PLoS ONE: Utility af Serum miR-125b som en diagnostisk og prognostisk markør og dens alliance med et panel af tumorsuppressorgener i Epithelial kræft i æggestokkene

abstrakt

MikroRNA’er (miRNA) er blevet fundet at være dysreguleret i epitelial ovariecancer (EOC) og kan fungere som enten tumorsuppressorgener (GTS) eller som onkogener. Hypermethylering af miRNA tavshed tumor undertrykkende funktion af en miRNA eller hypermethylering af et GTS regulere, at miRNA (eller omvendt) fører til dets tab af funktion. Nærværende undersøgelse har til formål at evaluere effekten af ​​afvigende microRNA-125b (miR-125b) udtryk på diverse klinisk-patologiske træk i epitelial kræft i æggestokkene og dens association med unormal methylering af flere GTS. Vi indskrevet 70 nydiagnosticerede tilfælde af epitelial ovariecancer, indspillet deres kliniske historie og 70 raske frivillige kvinder. Serum MIR-125b niveauer blev bestemt ved kvantitativ revers transkription polymerasekædereaktion (QRT-PCR) og status for methylering af forskellige GTS blev undersøgt ved methylering specifik PCR. ROC-kurver blev konstrueret til at estimere den diagnostiske og prognostiske nytten af ​​MIR-125b. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at sammenligne overlevelseskurver. Ekspression af MIR-125b viste sig at være signifikant opreguleret (p 0,0001) sammenlignet med raske kontroller. Ekspressionsniveauet af MIR-125b viste sig at være signifikant associeret med FIGO stadium, lymfeknude og fjernt metastase. ROC-kurven for diagnostisk potentiale gav betydelig AUC med en retfærdig sensitivitet og specificitet. ROC-kurver til prognose givet betydelige AUC’er for histologisk bedømmelse, distal metastase, lymfeknude-status og overlevelse. Udtrykket af miR-125b også korreleret signifikant med hypermethylering af GTS. Vores resultater viser, at DNA hypermethylering kan være involveret i inaktivering af miR-125b og miR-125b kan fungere som en potentiel uafhængig biomarkør for kliniske resultat i EOC

Henvisning:. Zuberi M, Khan I, Mir R, Gandhi G, Ray PC, Saxena a (2016) Utility af Serum miR-125b som en diagnostisk og prognostisk markør og dens alliance med et panel af tumorsuppressorgener i Epithelial kræft i æggestokkene. PLoS ONE 11 (4): e0153902. doi: 10,1371 /journal.pone.0153902

Redaktør: Ratna B. Ray, SAINT LOUIS UNIVERSITET, UNITED STATES

Modtaget: Februar 4, 2016 Accepteret: April 5, 2016; Udgivet: 19 April, 2016

Copyright: © 2016 Zuberi et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er blevet medtaget i papiret og dets støtte Information filer

finansiering:. forfatterne modtaget nogen specifik finansiering til dette arbejde

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

kræft i æggestokkene er den hyppigste årsag til kræft dødsfald på verdensplan. Den høje dødelighed kan skyldes vanskeligheder med at diagnosticere det på et tidligt tidspunkt og mangel på effektive behandlinger til patienter med en fremskreden eller recidiverende sygdom [1]. Der er derfor en kritisk forudsætning for udvikling af prognostiske og prædiktive markører til at opdage det tidligt og til at optimere behandlingen.

MikroRNA’er (miRNA) er en klasse af små ikke-kodende RNA-molekyler, der kan fremkalde posttransskriptionel lyddæmpning af målgener ved at interagere med deres 3′-UTR (utranslateret region), således at regulere mange vigtige biologiske processer, såsom celleudvikling, differentiering og apoptose [2]. Under hensyntagen til de vigtige regulatoriske roller miRNA spiller i udviklingen af ​​kræft og progression, er der gennemført flere undersøgelser for at identificere miRNA som potentielle biomarkører for kræft diagnose, prognose og personlig terapi [3].

Aberrant miRNA udtryk har været hyppigt observeret i forskellige typer af humane tumorer. Undersøgelser tyder på, at miRNA kan fungere som enten tumorsuppressorgener (GTS) eller onkogener [4]. Nylige undersøgelser rapporteret dysregulering af MIR-125b i forskellige cancere [5,6]. Imidlertid har den mekanisme, hvormed MIR-125b bidrager til epitelovariecancer (EOC) ikke dokumenteret og er stadig relativt uklare. Høj udtryk for miR-125 var blevet observeret i gliomer og prostatakræft [7,8], mens miR-125 niveauer blev set at falde i bryst- og mavekræft [9,10]. Til dato, ekspressionsniveauet af MIR-125b i epitelovariecancer står endnu ikke klart. Som pr formodede promotor-regionen, er promotoren for miR-125b indlejret i CpG ø [11].

I betragtning af det ovenfor anførte, testede vi udtryk for miR-125b i serum af epitelial ovariecancerpatienter at belyse dens anvendelighed som en diagnostisk /prognostisk markør. Vi analyserede også methylering mønster i et panel af tumorsuppressorgener såsom DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 og P14 og udforskede sin associering med afvigende ekspression af miR-125b.

Materialer og metoder

Patient prøver

Blodprøver blev indkøbt fra klinisk diagnosticerede epitelial æggestokkene kræftpatienter. De patienter (n = 70) blev rekrutteret fra Institut for Gynækologi og Obstetrik, Lok Nayak Hospital, New Delhi mellem juni 2012 og oktober 2014. Samme antal (n = 70) af kvindelige frivillige (alder matchede) fungerede som kontroller. Serum blev separeret ved centrifugering. Alle prøver blev opsamlet og opbevaret ved -70 ° C og optøet umiddelbart før assay. Komplet kliniske data og aktuelle behandling plan blev opnået. Formålet med prøvetagning blev forklaret for alle patienter og skriftligt informeret samtykke blev opnået inden tilmelding. Undersøgelsen blev godkendt af Institutional etiske komité på Maulana Azad Medical College, New Delhi, Indien.

DNA Extraction

Genomisk DNA blev isoleret fra blodprøver fra patienter og kontroller ved hjælp af Geneaid DNA isolation Kit (Taiwan) i overensstemmelse med producentens anvisninger. Kvaliteten og integriteten af ​​DNA fra disse væv blev kontrolleret ved elektroforese på 1% agarosegel, kvantificeret spektrofotometrisk, og derefter opbevaret ved -20 ° C til yderligere anvendelse.

bisulfit Modifikation af DNA

bisulfitbehandling blev udført under anvendelse af BisulFlash DNA Modification Kit (Epigentek, USA) i overensstemmelse med producentens retningslinier. Denne procedure ændrer umethylerede cytosiner til uracil nukleotider, men ændrer ikke denatureret cytosin nukleotider. Bisulfit omdannelse af DNA blev udført ved 95 ° C i 20 minutter, hvorunder ikke-methylerede cytosiner blev omdannet til uracil fuldstændigt. Dette blev efterfulgt af den konverterede DNA oprydning og opbevaring ved -80 ° C før brug.

Methylering-specifik PCR

Methylering-specifik PCR (MSP) er følsom og specifik for methylering af stort set enhver blok af CpG steder i en CpG ø. Hyppigheden af ​​CpG steder i CpG øer gør denne teknik nyttig og ekstremt følsomme for disse regioner. Bisulfit behandlede DNA blev amplificeret med specifikke PCR-primere (S1 Table), der adskiller methyleret og umethyleret DNA. Disse primere forstærke forskellige størrelse produkter til DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 og P14 (for methylerede og umethylerede sekvenser), som vist i den supplerende fil (S1 Fig). PCR blev udført i en blanding 25 pi indeholdende 10 pi Drøm Taq Master Mix (Fermentas) indeholdende optimeret buffer, 4 mM MgCl

2, rekombinant Taq-DNA-polymerase, 0,4 mM af hver dNTP, 0,6 pM af hver primer, og 4.0 pi behandlet med bisulfit template-DNA.

RNA-ekstraktion, polyadenylering og cDNA-syntese

RNA fra serumprøver blev isoleret ved Trizol fremgangsmåde og opbevaret i RNase-frit rør ved -70 ° C. Kvaliteten og integriteten af ​​RNA blev bestemt ved A

260/280 ratio. Poly-A hale blev udført under anvendelse Poly A-polymeraseenzym og rATP (Agilent, Cat # 600.036). Revers transkriptase og andre nødvendige reagenser til cDNA-syntese blev efterfølgende tilsat for at omdanne poly (A) tailed miRNA til cDNA under anvendelse af en oligo-dT adaptor-primer tilvejebragt med kittet. Adapteren primer har en unik sekvens i dens 5′-ende, der tillader amplifikation af cDNA’er i realtid QRT-PCR-reaktioner.

miRNA detektion af qPCR

Relativ kvantitativ realtids-PCR (qPCR ) blev anvendt til at måle ekspressionen af ​​miRNA. qPCR blev udført på en Rotor Gene (Qiagen) under anvendelse af Maxima SYBR Green qPCR mastermiksens (Fermentas), MIR-125b specifik fremadrettet primer (Qiagen) (tabel 1), en fælles universel revers primer og snU6 som en endogen kontrol. 100 ng af cDNA-produktet amplificeret i revers transkription trin ovenfor blev kvantificeret i et 20 pi reaktionsvolumen ved anvendelse af følgende amplifikationsprogram: DNA

Taq

polymerase aktivering ved 95 ° C i 5 minutter, efterfulgt af 40 amplifikationscykler af denaturering ved 95 ° C i 10 s, annealing ved 61 ° C i 20 s, og forlængelse ved 72 ° C i 10 s. Endelig blev en smeltekurve genereret ved at tage fluorescerende målinger hver 0,5 ° C i 25 s fra 50 ° C indtil 95 ° C for at sikre et enkelt PCR-produkt. De real-time PCR forsøg blev gentaget mindst tre gange.

Ct-værdier for husholdning U6 snRNA og teste mir-125b blev anvendt til beregning af delta Ct (ACt) værdier mellem test- og referencestoffer gener i både normal raske kontrolpersoner og test patienter. Delta delta Ct (ΔΔCt) værdier mellem raske kontroller og patienter var baseret på forskellen i ACt værdier mellem de to sæt. Dette blev brugt til at beregne den eksponentielle forskel baseret på 2

-ΔΔCt. Værdierne blev normaliseret og udtrykt som fold-ekspression i forhold til raske kontrolpersoner.

Statistical Analysis

korrelationer mellem methylering niveauer af tumorsuppressorgener og de kliniske og patologiske parametre blev analyseret med Chi -square test eller Fisher eksakt sandsynlighed analyse. Forskellen på miR-125b udtryk niveauer mellem epitelial æggestokkene kræftpatienter og kontroller blev undersøgt af Students

t

-test. ROC-kurver blev konstrueret under anvendelse XLSTAT software. Overlevelse analyse blev udført ved hjælp af Kaplan-Meier plots og log-rank (Mantel-Cox) test. Dataanalyse for qPCR blev udført ved den sammenlignende tærskelcyklus (Ct) metode. Hver prøve blev undersøgt i tre eksemplarer og mængderne af PCR-produkterne produceres blev normaliseret til den interne kontrol. Gene og miRNA ekspressionsniveauer blev opnået ved relativ kvantificering under anvendelse af 2

(- ΔΔCt) metode. Konstateringer større eller mindre end 1, blev anset for at indikere overekspression eller underekspression hhv. Alle værdier var standardiseret i forhold til de normale kontrolværdier, der var repræsenteret en værdi på 1. Forholdet mellem miR-125b og methylering status GTS blev undersøgt af Mann-Whitney

U

test. SPSS-version 16.0 for Windows (SPSS Inc., IL, USA) og GraphPad Prism 6 til Windows (Version 6.05) blev anvendt til statistisk analyse. Resultaterne blev betragtet som signifikant, når

s

var. 0,05

Resultater

Patient karakteristika

Kliniske-patologiske funktioner, herunder alder, histologisk kvalitet og type , tumorstørrelse, menopausestatus, FIGO stadium, lymfeknude-status, CA125-niveauer etc. er vist i tabel 2. for at belyse ekspressionen af ​​mIR-125b på indtræden af ​​cancer, blev epitelial ovariecancer patienter inddelt i to grupper, ≤ 45 år (57,1%) og 45 år (42,8%). Sager blev inddelt i henhold til FIGO iscenesættelse af EOC og histopatologiske typer.

Fordeling af miR-125b udtryk mønster i de tilfælde og kontroller

Tabel 3 viser fordelingen af ​​miR fold ændre udtryk blandt cases og kontroller. Der var signifikant forskel (p 0,0001) observeret med serum MIR-125b ekspression i epitelial ovariecancer. One-sample t-test blev anvendt til at evaluere miRNA ekspression mellem patienter og raske kontroller. Niveauet af miR-ekspression i kontroller blev sat til den ene og derefter beregnet miR udtryk i matchede ovariecancer prøver. Serum udtryk for miR-125b viste sig at være 5 folder mindre i kontrol end den tilsvarende epitelial kræft i æggestokkene patient (tabel 3).

Angivelse af miR-125b og dens diagnostiske potentiale i epitelial ovariecancer kræft

Real time relativ kvantificering analyse viste mere end 5 gange stigning i serum-miR-125b udtryk blandt epitelial æggestokkene kræftpatienter end raske kontrolpersoner (tabel 3). ROC kurve analyser blev udført for at evaluere den prædiktive magt miR-125b for ondartet kræft i æggestokkene og illustreret i figur 1. Relativ udtryk for serum miR-125b kunne skelne patienter med malignt ovariecancer fra raske kontrolpersoner, med en effekt AUC på 0,728 ( 95% CI = 0,64-0,81) ved en følsomhed på 62,3% og specificitet på 77,1% fra en cut-off score på 3,76.

(a) Dot plot, der viser den relative ekspression af mIR-125b i patienter og kontroller (B) ROC kurve for miR-125b udstille sit diagnostiske potentiale i epitelial kræft i æggestokkene.

miR-125b opregulering i relation til klinisk-patologiske træk

tabel 2 viser sammenhængen mellem miR -125b udtryk og klinisk-patologiske karakteristika epitelial æggestokkene kræftpatienter. Omkring 64% af patienterne i 45 år viste høj ekspression af miR-125b. Næsten 70% patienter med moderat kvalitet tumor udstillet forøget ekspression af miR-125b bortset fra 48% af patienterne med godt differentieret tumor og 32% dårligt differentieret tumor. Forhøjet udtryk for miR-125b blev set i omkring 65% serøs adenocarcinom patienter og omkring 50% af patienterne med mucinøs adenocarcinom. Når korreleret med tumorstørrelse blev høj ekspression af miR-125b observeret, når tumor var på sit indledende fase, dvs. 10cm

3. Desuden er alle patienter i den tidlige fase (fase I og II) viste høj ekspression af miR-125b. Patienter, der ikke har metastase dvs. inddrage disse patienter i den tidlige fase, opsummerede næsten 67% af patienter med forøget ekspression af MIR-125b sammenlignet med patienter (5%) med metastatisk sygdom. Ligeledes 65% patienter uden lymfeknudemetastase viste højere ekspression af MIR-125b. Menopausal status, nulliparity, serum CA125 niveauer og koncentration hæmoglobin (Hb) ikke associere væsentligt med ekspressionen af ​​miR-125b. Figur 2 viser de betydelige forhold med hensyn til at iscenesætte, lymfeknude metastaser og fjernmetastaser status med ekspression af miR-125b i epitelial æggestokkene kræftpatienter.

miR-125b med hensyn til fase af epitelial ovariecancer cancer.

en klar afgrænsning blev observeret med hensyn til ekspressionen af ​​mIR-125b og FIGO stadier i epitelial ovariecancer. Alle patienter i trin I og trin II præsenteret højere ekspression af MIR-125b, mens patienter i stadium III og IV tælles kun 10% og 5% af patienterne med forøget ekspression (fig 2A).

MIR-125b er opreguleret i ikke metastaseret tumorer.

En statistisk signifikant (p = 0,002) korrelation observeredes mellem metastaser status epitelial æggestokkene kræftpatienter og miR-125b udtryk. Ekspression af MIR-125b blev fundet at være specifikt forøget hos patienter uden metastaser (fig 2B).

MIR-125b opreguleres i patienter uden lymfeknudemetastaser.

Som med fjernmetastaser , patienter uden lymfeknudemetastase viste en statistisk signifikant (p = 0,001) korrelation med ekspressionen af ​​mIR-125b (fig 2C).

ekspression af mIR-125b og dets prognostisk potentiale i epitelial ovariecancer

mIR-125b blev analyseret for dens sygdomsprogression, prognostisk betydning og overlevelse resultat i EOC. miR-125b blev evalueret for sygdomsudvikling med sammenslutningen af ​​sit udtryk med Figo stadier og forskellige andre klinisk-patologiske parametre for epitelial kræft i æggestokkene. Den prognostiske signifikans blev belyst ved ROC kurver. For at bruge ROC kurve analyse blev de kliniske og tumor egenskaber gjort binær og derfor dikotomiseret. Stage blev dikotomiseret så tidligt (I + II) eller sent (III + IV), tumorklassificering så lav (G1 + G2) eller høj (G3), node medvirken ingen lymfeknudeinvolvering eller enhver lymfeknudeinvolvering, fjernmetastaser som til stede eller fraværende, overlevelse som død på grund af epitelial kræft i æggestokkene eller andet (censureret /live)

udtryk for miR-125b og histologisk klasse gav en signifikant AUC på 0,676 (95% CI: 0,558-0,793). med en følsomhed på 66,7% og specificitet på 62,6% ved en optimal afskæringsværdi på 3,91 (fig 3A) (tabel 4). ROC-kurven for fjernmetastaser gav en AUC på 0,891 (95% CI: 0,838-0,944) med en følsomhed og specificitet på 94,1% og 70,5% henholdsvis ved en optimal afskæringsværdi på 4,34 (Fig 3B). En AUC af 0,773 (95% CI: 0,658 til 0,887) blev opnået i ROC-kurve i forhold til lymfeknudemetastaser og ved en optimal afskæringsværdi på 5,85, følsomheden var 73,7% og specificiteten var 80,8% (fig 3C). ROC-kurve for overlevelse gav et AUC på 0.660 (95% CI: 0,564-0,756) med en følsomhed på 64,3% og specificitet på 67,0% ved en optimal cut-off score på 3,91 (Fig 3D)

overlevelse analyse blev udført af Kaplan-Meier-kurve og log-rank test (fig 4A). Der var ingen signifikant sammenhæng fundet mellem miR-125b udtryk og samlet overlevelse af patienter med ≤1 fold udtryk for miR-125b. Men når histologiske undergrupper blev anslået for overlevelse separat, blev det konstateret, at patienter med mucinøse histotypes havde en overlevelsestid på 16 måneder, mens patienter med serøse histotypes udstillet en overlevelsestid på 9 måneder (Fig 4B).

Angivelse af miR-125b i forbindelse med promotor hypermethylering af tumorsuppressorgener

den relative udtryk for miR-125b blev vurderet i forhold til promotor hypermethylering velkendte tumorsuppressorgener-DAPK1, p16, RASSF1A , PTEN, BRCA1 og P14. Ud af disse, RASSF1A og PTEN gener viste en statistisk signifikant sammenhæng mellem afvigende hypermethylering deres promotor og den relative ekspression af miR-125b i epitelial æggestokkene kræftpatienter. Patienter med RASSF1A promotor hypermethylering påvist nedregulering af MIR-125b ekspression (p = 0,005) (figur 5). Tilsvarende patienter med PTEN promotor hypermethylering viste nedregulering af MIR-125b ekspression (p = 0,01). Ingen anden tumorsuppressorgen udviste en statistisk signifikant association med MIR-125b ekspression.

(A) DAPK1 (B) p16 (C) RASSF1A (D) PTEN (E) BRCA1 (F) p14. Positive og negative afbilder tilstedeværelsen eller fraværet af promotoren hypermethylering af den angivne tumorsuppressorgen henholdsvis.

Diskussion

Udviklingen af ​​epitelial ovariecancer carcinogenese er en flertrinsproces, der indebærer dysregulering af onkogener og tumorsuppressorgener. Moderne undersøgelser har rapporteret, at microRNA-associeret transkriptionelt reguleret genekspression spiller en afgørende rolle i initieringen, udviklingen og progressionen af ​​epitelial ovariecancer, ved at holde en regulatorisk kontrol af celleproliferation, cellecyklus, apoptose, og metastase. miR-125b er blevet rapporteret at være involveret i flere kræftformer [12]. MIR-125b funktioner enten som en onkogen eller tumorsuppressorgen. Det opreguleres og viser onkogent potentiale i nogle kræftformer det udløser celledeling, mens hæmme apoptose. På den anden side er det åbenlyst nedreguleret i forskellige andre kræftformer. Vores forståelse med hensyn til de modstridende roller miR-125b i overflod af kræft er stadig begrænset. Et aspekt af vores mål var at udforske den afvigende ekspression af MIR-125b i epitelial ovariecancer i forhold til de klinisk-patologiske egenskaber. Det andet aspekt var at teste ekspressionen af ​​MIR-125b med henvisning til de unormalt methylerede GTS for at levende afslutte deres mulige rolle i enten regulering eller reguleres af MIR-125b.

MIR-125b menes at målrette kendetegnende for kræft i den ene eller den anden måde, regulering flere gener involveret i reaktionsvejen, der fører til udvikling af kræft fænotype. Afvigende DNA methylering har en kritisk resultat på epitelial kræft i æggestokkene initiering og progression. Flere forskere har ledt efter hypermethyleringen af ​​miRNA-promotoren i forskellige kræftformer som en grund til inaktivering af denne særlige miRNA og fremhæve den formodede rolle epigenetisk forstyrrelser i at producere de afvigende mønstre af ekspressionen af ​​miRNA i cancerceller [13]. Flere linjer af beviser støtter ideen om, at dysregulering af miRNA kan føre til afvigende DNA methylering i kræft, og at miRNA i stand til at regulere

DNMT

gener er sigende nedreguleret i cancer [14,15]. miRNA, der virker som tumorsuppressorer har vist sig at være methyleret i tumorceller indikerer betydningen af ​​at studere de to kræfter sammen-epigenetik og miRNA [16]. Desuden kan DNA-methylering profil af tumorer anvendes som en signatur til at definere tumortype, klinisk prognose og behandlingsrespons [17,18]. miRNA transkriberet fra CpG-øer undergår DNA-methylering associeret undertrykkelse med en lignende kromatin kontekst til kodende gener, såsom binding af transskriptionsrepressor methyl-CpG-bindende domæne proteiner [19,20]. Sådanne genetiske afsløring studier har banet vej til at identificere de mekanismer, der er ansvarlige for at forårsage kræft ravage på det molekylære niveau. Baseret på lignende linjer, valgte vi et panel af tumorsuppressorgener, som vides at være modtagelige i epitelial ovariecancer at undersøge, om deres afvigende methylering direkte eller indirekte påvirker ekspressionen af ​​MIR-125b, som igen fører til udvikling af cancer. Af de undersøgte tumorsuppressorgener, RASSF1A og PTEN gener opstod som sandsynlige kandidater, der kan spille en afgørende rolle i modulering af ekspressionen af ​​MIR-125b. Poliseno et al. har vist rolle PTEN udskrifter i modulering miRNA målretning ved at undersøge PTENP1 niveauer [21]. Identifikation og validering af talrige

PTEN

-targeting microRNA tyder på, at post-transkriptionel regulering spiller en central rolle i fastlæggelsen af ​​PTEN overflod i cancerceller [22-25]. Celler er meget følsomme over for selv mindre nedgang i PTEN niveauer, fremhæve betydningen af ​​microRNA-medieret PTEN regulering i kræft [26]. RASSF1A er en tumorsuppressor, som er en negativ regulator i RAS-MAPK-vejen og har reduceret ekspression i forskellige cancerformer. Det er blevet foreslået, at RASSF1A deltager i celleproliferation og apoptose ved regulering af MAPK-vejen og har virkninger på carcinogenese [27]. En anden undersøgelse af Banno et al. rapporteret at en reduceret ekspression af RASSF1A gen sker ved hypermethylering eller undertrykkelse af genekspression ved miRNA. Ekspression af miRNA selv kan øges eller mindskes ved promotor methylering, baseret på forskelle mellem normale og kræftceller [28]. Derfor vores undersøgelse har ekstrapoleret disse resultater og kan give en ny retning at undersøge ekspressionen af ​​miR-125b i en ny dimension.

Den seneste teknologiske fremskridt har hjulpet påvisning af miRNA ved optimal sensitivitet og specificitet. Cirkulerende miRNA dukker op som lovende diagnostiske biomarkører for kræft selvom deres anvendelighed til påvisning af tidlige neoplasmer stadig uklar. MIR-125b har vist sig at målrette mod flere gener, der er mere eller mindre relevante i dannelsen af ​​tumoren i forskellige celletyper. miR-125b fungerer som klassisk onkogen i en række tumorer, hvor dens overekspression kan føre til undertrykkelse af et tumorsuppressorgen eller blokerer dets apoptotiske maskiner. Dette understøttes yderligere af den konstatering, at miR-125b ekspressionsniveauerne er korreleret med reducerede overlevelsesrater [29,30]. En nylig undersøgelse fra Yamada et al. har også rapporteret et forhøjet niveau af MIR-125b i colorektal cancer. De identificerede miR-125b som en tidlig opdagelse biomarkør i tarmkræft på grund af den betydelige AUC (0,806) i ROC-kurven [31]. Giray et al. fundet en opregulering af miR-125b udtryk i hepatocellulært carcinom og foreslog, at det kunne fungere som en roman, non invasiv biomarkør i denne kræft [32]. Jiang og kolleger viste også en opregulering af MIR-125b in vivo og in vitro i endometrisk carcinom [33]. Desuden har overekspression af MIR-125b blevet undersøgt i flere kræftformer såsom pancreascancer [34], prostatacancer [35], brystcancer [36,37], lungecancer [38], glioblastoma [39], oligodendrogliale cancer [ ,,,0],7] blandt andre kræftformer. Omvendt har MIR-125b vist sig at blive nedreguleret i en række tumorer, såsom blærecancer [40], esophageal cancer [41], osteosarkom [42], prostatacancer [43], levercancer [44], brystcancer [ ,,,0],45], ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) [46], brystcancer [47], gastrisk cancer [48], glioblastoma [49] etc. I ovariecancer, har modstridende undersøgelser af mIR-125b gjort det en nødvendighed at kortlægge dens rolle dybt. Lee et al. rapporterede en nedregulering af MIR-125b i æggestokkene cancer væv og cellelinjer sammenlignet med raske kontroller [50]. Luo og kolleger har også for nylig rapporteret en nedregulering af miR-125b i æggestokkene kræft væv og cellelinjer [51]. Gadducci et al. også observeret lignende resultater [52]. Han et al. foreslog en ny behandlingsmetode ved hjælp miR-125b efterligne i behandlingen af ​​ovariecancer [53]. Guan et al. rapporterede, at overekspression af MIR-125b resulterede i inhibering af ovariecancer celleproliferation [54]. På den anden side, Kong og kolleger rapporterede en opregulering af miR-125 i kræft i æggestokkene og foreslog, at opregulering af miR-125b udtryk bidrager til cisplatin modstand gennem undertrykkelse af BAK1 udtryk [55]. Diverse udtryk for miR-125b blev rapporteret i resistente æggestokkene kræft cellelinier ved Sorrentino et al [56].

Foreningen af ​​miR-125b med forskellige klinisk-patologiske træk afspejler, at miR-125b kan fungere som en tidlig biomarkør for ovariecancer. Det forhøjede udtryk i de tidlige stadier i forhold til den fremskredent stadium taler mængder af dens betydning i angiver udbrud af sygdommen. Udtrykket af miR-125b i forhold til fjernmetastaser status og lymfeknude status antyder dens mulige potentiale i tidlig diagnosticering af kræft i æggestokkene.

Konklusion

Stigende antal undersøgelser har vist, at miR -125b spiller en afgørende rolle i forskellige cellulære processer og mange sygdomme, især carcinomer. Det er bemærkelsesværdigt, at funktionerne af MIR-125b er kontroversielle i forskellige kræfttyper. Derfor de kontroversielle egenskaber miR-125b i forskellige tumorer tyder på, at miR-125b har forskellige funktioner i kræft patogenese og progression, mens de underliggende mekanismer på anden celle sammenhæng brug for yderligere validering. De fremskridt, miR-125b besidder i kliniske programmer skal et nærmere kig for fremtidig behandling af cancer.

Støtte Information

S1 Fig. Elektroforetisk båndmønster for hypermethylering for et panel af tumorsuppressorgener visualiseret på 2% agarosegel under UV-gennemlysning

doi:. 10.1371 /journal.pone.0153902.s001 Salg (EPS)

S1 tabel. Sekvens af primere med annealing temperaturer og band størrelse, der anvendes til MS-PCR

doi:. 10,1371 /journal.pone.0153902.s002

(RTF)

Tak

Vi er taknemmelig for Dr. V Sreenivas for hans hjælp og samarbejde i den statistiske analyse af dette manuskript.