhibiner /aktiviner, som spiller en central rolle i æggestokkene udvikling [36]. Desuden i en kohorte af 62 sager, de har registreret en ekstra urapporteret kimlinie mutation af INHBA genet (c.839G A /p.Gly280Glu). Forfattere giver argumenter indikerer, at germlinie inhibin mutationer bidrager til den genetiske determinisme af epitelial ovarietumorer ved at ændre inhibin /activin produktion. Resultater opnået af forfattere kraftigt antydet, at inhibin mutationer bidrog til den genetiske determinisme af epitelial ovarietumorer [37]. Virkningen af ​​INHBA mutationen på inhibin /activin produktion og rolle inhibin vej hos æggestokke og æggestokkene carcinogenese er af stor interest.In konklusion, baseret på vores studier har vi observeret kortere 5-års overlevelsesraten i gruppen af ​​patienter med inhibin B niveauer over den øvre normale grænse. Måske kan den inhibin B evaluering i klinisk praksis hjælpe med at finde en gruppe af epitelial kræft i æggestokkene patienter, hos hvem prognoser er dårlige nok til at bruge mere aggressive behandlingsmetoder. Denne formodning kræve yderligere undersøgelser, herunder dem på mulighederne for at blokere inhibin B aktivering veje i ovariecancer terapi. Man bør også være opmærksom på, at i det undersøgte patientgruppe blot niveauet for klinisk udvikling, ifølge FIGO, var en uafhængig prædiktor for 5-års overlevelsesraten baseret på en multivariable analyse, som fremhæver en væsentlig rolle korrekt udført kirurgisk iscenesættelse.

Forhåbentlig undersøgelser udført af os, vil føre til udvikling af yderligere diagnostiske analyser giver mulighed for en mere præcis forudsigelse af kræft behandlingsresultater.

konklusioner

1. Højere inhibin A serum blev fundet hos patienter med stærkt differentieret ovariecarcinom sammenlignet med gruppen af ​​patienter med en dårligt differentieret kræft, som kan bekræfte indflydelsen af ​​inhibin A på celleproliferation processer.

2. En væsentlig betydning inhibin B blev påvist i forudsigelsen af ​​døden inden for mindre end en femårig periode. Sandsynligheden for overlevelse hos patienter med vægt på høj inhibin B-niveauer var lavere med statistisk signifikans. Dette kan indikere behovet for yderligere undersøgelser af, hvordan at blokere inhibin B aktivering pathway i ovariekarcinom terapi.