Abstrakt
Lille celle lungekræft (SCLC) er en ødelæggende sygdom med begrænsede behandlingsmuligheder. På grund af sin tidlige metastatisk natur og hurtig vækst, kirurgisk resektion er sjældne. Standard af pleje behandlingsregimer forblive stort set uændret siden 1980’erne, og fem-års overlevelse dvæler nær 5%. Patient-afledte xenograft er blevet etableret (PDX) modeller for andre tumortyper, forstærker materiale til forskning og tjener som modeller for præklinisk forsøg; dog har begrænset tilgængelighed af primær væv indskrænket udvikling af disse modeller for SCLC. Formålet med denne undersøgelse var at etablere PDX modeller fra almindeligt indsamlet aspirat med fin kanyle biopsier af primære SCLC tumorer, og vurdere deres anvendelighed som forskning modeller af primær SCLC tumorer. Disse transbronkial nål aspirater effektivt indpodet som xenografter, og tumor histomorphology var ligner primære tumorer. Resulterende tumorer blev yderligere karakteriseret ved H Udgivet: 8. maj 2015
Copyright: © 2015 Anderson et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres
Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer
Finansiering:. WCA, JA, BP, AL, MAP, SB, JR, BCS, og SJD er medarbejdere i Stem CentRx, Inc., et bioteknologisk selskab med fokus på terapeutisk målretning af cancer stamceller. Den bidragyder ydet støtte i form af lønninger til forfatterne WCA, JA, BP, AL, MAP, SB, JR, BCS, og SJD, men havde ikke nogen ekstra rolle i studie design, indsamling og analyse data, beslutning om at offentliggøre eller udarbejdelse af manuskriptet. De specifikke roller disse forfattere er formuleret i »forfatter bidrag« sektion
Konkurrerende interesser:. WCA, JA, BP, AL, MAP, SB, JR, BCS, og SJD er aktionærer i Stem CentRx, Inc ., en privatejet og finansieret selskab. Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE politikker om datadeling og materialer
Introduktion
Lungekræft er den førende årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan. Blandt disse, småcellet lungekræft (SCLC) har den højeste dødelighed, der tegner sig for ~ 15% af lungekræft dødsfald i USA [1]. Fem-års overlevelse for SCLC patienter forbliver nær 5%, med de fleste bukke under for sygdom inden for et år af diagnose. SCLC er meget metastatisk og skrider hurtigt. Kirurgisk resektion forbedrer ikke overlevelse, og derfor er sjældent ordineret. Derfor kemoterapi stadig den første linje i behandling [2].
Den mest almindeligt administreres kemoterapeutiske regimen for SCLC er cisplatin og etoposid (P /E), som det har været i mere end tre årtier [2]. Dette regime opnår betydelig første reaktion hos de fleste patienter, der ofte reducere tumorer til ikke målbart. Desværre, tumorer næsten altid gentage sig kort efter ophør af behandling. Tilbagevendende tumorer er generelt mere aggressive og modstandsdygtige over for efterfølgende forsøg på at bremse tumorvækst med P /E og andre godkendte kemoterapeutiske regimener, såsom Topotecan [3-5]. I endnu mindre heldige patienter, første linje P /E behandling giver et delvist svar, fremskynde behovet for anden linje terapi, når tolereres. Selvom de nuværende kemoterapeutiske regimer forlænge overlevelsen for SCLC patienter (versus ingen behandling), er de fordele, begrænset, og 5-års overlevelsen effekt er trivielt. En forklaring på ubetydelige fremskridt i forskning og udvikling af nye lægemidler, der påvirker SCLC patient overlevelse er manglen på passende tumor modeller med at studere sygdommen. Korrekt modeller bør gøre det muligt prækliniske evaluering af testpræparater terapier, morfologisk ligne patientens tumorer og svare på samme måde som almindelige kemoterapeutiske regimer
in vivo
.
Patient-afledte xenograft (PDX) modeller, der er genereret fra frisk reseceret tumorvæv implanteret, vokset, og udelukkende passeres i svært immunkompromitterede mus, i stigende grad genereres og anvendes til at studere menneskelig tumor biologi [6-8]. Disse modeller beholde væsentlige ligheder til patienten tumorer, hvorfra de blev genereret. PDX tumormodeller genereret fra forskellige andre tumortyper generelt bevarer deres følsomhed profil til standard for pleje kemoterapi reaktioner observeret klinisk. Ud over at lette væksten af humane tumorer for
ex vivo
undersøgelse, PDX tumorer tilbyder også fysiologisk relevante modeller med at studere tumor biologi og evaluere præklinisk effekt af terapeutiske midler
in vivo
. PDX tumor-modeller kan også være kryopræserveret og grundigt undersøgt over tid uden omfattende passage, forhindrer de negative resultater af langvarig
in vitro
kultur, såsom genomiske forandringer, der plager begge cellelinier og deres resulterende konventionelle cellelinje xenografter [ ,,,0],9, 10].
Fordi SCLC sjældent kirurgisk fjernet, har forskningen i denne indikation ikke nydt godt af tilgængeligheden af PDX tumormodeller genereret fra resektioner, selvom nogle SCLC PDX modeller findes [10-13]. Adgang til primær SCLC tumor materiale er overvejende begrænset til diagnostiske fine nåle forhåbninger, der er almindeligt anset for lille til at lette engraftment. Leong et al. har påvist, at disse fine nål forhåbninger kan generere PDX tumorer morfologisk og genetisk ligner deres matchede primære tumorer [11]. Disse fine nåle forhåbninger ofte indsamles på klinikker og hospitaler uden onsite adgang til immunkompromitterede dyr eller infrastruktur til at generere nye PDX linjer. Her viser vi, at enkelte, primære SCLC fine nål aspiration prøver, taget efter indsamling af diagnostiske prøver og sendt natten til en samarbejder forskningsanlæg, er i stand til effektivt at etablere PDX tumorer morfologisk ligner den primære tumor, de hidrører. Endvidere viser vi, at
in vivo
kemo-responsivitet af disse PDX tumorer til behandling med kombineret P /E er generelt konserveret fra de primære tumorer til deres tilsvarende PDX tumorer hos mus. Dette arbejde viser, at forskere og klinikere, der arbejder i fællesskab selv over store afstande, kan hurtigt og effektivt etablere store samlinger af PDX tumor linjer fra rigeligt tilgængelige fine nål aspirater af SCLC. Bevaret histomorphology og lydhørhed over for standard for pleje kemoterapeutiske regimer gør disse fremragende modeller med til at bedre studere SCLC tumor biologi, og gøre det lettere at forskning og udvikling af lægemidler, der forbedrer patientens overlevelse.
Materialer og metoder
Patienter
undersøgelsen blev godkendt af Carilion Clinic Board Institutional Review. Alle 12 patienter med småcellet lungekræft gav skriftligt informeret samtykke før du deltager i undersøgelsen. Der blev taget prøver af endobronchial ultralyd-vejledt transbronkial nål aspiration (eBUS-TBNA), enten fra en central primær tumor eller fra mistænkt lymfeknudeinvolvering. Iscenesættelse Klassificeringen stemmer overens med både den Veterans Administration Lung Study Group og International Association for Studiet af Lung Cancer mellemstationer systemer [14, 15]. Performance status blev bestemt på tidspunktet for første diagnose [16] .Patients blev tilbudt standard for pleje behandling og måling af resultaterne blev overvåget.
eBUS-TBNA
Alle procedurer blev udført under dyb sedation hjælp en fleksibel ultralyd bronkoskop (CP-eBUS XBF-UC260F, Olympus, Tokyo, Japan) [17] og en 21G Vizashot nål. Mindst 6 transbronkial nål biopsiprøver blev taget ved hver mistænkt tumor eller nodal station. De første prøver blev behandlet i en standard institutionel mode, med forberedelse af objektglas til hurtig on-site cytologisk fortolkning, samt opsamling af materiale til at bygge en celle-blok til tidsforskudt patologisk evaluering. Den sidste opsamlede prøve blev udvist i iskold HypoThermasol-FRS (Sigma, St. Louis, MO) i et 1,5 ml mikrocentrifugerør indeholdende et volumen på mindst 10 gange større end volumenet af vævet, og sendes natten over til Stemcentrx, Inc. til implantation inden for 30 timer efter biopsi.
Klinisk behandlingsregime af SCLC donor patienter efter biopsi
Otte af tolv patienter fra hvem tumor prøver blev biopsi modtaget intravenøs 60-80 mg /m
2 Cisplatin på dag 1 plus 80-120 mg /m
2 etoposid på dag 1-3 hver 21-28 dage med en forventning om mindst fire cyklusser af behandlingen. Begge regimer krævede hydrering og administration af antiemetiske lægemidler. Hvis leukocyttallet faldt til under 2.000 pr mm
3 eller neutrofiltal faldt til under 1000 pr mm
3 blev rekombinant human granulocyt koloni-stimulerende faktor administreret indtil leukocyt- og /eller neutrofiltal blev genoprettet. Dosis justeringer blev foretaget på grundlag af identifikation af kemoterapi-associeret orgel toksiciteter. Tre patienter valgt ud af behandlingen. En patient var tabt for opfølgning og dermed deres behandlingsforløb er ukendt.
Følgende kriterier blev anvendt til at vurdere patientens reaktioner på standard for pleje behandling med cisplatin og etoposid (P /E). Radiologisk billeddannelse, enten Computed Chest eller positronemissionstomografi, blev anvendt til at bestemme respons på standard for pleje terapi. Reaktion evalueringskriterier i solide kræftsvulster (RECIST) blev anvendt til lønklasse tumor respons som følger: Complete Response (CR): forsvinding af alle target læsioner. Partielt respons (PR): Mindst et fald på 30% i summen af den længste diameter (LD) af target-læsioner, som reference baseline sum LD. Stabil sygdom (SD): Hverken tilstrækkelig krympning at kvalificere sig til PR eller tilstrækkelig forøgelse at kvalificere sig til Progressiv sygdom (PD), idet som reference den mindste sum LD siden behandlingen startede. PD: Mindst en stigning på 20% i summen af LD for target-læsioner, som reference den mindste sum LD registreret siden behandlingen startede eller udseendet af en eller flere nye læsioner [18]. Samlet overlevelse (OS) blev defineret som intervallet mellem første diagnose og patient død målt i uger.
PDX generation
Denne undersøgelse blev godkendt af Stemcentrx Institutional Animal Care og brug Udvalg (Protokoller SCAR -3-2008 og SCAR-5-2008). Mus blev udført i overensstemmelse med American Association for Laboratory Animal Science. Alle operation blev udført under Isofluran anæstesi, og blev gjort alt for at nedbringe dyrs lidelser. Mus blev aflivet ved hjælp af komprimeret CO
2 gas, i henhold til de seneste AVMA retningslinjer for eutanasi. Ved modtagelse af Stemcentrx blev hver SCLC tumor biopsi pelleteret ved let centrifugering (50 rcf i 5 minutter), resuspenderes i 100-150μL Medium-199 (Mediatech, Inc., Manassas, VA) og blandet med et tilsvarende volumen af Matrigel (BD Biosciences, Milpitas, CA). Derefter 100 pi af opløsningen blev subkutant injiceret under de nedre bryst-fedtpuder 8-10 uger gamle NOD /SCID recipientmus. Mus sundhed, vægt og tumorvolumen (r) blev vurderet i det mindste ugentlig. Når tumorvolumener målt mellem 800-1,500 mm
3, modtagere blev humant aflivet og tumorer blev reseceret.
Formering og analyse af PDX tumorer
Frisk operativt fjernede tumorer blev dissocieret til en enkelt celle suspension som beskrevet tidligere [19, 20]. Ved hver passage af tumor formering blev human epiteloprindelse bekræftet ved positiv farvning ved flowcytometri under anvendelse af anti-human EpCAM (klon 9C4), og negativ farvning med anti-humant CD45 (klon HI30), anti-muse CD45 (klon 30-F11 ), og anti-muse H-2K
d (Klon SF1.1) antistoffer (alle fra BioLegend, San Diego, CA). Alle flowcytometri antistoffer blev anvendt i en slutkoncentration på 10 ug /ml. At udbrede PDX tumorer blev dissocierede celler suspenderet 1: 1 efter volumen i Matrigel i en koncentration på 50.000 celler per 100 pi slutvolumen pr injektionssted. Cellerne blev bilateralt implanteret under de lavere yverfedt puder ved hjælp af en 27G nål og tumorvækst blev overvåget ugentligt.
Tid til progression (TTP) blev defineret som intervallet mellem behandlingsreaktioner og identifikation af progressiv sygdom ved RECIST målt i uger. Til måling patient-afledt xenograft tumor responser på standard for pleje behandling med cisplatin og etoposid, blev følgende kriterier anvendes: fordoblingstid blev defineret som den gennemsnitlige tidsperiode, hvori tumorvolumen fordoblet (dage); Satsen for tumor volumenvækst blev overvåget, beregnes ved hjælp af formlen d
dbl = (d
id
f) /log
2 (v
iv
f) og i gennemsnit for alle tumorer mens i området 150 mm
3-1200mm
3; Procent tumorvæksthæmning (% TGI) blev beregnet som den gennemsnitlige mængde af kemo-behandlede tumorer divideret med den gennemsnitlige mængde af bærerbehandlede tumorer 21 dage efter første behandling.
Primære SCLC biopsier og PDX tumorer var formalin fast og paraffinindlejrede (FFPE), og plane sektioner af vævsblokke blev skåret og anbragt på objektglas. For IHC blev xylen de-paraffinized vævssnit forbehandlet med antigen Retrieval Solution (Dako, Carpinteria, CA), blokeret med 10% donkey serum i 3% BSA i PBS-buffer, og derefter inkuberet med primært antistof. Primære antistoffer var som følger: synaptophysin (1: 200; klon SP11, Spring Bioscience, Pleasanton, CA), Chromogranin-A (0,2 ug /mL; Klon SP12, Spring Bioscience, Pleasanton, CA), og CD56 (0,2 ug /ml; Klon EP2567Y; Origene, Rockville, MD), Keratin 5 (1,4 ug /mL; Klon SP178, Spring Bioscience, Pleasanton, CA), Keratin 6 (0,15 ug /ml; Klon SP87, Spring Bioscience, Pleasanton, CA), keratin 7 (0,7 ug /mL; Klon SP52, Spring Bioscience, Pleasanton, CA), keratin 14 (1 ug /ml; Klon LL002, Abcam, Cambridge, MA), keratin 20 (1:50; Klon SPM140, Abcam, Cambridge , MA), TTF1 (Clone 8G7G3 /1, Biocare Medical, Concord, CA), TP63 (0,125 mg /ml; Clone 4A4, Biocare Medical, Concord, CA), Napsin A (Klon TMU-AD02, Biocare Medical, Concord, CA). Snit blev inkuberet i biotin-konjugeret, artsspecifikke sekundære antistoffer (Immunoresearch, West Grove, PA), efterfulgt af inkubation i streptavidin-HRP (ABC Elite Kit, Vector Labs, Burlingame, CA). Kromogent detektion blev udviklet med 3, 3′-diaminobenzadin (Thermo Scientific, Rockford, IL) og væv blev modfarvet med hæmatoxylin og filmede med et lysmikroskop med 40X forstørrelse.
Til IHC farvning, følgende negative kontrol antistoffer og positive kontrolprøver væv blev anvendt. CHGA: Mouse IgG1 (BioLegend, Inc., San Diego, CA) og normale humane pancreas. Synaptophysin: Kanin-IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normale humane pancreas. CD56: Kanin-IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normale humane pancreas. Keratin 5: Kanin-IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normal human prostata. Keratin 6: Kanin-IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normal human prostata. Keratin 7: Kanin-IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normal human prostata. Keratin 14: Mouse IgG1 (BioLegend, Inc., San Diego, CA) og normal human hud. Keratin 20: Mouse IgG2a (BioLegend, Inc., San Diego, CA) og normal human colon. Napsin A: kanin IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) og normal human lunge. P63: Mouse IgG2a (BioLegend, Inc., San Diego, CA) og normal human prostata. TTF-1: Mouse IgG1 (BioLegend, Inc., San Diego, CA) og normal menneskelig lunge
Resultater
Sikkerhed for minimalt invasiv prøvetagning teknik
Fra hver af. de 12 samtykkende SCLC patienter, der deltog i denne undersøgelse blev en enkelt ekstra nål biopsi prøve indsamlet af eBus-TBNA med henblik på at forsøge at indlede xenotransplantattumorer. Disse celle aspiratprøver blev udtaget fra enten primære lungetumorer eller involverede knuder fra en række patienter i gennemsnit 62 år (tabel 1). Ti af disse tolv tumorer blev diagnosticeret som metastatisk (
jeg
.
e
. Omfattende sygdom), og af dem blev to prøver indsamlet fra involverede lymfeknuder. Ingen patienter oplevede bivirkninger kan henføres til yderligere biopsi prøvetagningen.
PDX tumor generation og karakterisering
Efter indsamling, prøver blev afsendt natten over på is fra Carilion Clinic Hospital i Roanoke, Virginia at Stemcentrx i San Francisco, Californien. Inden for 30 timer efter biopsi blev celler fra aspiration prøver subkutant implanteret i immunkompromitterede NOD /SCID recipientmus og overvåges for tumorvækst i op til 32 uger. Mens en enkelt celle aspirat prøve kan ikke fuldt ud repræsentere den cellulære mangfoldighed en patients tumor, ville mere grundig og repræsentativ prøveudtagning af den samme patient tumor har unødigt forøget risiko for patienterne. Ved 26 uger efter implantation, 8 af 12 (67%) patientprøver produceret bekræftet SCLC tumorer, med den gennemsnitlige tid til at nå 150 mm
3 spænder fra 81-151 dage efter transplantationen. For at lette både umiddelbare og prospektive undersøgelser, hvilket resulterer “passage 1” (P1) tumorer blev fikseret i formalin, eller dissocieret til enkelte cellesuspensioner til øjeblikkelig udbredelse i nye modtagende mus, yderligere fænotypiske og /eller genetisk karakterisering, eller nedfrysning. Blandt de 4 SCLC patientprøver, der ikke resulterer i brugbare SCLC PDX tumor linjer, tre undlod at indlede tumorer (LU108, LU112, LU125) og én (LU122) bestod af en udvækst af human B-celle lymfom. At sikre trofast formering af forurenede tumorer, blev en SNP fingerprinting assay udført på primære tumorceller og PDX celler ved hver passage. Disse resultater bekræfter, at hver PDX tumor er unik og er afledt af dets beslægtede primære tumor.
SCLC-tumorer har en distinkt morfologi karakteriseret ved fladhed af celler, nuklear støbning, og en sparsom cytoplasma [21]. I de fleste tilfælde kan disse træk anvendes til klart at skelne SCLC fra de forskellige former for ikke-småcellet lungekræft (NSCLC). SCLC-tumorer har variabel morfologi, der spænder fra høj cellularitet til knappe tumorceller midt stroma og nekrotisk væv. Ikke desto mindre kan kendetegnende havre cellemorfologi, nuklear støbning, og sparsomme cytoplasma let bekræftes i PDX tumorprøver (Fig 1A og 1B, S1 og S2 Fig). Cytologiske udstrygninger af celle aspirater fra patientens tumorer og FFPE sektioner fra matchede PDX tumorer blev farvet med Kwik-Diff pletten. Morfologiske ligheder blev observeret mellem primære og xenotransplantattumorer (S5 Fig). Mens cytologiske udstrygninger fra celle aspirater dårligt bevare tumorvæv organisation, cellulære morfologier er ens.
FFPE sektioner blev fremstillet fra PDX tumorer (LU086p1 er repræsenteret). (A) Vævssnit blev farvet ved IHC til diagnostiske SCLC-markører Chromagranin A (CHGA), synaptophysin (SYP), eller CD56. Scale søjler repræsenterer 10um. (B) Vævssnit blev farvet ved IHC til diagnostiske ikke-SCLC markører Keratin 5 (KRT5), Keratin 6 (KRT6A), Keratin 7 (KRT7), Keratin 14 (KRT14), Keratin 20 (KRT20), Napsin A (NAPSA) , TP63 eller TTF1. Scale søjler repræsenterer 10um. (C) PDX tumorceller blev dissocieret til en enkelt-cellesuspensioner og analyseret ved flowcytometri til ekspression af EpCAM (CD326) og NCAM1 (CD56). Histogrammer viser ekspressionsniveauerne er vist (mørk sort linje), mens baggrunden signal blev bestemt ved hjælp af en matchet isotypekontrolantistof (fyldt grå).
For at bekræfte deres SCLC identiteter, tumorer blev vurderet for deres udtryk flere kendetegnende proteiner almindeligvis anvendes til at bekræfte diagnosen. Først blev FFPE vævssnit fra PDX tumorer farvet ved IHC for de positive SCLC diagnostiske antigener Chromogranin-A, synaptophysin, og CD56 (Fig 1A og S1 Fig). Endvidere PDX vævssnit generelt ikke udtrykke antigener karakteristisk for ikke-småcellet lungekræft, herunder Keratin 5, Keratin 6, Keratin 7, Keratin 14, Keratin 20, TTF1, TP63, og Napsin A (Fig 1B og S2 Fig). Positiv farvning for Keratin 5, Keratin 6, Keratin 14 eller TP63 kan indikere pladecellecarcinomer i lungen. Positiv farvning for Keratin 7, TTF1 eller Napsin A kan indikere lunge adenocarcinom. Keratin 20 udtrykkes typisk i cancere i mavetarmkanalen og dens negative ekspression kan anvendes til at udelukke kræft i nonpulmonary oprindelse. Kun 3 af 8 SCLC PDX i denne undersøgelse var positive for TTF-1-ekspression. Mens TTF-1-ekspression i SCLC er almindelig, er det primært anvendes til at identificere pulmonal adenocarcinom og positiv farvning er sandsynligvis påvirket af antistof klon. Endelig blev tumorer dissocieret til encellede suspensioner og karakteriseret ved flowcytometri til at kontrollere deres menneskelige epitel oprindelse (
jeg
.
e
. Menneskelig EpCAM +) og bekræft CD56-ekspression (Fig 1C og S3 fig). Repræsentant IHC og flowcytometri billederne er vist for LU086 i figur 1, og en oversigt over IHC farvning for alle testede PDX linjer er vist i tabel 2.
På PDX tumorer, vi udførte også målrettet resekventering af onkogener (S1 tabel). TP53 er det mest almindeligt muterede gen i SCLC, der påvirker ca. 3 af 4 tumorer. Vi fandt TP53 mutationer i 6 af 8 tumorer. RB1 er muteret i ca. halvdelen af SCLC og vi fandt RB1 mutationer i 3 af vores 8 testede SCLC PDX tumorer. Disse mutationsfrekvenser er i overensstemmelse med de indberettede frekvenser for SCLC.
Sammenfattende SCLC PDX tumorer bevarer slående lighed med deres primære SCLC tumorer trods have igangsat fra meget lidt materiale. Endvidere den effektivitet, hvormed PDX tumorer kan etableres under anvendelse nålebiopsi materiale tyder på, at tumoren viderefører celle (TPC;..
i
e
cancer stamceller) frekvens er relativ høj, hvilket kunne forventes givet aggressivitet og refraktær natur SCLC.
PDX tumor respons på P /E afspejler klinisk respons
for at bestemme om SCLC PDX tumorer, etableret som beskrevet heri, bevarer P /E respons egenskaber observeret hos patienter fra hvem PDX tumorer blev genereret, blev PDX tumorer udsat for kombineret P /E regimer på nær maksimalt tolererede doser, svare til lignende doser til behandling anvendes til patienter (
jeg
.
e
5 mg /kg Cisplatin 24 mg /kg etoposid, hvilket svarer til omtrent 20 mg /m
2 Cisplatin og 94 mg /m
2 etoposid). Efter subkutan implantation af SCLC PDX tumorceller og randomisering i kohorter af 5-8 mus pr gruppe, når tumorer nåede 150 mm
3-200 mm
3, mus blev doseret på dagen for randomisering med 5 mg /kg cisplatin og 8 mg /kg Etoposid, og igen på følgende to dage med yderligere 8 mg /kg etoposid hver dag. Kohorter modtager bæreren blev administreret 0,9% NaCl i de samme mængder, der benyttes til at dosere mus med P /E. De fleste SCLC PDX tumorer svarede på denne enkelt forløb P /E kemoterapi, hvilket resulterer i en gennemsnitlig tumorvækstinhibering af 79 ± 17% versus vehikel-behandlede mus (tabel 3). Trods en robust respons, som de fleste PDX tumorer, som observeres hos mennesker, der var uforanderligt tumortilbagevenden, generelt observeret inden for 3 uger randomisering (17 ± 10 dage n = 8), med alle SCLC PDX tumorer tilbagevendende inden for 5 uger. For eksempel LU073 PDX tumorer reagerede godt på P /E, viser en 82% hæmning af tumorvækst og 35 dage (
jeg
.
e
. 5 uger) tid til progression (Fig 2A og tabel 3), mens patienten fra hvem LU073 PDX tumorer blev etableret udstillet en 31 uger tid til progression i klinikken efter en fuld behandlingsforløb (tabel 1). Derimod LU086 PDX tumor model initieret fra en omfattende fase patient, der ikke reagerer godt på den kliniske regime af P /E (klinisk TTP = 7 uger) var også minimalt lydhøre over for behandling med P /E (41% TGI TTP = 0, fig 2B). Sammenfattende det store flertal af etablerede SCLC PDX tumormodeller demonstrerede tumorresponser som korrelerede med TTP metrics observeret klinisk (figur 2C, n = 5; R-square = 0,77;
P
-værdi = 0,050). Den enlige outlier til denne tendens var PDX LU064 (figur 2C, grå åben cirkel). Den generelle overensstemmelse mellem primær patient tumor og PDX tumor respons på P /E
in vivo
understøtter den konklusion, at SCLC PDX tumorer initieret fra tumorbiopsier afspejler patientens tumor biologi og tjene som udmærkede modeller med til at bedre studiemiljø og forstå denne aggressive malignitet.
Efter at have nået en gennemsnitlig tumor volumen på 150-200 mm
3, mus med a) LU073p2 eller B) LU086p3 PDX tumorer blev randomiseret, indgivet enten køretøj (lukkede trekanter) eller P /E (åbne cirkler; 5 mg /kg cisplatin på dag 1 og 8 mg /kg etoposid på dag 1, 2 men disse linjer har forskellige uigenkaldelige uoverensstemmelser i forhold til tumorer, som de eksisterer i patienter [9, 25-27]. Overraskende mange af de mest almindeligt anvendte cellelinjer med til at studere SCLC tumor biologi blev genereret mere end 30 år siden [28], og har betydelige genomiske abnormiteter sandsynligvis forbundet med årtiers
in vitro
kultur i ikke- fysiologiske betingelser [29]. Daniel
et al
. for nylig vist, at selv korte perioder med
in vitro
kultur irreversibelt ændrer genekspression i SCLC tumorceller [9], således cellelinjer udstrakt udvidet
in vitro
er usandsynligt, at passende afspejle forældrenes tumor.
Leave a Reply
Du skal være logget ind for at skrive en kommentar.