Abstrakt
Baggrund
Spontan ovariecancer i kyllinger ligner menneske tumorer både histologisk og biokemisk. Målet var at bestemme, om der er forskelle i lymfocyt indhold mellem normale æggestokke og æggestokkene tumorer i kyllinger som grundlag for yderligere undersøgelser for at forstå betydningen af immunitet i human ovariecancer progression.
Metoder
Høns blev udvalgt ved hjælp af skala og farve Doppler ultralyd grå at afgøre, om de havde normal eller tumor morfologi. Celler blev isoleret fra ovarier (n = 6 høner) og lymfocyttal blev bestemt ved flowcytometri under anvendelse af antistoffer mod aviær CD4 og CD8 T og B (Bu1a) celler. Æggestokkene sektioner fra et andet sæt af høns (n = 26) blev vurderet til at verificere tumortype og stadie og at tælle CD4, CD8 og Bu1a immunfarvet celler ved morfometrisk analyse.
Resultater
T og B celler var mere talrige i ovarietumorer end i normale æggestokke ved flowcytometri og immunhistokemi. Der var færre CD4 + celler end CD8 + og Bu1a + celler i normale æggestokke eller tumorer i æggestokkene. CD8 + -celler var den dominante T-celle-undertype i både æggestokkene stroma og i ovariefollikler sammenlignet med CD4 + -celler. Bu1a + -celler blev konsekvent fundet i stroma af normale ovarier og ovarietumorer men var ikke associeret med hårsække. Antallet af immunceller var højest i sene stadier serøse tumorer sammenlignet med endometrioide og mucinous tumorer.
Konklusioner Salg
Resultaterne antyder, at ligner humant ovariecancer der er forholdsvis mere immunceller i kylling æggestokkene tumorer end i normale ovarier, og den højeste immun celleindholdet forekommer i serøse tumorer. Således er denne undersøgelse fastslår et fundament for yderligere undersøgelse af tumor immunrespons i en spontan model for ovariecancer, der vil lette undersøgelser af rollen af immunitet i begyndelsen ovariecancer progression og anvendelse af hønen i forsøg prækliniske vaccine.
Henvisning: Bradaric MJ, Penumatsa K, Barua A, Edassery SL, Yu Y, Abramowicz JS, et al. (2013) immunceller i normalt ovarie og Spontan æggestokkræft i Lægning Hen (
Gallus domesticus
) Model of Human kræft i æggestokkene. PLoS ONE 8 (9): e74147. doi: 10,1371 /journal.pone.0074147
Redaktør: Rajeev Samant, University of Alabama i Birmingham, USA
Modtaget: Marts 22, 2013; Accepteret: 26 Juli 2013; Udgivet: 9. september, 2013 |
Copyright: © 2013 Bradaric et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres
Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af NIH R01AI055060 (JL), DOD OC073325 (JL), den Segal Foundation (JL) og Prevent Cancer Foundation (AB). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser
Baggrund
Flere elementer er involveret i udviklingen og progressionen af cancer, herunder genetiske, epigenetiske, miljømæssige og immunstoffer [1], [2]. Selv om det er klart, at immunitet spiller en stor rolle i cancer, og at styre immunresponser på tumorer betydeligt potentiale for forebyggelse og behandling af kræft, er immunresponset på tumorer ikke godt forstået. Et højere indhold tumor CD3 + T-celler [3] eller CD8 + cytotoksiske T-celler [4] i sen tumorer er forbundet med en bedre prognose for patienter med ovariecancer, mens en højere relative indhold af T regulerende celler er associeret med en dårligere prognose [5 ], hvilket tyder på antallet og typer af immunceller er vigtige for kliniske resultater. De seneste oplysninger tyder på, at CD20 + B-celler findes i både tidlige og sene fase æggestokkræft, og at højere tal kan være relateret til bedre fem år overlevelsesrater [6]. Men der er modstridende data vedrørende den rolle, immunitet i forebyggelse eller progression tumor og det er blevet foreslået, at den funktionelle rolle med immunitet forandringer under tumorprogression [7].
Ovariecancer er normalt diagnosticeres i fremskredne stadier og har en høj andel af tilbagefald og dødelighed da der ikke er standard tidlige påvisningsmetoder. Fordi tidlig fase kræft i æggestokkene er svært at opdage, de fleste undersøgelser anvender fase prøver sent og der er således relativt få oplysninger om immunitet i indledningen og tidlig progression af kræft i æggestokkene. De tidlige stadier af kræft i æggestokkene er lettere undersøgt i dyremodeller og disse modeller repræsenterer en alternativ tilgang til at belyse tumor ætiologi og den rolle af immunitet i kræft i æggestokkene. Videreudvikling af prækliniske modeller af kræft i æggestokkene er nødvendig for at lette udvikling og test af vacciner til behandling af kræft i æggestokkene.
Der er en række af gnavere modeller af kræft i æggestokkene baseret på gensplejsede eller kemisk induceret tumorer eller på implantation af humane tumorer i SCID (svær kombineret immundefekt) eller RAG (Rekombination aktiverende gen) deficiente mus [8]. Men de fleste gnavermodeller ikke udvikle ovariecancer spontant og dem, der ofte producerer kun én histotype [8], [9], [10], [11], [12]. Mens disse modeller er nyttige for indsigt i genetiske og miljømæssige faktorer, der bidrager til kræft og udvikling af kemo-terapeutisk strategier, er de mindre egnede til undersøgelse af tidlige spontane begivenheder relateret til tumor immunologi, fordi det ikke er klart, om de gennemgår den samme fysiske eller spontane begivenheder, der fører til ovarietumorer.
æglæggende høne (
Gallus domesticus
) udfylder dette hul, da det spontant udvikler progressive ovarietumorer med senere stadier metastaser og produktion af ascites [13]. Vi og andre rapporterede, at æglæggende høne er en gyldig model for studiet af menneskets ovariecancer [14], [15], [16], [17], [18]. Spontane ovarietumorer i høne deler mange funktioner i den menneskelige kræft i æggestokkene. Den histologi og morfologi høne og menneskelige ovarietumorer er ens; høne tumorer har normalt serøs, endometrioide, klar celle og mucinøs histologi sammenlignelige med de hyppige epiteliale undertyper af human ovariecancer [14]. Vi viste tidligere, at ovarietumorer i æglæggende høner også kan påvises ved transvaginal ultralyd hjælp den type udstyr almindeligt anvendt i klinikker [19], [20]. Når det kombineres med kontrastmidler [21], var vi i stand til at fremme den fase, hvor æggestokkene tumor angiogenese og små mikroskopiske tumor foci blev opdaget. Således ikke-invasive metoder til udvælgelse af høns til undersøgelser og til overvågning af tumor progression er tilgængelige. Desuden naturligt forekommende genetiske mutationer såsom p53, RAS og Her2 /neu findes i høne tumorer [22], [23], [24]. Ligeledes er der en voksende liste af proteiner udtrykt i kylling ovarietumorer såsom CA125 [25], mesothelin [26], COX 1 [27], [28], selen bindende protein 1 [29], E-cadherin [30] og VEGF, som er tilsvarende ændret i humane ovarietumorer [17], [20], [31]. Det er også påfaldende, at aspirin [32] og eksogen progesteron [33] delvist reducere tumorer i æggestokkene ligner mennesker. Kræft i æggestokkene i hønen har mange af de facetter af sygdom hos mennesker og derfor er en gyldig model.
æglæggende høne model er særlig velegnet til studier af kræft og immunitet i æggestokkene. Hønen er kendt for skelsættende bidrag til vores forståelse af immunologi, herunder de første beviser for forskellige slægter for T og B-lymfocytter [34]. I æggestokken, er der en stigning i follicle associeret T-celler, makrofager og B-celler under ovarie modning og derefter et fald med aldring [35], [36], [37], [38]. Desuden serum fra høner med ovarietumorer indeholder anti-ovarie- og antitumorantistoffer [39] ligner kvinder [40], [41], [42]. Således æglæggende høne model repræsenterer en realistisk model til at studere immunitet og tidlig ovariecancer.
Men de typer og indhold af immunceller i høns med æggestokkene tumorer og ændringerne i forhold til normale æggestokke er ukendte. Derfor er målet med denne tværsnitsundersøgelse var at beskrive og kvantificere de T og B-celler i forbindelse med ovarietumorer i æglæggende høne for at skabe et grundlag for studier af mekanismer immunitet i human kræft i æggestokkene.
Materialer og metoder
Animal Care og Selection
White Leghorn høns (3 år gammel, stamme W96) blev opbevaret ved University of Illinois i Urbana-Champaign fjerkræ gård i Institut for Husdyrvidenskab . Mad og vand blev leveret
ad libitum
og høns blev opretholdt på en 17:7 timer (lys: mørke) tidsplan. Æggestokkene morfologi og angiogenese blev evalueret ved hjælp af transvaginal ultralydsscanning som tidligere [19] beskrevet, og data blev brugt til at vælge høns med normale æggestokke eller tumorer i æggestokkene. For flowcytometri blev celler fra hele æggestok forberedt uden yderligere histologisk evaluering. For immunohistokemiske undersøgelser blev høner ligeledes valgt. Normal eller tumor histologi og tumor fase blev kontrolleret og tumortype blev bestemt ved anvendelse Hematoxylin og Eosin (H StemCell Technologies, Vancouver, BC), og DMEM /F12-medium (Invitrogen, Carlsbad, CA) (40 ° C, 2 timer under omrystning). Rørene blev centrifugeret (100 x g, 5 minutter). Cellepelleten blev suspenderet i kold phosphatpufret saltopløsning (PBS) indeholdende 1 mM EDTA (1 ml, 2 minutter), centrifugeret (100 x g, 5 minutter), og pelleten suspenderes i 10 ml Hanks balancerede saltopløsning (HBSS) indeholdende 2 % føtalt bovint serum (FBS). Celler blev talt med en Coulter-tæller indstilles til 5-11 mikrometer. Celler (6 x 10
6) blev mærket og fikseret i 2% paraformaldehyd og 5 × 10
5 celler /prøve blev analyseret ved anvendelse af et FACS Calibur (BD Biosciences, San Jose, CA). Dataene blev analyseret med CellQuest en software (BD Biosciences, San Jose, CA).
Tissue Forberedelse til histologi og Immunhistokemi
Ovarier blev fikseret i 10% PBS-buffer formalin og indstøbt i paraffin. H Olympus America Inc., center Valley, PA). Immunpositive celler blev talt under anvendelse MicroSuite Five software (Olympus America Inc.). Kort fortalt blev et minimum af tre sektioner fra hver æggestok fra seksogtyve høns tælles pr immun cellemarkør (CD4, CD8 og Bu1a) for i alt 243 objektglas (3 dias × 27 æggestokke × 3 markers).
i alt immunceller blev talt i hver sektion. For hvert afsnit, blev 5 til 20 tilfældige felter talt ved en forstørrelse på 20x (eller 84.000 um
2) afhængigt af størrelsen af prøven. Celletællinger blev midlet til hvert afsnit for at normalisere data, da et andet antal felter blev talt i forskellige størrelse sektioner. Tre sektioner blev midlet for hver høne for hver markør. Værdierne for hver gruppe (normal, tidlige og sene tumorer) blev midlet og derefter udtrykt som det gennemsnitlige antal celler i 8,4 x 10
4 um
2 af ovarievæv. Gruppe betegnelser (normal, tidlig og sen fase kræft) var baseret på histologisk vurdering af H 0,5 betragtet som signifikant
Resultater
Hen Valg og æggestokkene Morfologi
Hens blev udvalgt i grupper. med og uden ovarietumorer baseret på farve Doppler ultralyd og grov morfologi i æggestokkene. Som tidligere beskrevet normale ovarier indeholde multiple udviklingslande follikler (figur 1A og 1D) og diskrete blodkar (figur 1A) i stroma omkring ovariefollikler. I tidlige fase ovariecancer, æggestokkene indeholder færre udviklingslande follikler, og flere blodkar end i normale æggestokke (Figur 1B og 1E). I sent stadium ovariecancer, en fast masse med ascites, er tydelige og der er ingen udviklingslandene follikler (figur 1C og 1F).
En normal ovarie (A og D) med modning ovariefollikler (F1, F2) og stromale blodkar (pile) med normal brutto morfologi viser modning (F1, F2) ovariefollikler. Et eksempel på en abnorm æggestok (B og E), som indeholder flere blodkar (pile) end i normalt ovarie, ingen påviselige store modne follikler og en lille fast vævsmasse (cirkel) i æggestokken. Et eksempel på sent stadium ovariecancer (C), kendetegnet ved et stort fast masse med øget blodgennemstrømning (pile) og rigelig ascites (*). Brutto morfologi (F) bekræftede tilstedeværelsen af flere faste masser og tumormetastase til andre organer. Forkortelser: CT = cecal tonsil; F1-F2 = store præovulatoriske follikler; GI = mavetarmkanalen; OV = æggestok; S = ovarie stroma; SM = fast væv masse i æggestokkene; SP = milten UOD = øvre æggelederen; UT = livmoder.
Lokalisering af lymfocytter i normal ovarie, tidligt stadium og Late Stage æggestokkræft
CD4 + T-celler blev observeret inden for de thecal lag af follikler i normale æggestokke (figur 2 ), men ikke i granulosa celle eller oocyt rum i follikler. CD4 + -T-celler forekom i dets normale ovarie, forekommer sporadisk i stroma og støder op til follikler, inde atretiske follikler (ikke vist) og i nærheden af blodkar. I tumor-holdige æggestokke, forekom CD4 + -T-celler i stroma af både tidligt stadium (figur 3) og sen fase ovarietumorer (figur 4) og var mindre hyppige end enten CD8 + eller Bu1a + -celler. I modsætning til CD8 + T-celler og Bu1a + B-celler, CD4 + T-celler var nær, men ikke inden, tidlige tumorlæsioner (figur 3). CD8 + -T-celler blev ligeledes lokaliseret i normale follikler og i stroma nær follikler (figur 2). CD8 + T-celler blev fundet i tidlige og sene stadie tumorer (figur 3 og 4). Mens B (Bu1a +) og T-celler på lignende måde blev fordelt i æggestokkene stroma blev Bu1a + farvning sjældent findes i follikler (figur 2).
Bu1a +, CD4 + og CD8 + celler (pile) påvist ved immunhistokemi i normale ovarier i den æggestokkene stroma (S), der støder op til follikler (f), i thecal lag af follikler (dobbelt pil) og var rigeligt i cellen lag under æggestokkene overflade epitel (SE). Original forstørrelse, 10x; skala bar = 100 um. Udvalgte områder (stiplede bokse) er vist i en indsat ved større forstørrelse for Bu1a og CD8-farvning; inset skala barer = 10 um.
Bu1a +, CD4 + og CD8 + celler er vist i tilsvarende regioner af serielle snit, der indeholder tumorfoci. Flere CD8 + T-celler og B-celler er til stede i tumorfoci end CD4 + T-celler. (A) early stage tumor viser CD4 + -celler i en tumor med dårligt differentierede (PD) struktur, og CD8 + og B-celler i et tilstødende godt differentieret (WD) område. (B) En lille læsion (stiplet cirkel) indeholdende CD8 + T-celler og Bu1a + -celler, men ikke CD4 + celler. (C) Et område med neoplastiske celler indeholdende CD8 + og Bu1a + celler, men ikke CD4 + celler. Original forstørrelse, 10x; skala bar = 100 um. Stained CD8 + lymfocytter i et udvalgt område (prikket boks) er vist i en indsat ved højere forstørrelse; skala bar = 10 um.
Lignende regioner af tre tumortyper er vist i serielle snit farvet for Bu1a, CD4 og CD8.
Øverste række:
Et eksempel på sektioner fra en serøs ovarietumor viser få CD4 + celler i tumoren sammenlignet med Bu1a + og CD8 + -celler.
Midterste række:
Et eksempel fra en mucinøs æggestokkene tumor viser aflejringer af Bu1a +, CD4 + og CD8 + celler mellem kirtler og i hele tumoren.
Nederste række:
Et eksempel på en endometrioide ovarietumor viser Bu1a +, CD4 + og CD8 + -celler. Original forstørrelse, 10x; skala bar = 100 um. Stained CD8 + og CD4 + lymfocytter i udvalgte områder (stiplede kasser) er vist i mellemværker på højere forstørrelse; skala bar = 10 um.
kvantitativ vurdering af antal immunceller i normalt ovarie, tidligt stadium og Late Stage æggestokkræft
I indledende forsøg, det samlede antal T og B-celler isoleret fra hele ovarie blev bestemt ved flowcytometri. En repræsentativ flowcytometri scatter plot viser størrelsesfordelingen af celler fra en normal ovarie uden en tumor (figur 5A) med en port på lymfocyt-regionen (R1). De tilsvarende repræsentative dot plots for hver fluorescerende mærke er også vist (figur 5B). Selvom der syntes at være færre CD4 + -T-celler i ovarietumorer sammenlignet med normale ovarier (figur 5C), var der også en signifikant variation i CD4 + celleindhold blandt høns, hvilket sandsynligvis skyldes variationer i follicle indhold og tumor stadium som det ses i celle tællinger opnået under anvendelse morfometri. En begrænsning ved flowcytometri er, at hele æggestok anvendes til fremstilling af lymfocytter og således placeringen af immune celler i forhold til tumorer eller follikler kan ikke vurderes. Ligeledes var det ikke muligt at bestemme tumortype, ovarie- morfologi eller tumor stadium ved histologi. Det samlede antal T- og B-celler blev bestemt yderligere ved morfometrisk evaluering af immunofarvede sektioner af normalt ovarie og ovarietumorer. Denne tilgang gjorde det også muligt at bestemme æggestokkene tumor stadie og vurdere eventuelle forskelle i lymfocyt placering
(A):. Repræsentant frem vs. sidespredning plot for celler fra en hel æggestok viser porten (R1), der anvendes for lymfocytter. (B) Celler blev først gated hjælp porten i (A) og derefter farvet med enten Bu1a-APC, CD4-FITC eller CD8-PE. Procenten af mærkede celler i porten er vist i nederste højre kvadrant for hver plet. (C) Det samlede antal Bu1a-APC, CD4-FITC og CD8-PE mærkede celler fra normale og tumor høne æggestokke (n = 3 /gruppe), er vist med medianen angivet ved den vandrette linje.
Inden follikler (figur 6), nedsat CD8 + T-celler (p = 0,052), mens CD4 + T-celler forøget (p = 0,009) fra normal til tidlige tumorer og normal til sene fase tumorer. B-celler blev ikke typisk forbundet med hårsække og blev ikke talt. Antallet af follikler faldet eller var fraværende i æggestokkene med tumorer sammenlignet med normale ovarier (figur 1).
(A) B (Bu1a +) celler blev sjældent findes i follikler og derfor ikke blev talt. Antallet af CD4 + -T-celler steg en smule (p = 0,052) og antallet af CD8 + -T-celler faldt (p = 0,009) i sen ovarietumorer sammenlignet med normale ovarier. På hvert trin var der mere CD8 + sammenlignet med CD4 + -T-celler (normal ovarie, p = 0,003; tidligt stadium tumor, p = 0,008; sent stadium tumor, p = 0,007). Follikler blev defineret som vist i (B) og celler i det udpegede område blev talt, og gennemsnittet bestemmes pr 2 × 10
5 um
2 område af follikel. Tre sektioner fra hver æggestok for hver høne blev talt ved en forstørrelse på 20x; skala bar = 50 um. Fejllinjer repræsenterer gennemsnit ± SEM.
stromale (dvs. ikke-follikulært) immune celleindhold steget med tumor fase (figur 7) og var præget af et større antal CD8 + T-celler end CD4 + T-celler i hver fase (CD8 vs. CD4-celler til normal æggestok, p = 0,003; tidligt stadium svulst, p = 0,008 og sent tumor, p = 0,007). Svarende til flowcytometri, Bu1a + -celler og CD8 + T-celler var mere talrige end CD4 + T-celler i normalt ovarie og tidlige og sene stadier ovarietumorer (figur 7A, B og C). Antallet af CD4 + T-celler var signifikant lavere i fase tumorer tidlige forhold til normal ovarie (p = 0,03) og der var ingen forskel mellem Bu1a + og CD8 + -celler. CD4 + -celler blev signifikant forøget (p = 0,05), mens stigningen i middelværdierne for Bu1a + og CD8 + celler ikke nåede signifikans i sen tumorer sammenlignet med normale. Samlet set alt immunceller steget fra normal til tidligt til sent stadie tumorer (figur 7D).
Som vist i paneler AC for normal (N), tidlig (E) og sene stadie (L) kræft i æggestokkene, Bu1a + -celler og CD8 + T-celler var mere talrige samlet end CD4 + T-celler, især i den sene tumorer. I felt D blev B- og T-celler tællinger tilsat. Der var en generel stigning i de samlede (ikke-follikulært) immunceller fra normal æggestok til sene fase tumorer. Celler blev talt i flere felter i tre sektioner fra hver æggestok for hver høne ved 20x forstørrelse. Det gennemsnitlige antal B (Bu1a +) celler og CD4 + og CD8 + T-celler blev estimeret fra 11 høner med normale ovarier (antal felter talt var Bu1a = 524, CD4 = 425 og CD8 = 360), 8 høner med tidlig stadie ovariecancer ( antal felter talt var Bu1a = 228, CD4 = 190 og CD8 = 225) og 7 høns med sent æggestokkræft (antal felter talt var Bu1a = 180, CD4 = 190 og CD8 = 200). Da de områder evalueret varierede i størrelse, alle tæller var normaliseret til 8 × 10
4 um
2.
Antallet af immunceller afveg tumortype (figur 8). Kun de sene stadier (III /IV) tumorer blev vurderet, da bestemmelsen af tumor histologi var klarere på disse stadier. Der var flere B-celler i serøse tumorer end i mucinøs (p = 2,6 × 10
–
14) eller endometrioide (p = 7,6 × 10
–
9) tumorer. Serøse tumorer havde signifikant færre CD4 + T-celler i forhold til mucinøs (p = 3,8 × 10
–
5) eller endometrioide (p = 2,9 × 10
–
9) tumorer. Antallet af CD8 + T-celler var ens blandt tumortyper (p 0,2).
Siden den histologiske klassifikation af tumorer er tydeligst i sen ovarietumorer, blev morfometriske analyse begrænset til sene fase tumorer. Klare celle tumorer opstod i relativt lave tal, og blev ikke medtaget i analysen. Antallet af Bu1a +, CD4 + og CD8 + -celler blev talt som beskrevet i fremgangsmåderne for serøs (66 felter i 3 høne ovarier); mucinøse (53 felter i 2 høne æggestokke) og endometrioide (37 felter tælles i 2 høne æggestokke) histologi tumorer. Der var signifikant flere B (Bu1a +) celler i serøse tumorer end i mucinøs (p = 2,6 × 10
–
14) eller endometrioide (p = 7,6 × 10
–
9) tumorer. I modsætning hertil serøse tumorer havde signifikant færre CD4 + T-celler i forhold til mucinøs (p = 3,8 × 10
–
5) eller endometrioide (p = 2,9 × 10
–
9). Antallet af CD + 8 T celler adskilte sig ikke væsentligt ved tumor histologi (p 0,2).
Diskussion
Denne undersøgelse er den første til at undersøge immunceller forbundet med ovarietumorer i æglægning høne model af spontan kræft i æggestokkene. Det totale indhold immuncelle i æggestokkene med tumorer blev højere sammenlignet med den i normale ovarier. Resultatet var ens ved anvendelse af to standardmetoder; flowcytometri og morfometrisk analyse af immunhistokemisk mærkede vævssnit. Ved flowcytometri, der var relativt store variationer i celleantal for hver celletype, især for hønsene med tumorer. Disse variationer fundet af flowcytometri kan til dels skyldes variabel optagelse af celler fra blodkarrene og den variable indhold af aktive follikler som ovariet skrider fra en normal ovarie til æggestokke med et fremskredent tumor. Derfor blev mere vægt på bestemmelse af immunceller tal ved immunhistokemisk morfometri da placeringen af lymfocytter i forhold til tumoren eller hårsække kunne vurderes og da tumorer kunne klassificeres ved histologi og scene.
Konstateringen af immune celler i normalt ovarie i denne undersøgelse er i overensstemmelse med tidligere studier i høner [38], andre dyremodeller [47] og mennesker [45], [48]. I en detaljeret undersøgelse af den normale rotte æggestok, lymfocytter var rigelige og også øget forbigående sammenfaldende med ægløsning [47]. Når rotter blev splenectomized blev æggestokkene lymfocytter reduceret, men ikke elimineret tyder på, at i normalt ovarie, der er “resident” lymfocytter, eller at ikke alle lymfocytter trafik fra milten. I denne undersøgelse af hønen, der synes også at være “resident” lymfocytter i normalt ovarie, der støder op til det ydre cellelag af folliklerne samt i æggestokkene stroma og overflade epitel. Dette rejser et spørgsmål om, hvorvidt immunceller findes i ovarietumorer stammer fra milt eller lymfeknuder, eller om hjemmehørende immunceller i æggestokkene bidrage til malign omdannelse.
I den normale høne æggestok, B-celler blev fundet med relativt høj frekvens i stroma og medullære regioner, svarende til CD4 + og CD8 + -celler. Imidlertid blev B celler sjældent observeret inden for de hårsække, i modsætning til CD4 + og CD8 + -celler. Den relativt høje forekomst af T-celler i folliklerne antyder, at de har en rolle i normal ovariefunktion. Mens markøren Bu1a er specifik for høne B-celler, er det også udtrykt på aviær makrofager og i meget mindre grad på andre ikke-B celletyper [49]. Således er yderligere undersøgelse nødvendig med sekundære markører til at differentiere B-celler og ikke-B-celler i hønen. Ikke desto mindre viste denne undersøgelse, at B-celler udgør en væsentlig del af lymfocytterne i ovarietumorer.
Baseret på talrige rapporter fra andre grupper i dyremodeller og mennesker blev immunceller forventes i ovarietumorer [50], [ ,,,0],51], [52]. Det er blevet vist, at patientoverlevelse er korreleret med antallet af tumorinfiltrerende lymfocytter [5] i kirurgisk materiale, som sædvanligvis er fremstillet af sent stadium sygdom. Det er vanskeligt at fastlægge den rolle, disse celler i tidlige stadier siden ovariecancer sjældent opdages tidligt hos mennesker. Ligeledes når ovariecancer induceres i dyremodeller er det ikke klart, om de initieringsbegivenheder er modeller af spontan tumor udvikling. Der er ingen undersøgelser af immunceller i høne æggestokkene tumorer og få undersøgelser, der sammenligner disse celler i normal æggestok og ovarietumorer at vurdere potentielle ændringer under spontan æggestokkene tumor udvikling. I denne undersøgelse fandt vi, at det samlede antal af immunceller i æggestokken typisk højere i nærvær af spontane tumorer, hvilket er i overensstemmelse med den accepterede koncept, immunceller trafik til og invadere tumorer [5], [53], [ ,,,0],54]. Desuden immunsystemet celleindhold er størst i slutningen af fase tumorer, især i slutningen af fase serøse tumorer. Da denne tendens er den samme som hos mennesker [50], [52], [55], [56], [57], resultaterne understøtter brugen af hønen model til at undersøge immunresponser på ovarietumorer og for præklinisk vaccineforsøg.
Hos mennesker lymfocyt bestemt ved immunhistokemi i ovarietumorer er ikke konsekvent i forskellige undersøgelser, især med hensyn til B-celler [58]. Sene menneskelige æggestokkene tumor biopsier indeholdt primært CD8 + /CD45RO + T-celler og CD68 + makrofager, mens NK og B-celler forekom i de laveste tal [50]. I modsætning hertil blev CD20 + B-celler findes i 42% af tumorer i æggestokkene i en anden undersøgelse [6]. I overlevelse studier blev et større antal CD19 + B-celler associeret med en dårligere prognose [59], mens højere antal CD20 + B-celler var associeret med forøget sygdomsfri overlevelse [6]. Forskelle i disse undersøgelser kan skyldes anvendelsen af forskellige markører, men de kan også afspejle forskelle i den relative indhold af forskellige tumor histo-typer i disse [6] undersøgelser. B-celler og CD8 + -T-celler blev set i ovarietumorer af hønen med relativt høj frekvens, mens CD4 + -celler blev påvist ved en relativt lavere frekvens.
Immune celler forekom hos alle tre undersøgte tumor histo-typer ( serøs, mucinous, og endometrioide), men der var mere immunceller i sen serøse tumorer.
Leave a Reply
Du skal være logget ind for at skrive en kommentar.