PLoS ONE: Høj Progesteron Receptor Expression i Prostatacancer er associeret med klinisk svigt

Abstrakt

Baggrund

Prostatakræft er en meget heterogen sygdom og en af ​​de førende årsager til dødelighed i de udviklede lande. Specifikke prognostiske og prædiktive markører for patienter med prostatacancer mangler stadig. En kausal sammenhæng mellem androgener og udviklingen af ​​prostatakræft anses generelt biologisk plausibelt, men androgener er ikke den eneste effektor i kompleksiteten af ​​prostata carcinogenese. Formålet med denne undersøgelse var at evaluere den prognostiske betydning af progesteronreceptor i tumorvæv af T1-3N0 prostatacancerpatienter undergår prostatektomi.

Metoder

Tissue microarrays fra 535 patienter med prostatacancer blev konstrueret . Identiske kerner af tumorceller og tumor- stromale væv fra hver operativt fjernede prøve blev ekstraheret. Immunhistokemi blev anvendt til at evaluere in situ ekspression af progesteronreceptor.

Resultater Salg

I univariate analyser, high tumor celledensitet (p = 0,006) og høje tumor stromal celledensitet niveau (p = 0,045) af progesteronreceptor blev begge signifikant associeret med tumorudvikling og klinisk svigt. I multivariat analyse, progesteron receptor-ekspression i tumorceller var en uafhængig negativ prognostisk faktor for klinisk svigt (HR: 2,5, 95% CI: 1,2-5,2, p = 0,012).

Konklusion

høj progesteronreceptor densitet i tumorceller i prostata cancer tumor er en uafhængig negativ prognostisk faktor for klinisk svigt

Henvisning:. Grindstad T, Andersen S, Al-Saad S, Donnem T, Kiselev Y, Nordahl Melbø- Jørgensen C, et al. (2015) High Progesteron Receptor Expression i prostatakræft er associeret med klinisk svigt. PLoS ONE 10 (2): e0116691. doi: 10,1371 /journal.pone.0116691

Academic Redaktør: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ØSTRIG

Modtaget: Juni 26, 2014, Accepteret: 8. december 2014 Publiceret: 27 februar 2015

Copyright: © 2015 Grindstad et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af det norske Health Department (https://www.regjeringen.no/en/dep/hod.html?id=421 ), den norske Cancer Association (https://kreftforeningen.no/en/main-priorities/), UIT – Arktis University Norge (https://en.uit.no/startsida), Nordnorge Regional Health Authority ( Helse Nord RHF) (https://www.helse-nord.no/?lang=en_US), finansiering nummer 30125/30012. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Prostatakræft (PCA) er en af ​​de førende dødsårsager blandt mænd i den vestlige verden [1]. Størstedelen af ​​PCa forekommer som en indolent form, der er usandsynligt at invadere ud over det lokale væv miljø. En undergruppe af PSA, men viser aggressivitet og metastatiske egenskaber. Sådanne cancere resultere i en hurtig sygdomsudvikling og reduceret sygdomsspecifikke overlevelse [2]. Derfor det kliniske forløb af PCa er meget individuelle og vanskelige at forudsige fra starten.

I mangel af specifikke molekylære markører som diagnostiske og prognostiske værktøjer, påvisning af PCa og dens behandling strategi stadig hovedsageligt baseret på prostataspecifikt antigen (PSA) værdi, Gleason score på tumorbiopsier og primær tumor (pT) -staging [3]. PSA kan ikke adskille mellem de forskellige PCA progression mønstre. Derfor er mange af de påviste PCA tilfælde repræsenterer klinisk indolente tumorer, som ubehandlet vil forblive stabil i år [2]. Derfor PSA screening udgør en risiko for overdiagnostik og overbehandling, som er forbundet med en negativ indvirkning på livskvaliteten og omfattende finansielle omkostninger [4,5]. Identificeringen af ​​nye, forbedrede prognostiske og diagnostiske biomarkører for PCa er derfor i høj grad brug for.

Sex steroidhormoner, såsom androgener, østrogener og progesteron, er potente effektorer involveret i proliferation, differentiering samt cellulære udvikling, og kendte bidragsydere til udviklingen af ​​forskellige kræftformer [6]. De metaboliske funktioner i prostata er under tilsyn i sådanne sex steroidhormoner [7]. En kausal sammenhæng mellem androgener og udvikling af PCa er generelt betragtet biologisk plausibel [8]. Dette indikerer en afgørende rolle for androgen-receptoren i prostata carcinogenese og endokrin behandling fiasko. Men der er stadig flere tegn på, at androgenreceptoren er ikke den eneste effektive endokrine receptor i denne komplekse proces. Forskning tyder på involvering af både glucocorticoid-, østrogen- og progesteron-receptorer i denne proces er blevet offentliggjort [9-13].

Progesteron er et 21-carbon hormon syntetiseret fra steroid precursorer i forskellige dele af kroppen , herunder testiklerne, binyre, placenta og gliaceller i hjernen, ud over æggestokkene [14]. Progesteronreceptoren (PGR) eksisterer i to isoformer, PGR-A og PGR-B, og begge er transkriberet fra det samme gen. Det hører til den samme receptor familie som de androgen- og østrogen-receptorer, som er udtrykt i både stromale og tumorceller i PSA væv [11,13,15-18]. I øjeblikket er der en generel aftale med PGR tilstedeværelse i stromale celler PCa [10,17,19-23]. Resultater med hensyn PGR tilstedeværelse i tumorceller, er imidlertid modstridende [9,10,17,19-25]. Således betydningen af ​​PGR i den humane prostata og i prostata carcinogenese er aldrig blevet forklaret tilstrækkeligt. Som en konsekvens forsøgte vi at evaluere ekspressionen af ​​PGR i begge tumorceller afledt epiteler (TE) og stromale tumorceller (TS) i maligne prostatektomi prøver og fundet tæthedsniveauet PGR i både TE og TS at være forbundet med PCa progression.

Materialer og metoder

patienter, klinisk-og histopatologiske data

671 patienter, som gennemgik radikale prostatektomi som initial behandling for adenocarcinom 1995-2005 blev retrospektivt identificeret fra departementerne Patologi på University Hospital i Nordnorge (n = 267), den Nordland Hospital (n = 63) og St. Olavs Hospital (n = 341). Af disse blev i alt 136 patienter ekskluderet på grund af (i) strålebehandling af bækkenpartiet før kirurgi (n = 1), (ii) andre maligniteter inden for 5 år forud for PCa diagnosen (n = 4), ( iii) utilstrækkelige paraffinindlejrede væv blokke (n = 130), og (iiii) mangel af kliniske opfølgende data (n = 1). Ingen af ​​patienterne havde modtaget hormonterapi før eller på tidspunktet for den prostatektomi. Således 535 patienter med komplette opfølgende data blev inkluderet i denne undersøgelse. Median opfølgning tid var 89 (interval 6-188) måneder ved den sidste patient opdatering i november 2012. Komplet demografiske og kliniske data blev indhentet fra medicinske journaler. Alt væv analyseret og sat til undersøgelsen blev behandlet på en sammenlignelig måde blev tumorer klassificeres efter det modificerede Gleason klassificeringssystem [26,27], og iscenesat ifølge World Health Organization retningslinjer [28]. Alle primære kræftformer blev histologisk revideret af to patologer (ER og LTB), og alle demografiske, kliniske og histopatologiske data (tabel 1) blev registreret i en SPSS datafil, hvor der blev de-identificerede patienter. Det regionale udvalg for medicin og sundhed Etik (2009/1393), i databeskyttelsesdirektivet officielle for Forskning (NSD), og National Datainspektionen godkendt denne undersøgelse. Alle patienter blev anonymiseret med hvert forsøg nummer. Disse tal blev oprindeligt knyttet til identitet for forudgående kun ét formål; at indsamle kliniske oplysninger. Den norske Social Science Data Service og universitetshospitalet databeskyttelsesafdeling accepteret denne løsning (2009/1393). Skriftligt samtykke fra patienterne blev betragtet, men da dette var en retrospektiv undersøgelse, hvor det meste af materialet var mere end 10 år, og de fleste af de patienter, afdøde, blev det anset for ikke nødvendigt. Alle data blev analyseret anonymt.

Microarray byggeri

Tissue Microarray (TMA) konstruktion blev valgt til high-throughput molekylær patologi analyser. For hvert væv blok, en patolog (ER) identificeret og mærket to repræsentative områder af epitel tumorvæv og to for tumor stromale væv på de tilsvarende hæmatoxylin og eosin slides. Et område med normale epitelceller, og en med normal stromavæv blev også nøje afmærket. Fra hver af disse områder blev kerner udtaget fra hver donor blok for at konstruere TMA blokke. Prostata kerner fra 20 patienter uden historie malignitet blev anvendt som kontroller.

TMA’er blev samlet ved hjælp af et væv-gruppering instrument (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, USA). Vi anvendte en nål diameter 0,6 mm til høst kerner fra de afmærkede vævsområder fra hver paraffinindlejrede vævsblokke. De centrale prøver blev indsat i en tom recipient paraffin blokeret et præcist arraymønster. For at inkludere alle kerneprøver blev tolv væv array-blokke bygget. Multiple 4 um snit blev skåret med en Micron mikrotom (HM355S), anbringes på objektglas, og forseglet med paraffin. Den detaljerede metode er blevet rapporteret tidligere [29].

immunhistokemisk (IHC)

Til immunhistokemisk farvning, Ventana Benchmark XT automatisk farvning systemindstillinger (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) og Ventana reagenser blev anvendt. TMA objektglas blev deparaffinised med xylen og rehydreret i faldende koncentrationer af ethanol. Endogen peroxidase blev blokeret ved hjælp af Ventana endogen peroxidase blokerer kit efter en skylning med destilleret vand. For antigen hentning, dias var opvarmet med celle conditioning opløsning (CC1, Ventana), standard, ifølge producentens instruktioner. Følgende antistof fra Ventana Medical (Tucson, Arizona, USA) blev anvendt i denne undersøgelse: CONFIRM anti-progesteronreceptor (klon 1E2, katalog # 790-4296) kanin monoklonalt primært antistof, rettet mod både A- og B-isoformer af humant progesteron receptor. Antistoffet blev fortyndet på forhånd af producenten. Den anvendte antistof produceres til rutinemæssig diagnostisk IHC og har modtaget FDA godkendelse (510K) for IVD (

in vitro

diagnostik) brug. Den PGR antistof øjeblikket anvendes i rutinemæssig praksis i vurderingen af ​​PGR status i brystkræft. For at validere specificitet af det primære antistof mod PGR blev lysater af HEK 293-celler med enten transient overudtrykt PGR eller en tom vektor, der anvendes. Yderligere oplysninger om antistof validering kan findes i de understøttende informations filer (S1 Tekst, S2 Tekst, S1 Fig.). UltraView Universal DAB blev brugt som afsløring kit. Endelig blev TMA objektglas modfarvet med hæmatoxylin at visualisere cellekerner.

Scoring af IHC

ARIOL afbildningssystem (Applied Imaging Corp., San Jose, CA, USA) blev anvendt til at scanne og digitalisere de IHC farvede TMA lysbilleder. Glassene blev lagt i SL 50 automatiserede slide loader og scannet ved en lav opløsning (1.25x) og høj opløsning (20x) ved hjælp af et Olympus BX61 mikroskop med en automatiseret platform (Prior Scientific, Cambridge, UK). Billeder af kernerne blev uploadet i ARIOL Software. Alle prøver blev de-identificeret og afsluttet manuelt ved to patologer (ER og SAS) uafhængigt af hinanden og begge blev blindet for nogen patologiske eller kliniske oplysninger. I tilfælde af uenighed, blev objektglassene fornyet overvejelse og observatørerne nået til enighed. Repræsentative levedygtige sektioner væv blev scoret semi-kvantitativt og graden af ​​nukleare PRG udtryk ved IHC blev gradueret i henhold til både dominerende farvning intensitet og tæthed i både TE og TS. Både intensitet og tæthed fik en score mellem 0-3. Intensitet blev scoret som følger: 0 = negativ, 1 = svag, 2 = moderat, 3 = stærk. Density blev scoret efter procentdelen af ​​positive celler i det undersøgte rum ved hjælp af følgende system: 0 = 0%, 1 = ≤ 5%, 2 = 5-50%, 3 = 50%. For hvert tilfælde blev gennemsnitlige scores beregnet. De gennemsnitlige scoring værdierne blev derefter forbundet til patientens kliniske og histopatologiske information. De scoring værdier blev derefter dikotomiseret som høj og lav intensitet eller tæthed af farvede celler (fig. 1) ved hjælp af optimale cut off værdier. I både TE og TS, afskåret blev defineret som tætheden niveau × 4

th kvartil. En høj score blev defineret som tæthed niveau ≥ 0,75 i TE, og ≥ 1,75 i TS.

Immunhistokemi mikroskopiske billeder af væv micro-array, der repræsenterer forskellige udtryk for PGR farvning i PCA afsnit A-B. (A) High density af PGR i tumorceller (TE), herunder forstørrelse. (B) Low density af PGR i TE, herunder forstørrelse. Original forstørrelse x100 og x400.

Statistiske metoder

Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af den statistiske pakke IBM SPSS version 21 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). IHC scoring værdier fra hver patolog blev sammenlignet for inter-observatør pålidelighed ved anvendelse af en to-vejs tilfældig effekt model med absolut aftale definition. En Wilcoxon-test blev anvendt til at vurdere, om der var statistisk signifikante forskelle i PGR intensitet og tæthed mellem de forskellige rum i PCA prøver. Vi beskæftigede Spearman korrelationskoefficient at undersøge sammenhængen mellem PGR udtryk og clinopathological variabler. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til univariate overlevelse analyse, og log-rank test for at vurdere den statistiske signifikans mellem overlevelseskurverne for modellen. Univariate Kaplan Meier kurver blev konstrueret for følgende de endelige punkter: 1) Biokemiske svigt (BF), 2) Klinisk svigt (CF) og 3) PCa død (PCD). BF blev bestemt som en PSA gentagelse ≥ 0,4 ng /ml i mindst to forskellige blodprøver postoperativt [30]. CF blev defineret som verificeret lokal symptomatisk progression over helbredelse og /eller fund af metastaser til knogler, indre organer eller lymfeknuder ved CT, MR, knoglescanning eller ultralydsundersøgelse. PCD blev defineret som død forårsaget af progressiv og udbredes kastrationsresistent PCa ukontrollabel ved terapi. Alle væsentlige variabler fra univariate analyse blev indgået i den multivariate analyse ved hjælp af en baglæns trinvis Cox regressionsmodel med en sandsynlighed for trinvis fjernelse indrejse ved 0,05 og 0,1 hhv. Vi overvejede en p-værdi 0.05 som statistisk signifikant for alle analyser.

Resultater

Patient karakteristika

radikal prostatektomi var retropubic i 435 tilfælde og perineale i 100 sager. Patienternes alder ved kirurgi varierede fra 47 til 76 år med en gennemsnitsalder på 62 år. Yderligere oplysninger om kohorten er tidligere publiceret [31]. En oversigt over de demografiske, kliniske og histopatologiske karakteristika er vist i tabel 1. Kombineret Gleason score varierede fra 6 til 10 og tumor etape fra T2a til T3b. På det sidste opfølgning 170 (32%) oplevede BF, 36 (7%) oplevede CF og 15 (3%) døde på grund af PSA.

Progesteron udtryk og korrelation med klinisk-patologiske variabler

Der var en rigtig god scorings aftale mellem de to undersøger patologer. Den intra-class korrelationskoefficient (pålidelighed koefficient, r) for PGR markør var 0,78 (p 0,001). PGR blev udtrykt i kernen af ​​både normale celler og i TE og TS (fig. 1). High PGR densitet i TE (≥ 0,75) blev fundet i 109 (20%) af de 535 patienter, hvorimod, en høj PGR densitet (x 1,75) i TS blev fundet i 120 (23%) af patienterne. Der var ingen signifikant forskel i PGR tæthed niveau i kontrol epitel forhold til TE (p = 0,429), selv om den gennemsnitlige score tæthed var 0,37 i kontrol epitel og 0,52 i TE. Desuden har 61,9% af kontrollerne ikke udtrykke PGR, mens kun 28,3% af TE var uden PGR udtryk. Der var imidlertid en væsentlig højere PGR tæthed niveau i TS i forhold til at styre stroma (p 0,001). Endvidere blev en signifikant højere udtryk intensitet og tæthed niveau af GB findes i TS i forhold til TE (begge p 0,001).

Høje niveauer af PGR tæthed i TE blev korreleret med en positiv apikal margin (p = 0,025) og perineural infiltration (PNI) (p 0,01). Ingen korrelationer til andre clinopathological variabler blev identificeret.

univariat analyse

Foreninger mellem tætheden niveau af PGR og CFFS (klinisk svigt overlevelse) er præsenteret i tabel 2 og fig. 2. Følgende clinopathological variabler var alle væsentlige prognostiske faktorer for CF: pT-stadium (p 0,001) PN-fase (p 0,001), Gleason bedømmelse (p 0,001), tumorstørrelse (p = 0,019) , perineurale infiltration (p = 0,001), positiv kirurgisk margin (p = 0,038), ikke-apikale kirurgisk margin (p 0,001) og lymphovascular infiltration (p 0,001) (tabel 1)

Kaplan-Meier-kurver, der viser andelen af ​​prostata caner patienter (n = 535) med CFFS ifølge høj og lav densitet niveau af progesteron receptor (PGR) i forskellige celletyper AD. (A) Tumor stromaceller (TS), (B) tumorceller (TE), (C) TE og TS kombineret og (D) TE hos patienter med en høj Gleason score (≥ 7). En høj PGR densitetsniveau er signifikant associeret med en reduktion i CFFS. I både TE og TS, afskåret blev defineret som tætheden niveau × 4

th kvartil. En høj score blev defineret som tæthed niveau ≥ 0,75 i TE, og ≥ 1,75 i TS. Log-rank tests blev anvendt til at vurdere den statistiske signifikans mellem overlevelseskurverne for modellen. Median opfølgning tid var 89 (spændvidde 6-188) måneder. En p-værdi 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.

Forøgelse PGR tæthedsniveauer i både TE (p = 0,006) og TS (p = 0,045) var signifikant associeret med CF (fig. 2, panel A og B). Når sammenlægning PGR tæthed niveauer i TE og TS, havde patienter med høje (høje /høje) PGR density niveauer væsentligt reducerede CFFS (p = 0,019) sammenlignet med dem med niveauer lav densitet (lav /høj, høj /lav og lav /lav) (fig. 2, felt C). Ti år CFFS var 76,8% vs. 91,6% for patienter med høj (høj /høj) density niveauer vs. lav (lav /høj, høj /lav og lav /lav) (Tabel 2).

Høj PGR niveauer i TE viste en lignende tendens til øget BF, men dette var ikke statistisk signifikant (p = 0,144). For TS eller TS og TE kombineret, var der ingen foreninger med BF eller PCD.

En høj tæthed niveau af PGR i TE var signifikant associeret med CF i undergruppen af ​​patienter med Gleason score ≥ 7 (p = 0,002 , fig. 2, panel D) sammenlignet med den undergruppe af patienter med Gleason score 6 (p = 0,914). Ti år CFFS for patienter med høje PGR tæthed niveauer var 72,2% vs. 97,2% for patienter med Gleason score ≥ 7 vs. Gleason score 6.

Multivariat analyse

I den multivariate analyse ( tabel 3), høj ekspression af PGR i TE var en uafhængig prædiktor for CF (HR: 2.5, 95% CI: 1,2-5,2, p = 0,012) foruden Gleason bedømmelse (p = 0,001) og ikke-apikale kirurgisk margin ( p = 0,006). PGR udtryk i TS havde en tendens til, men nåede ikke statistisk signifikans (HR: 2,1, CI: 1,0-4,3, p = 0,060). Ingen uafhængige prognostiske faktorer blev fundet for BF og PCD.

Diskussion

Så vidt vi ved, er dette den første store undersøgelse undersøger den prognostiske rolle PGR i TE og TS i PSA. I univariat analyse blev en høj tæthed niveau af PGR i både TE og TS forbundet med CF. High density niveau af PGR i TE var en uafhængig prognostisk faktor for CF.

Et første skridt til at forstå PGR handling i PCa er at definere receptor udtryk i prostata væv. Tidligere publikationer om GB udtryk i PCa, især dem, der bruger IHC, har præsenteret modstridende resultater og kun få rapporter har behandlet PGR rolle i prostata carcinogenese. Vores store og mellemstore undersøgelse viser en bred fordeling af PGR i stromale og epiteliale celler af både godartede og ondartede prostatavæv. I øjeblikket synes der at være en generel aftale med PGR tilstedeværelse i stromale celler PCa [10,17,19-23]. I tråd med vores resultater, har flere også rapporteret en høj PGR udtryk i TE af PCa [9,10,23,25]. I modsætning hertil har andre vist en total mangel på PGR udtryk i TE [17,19,20,22]. Selv eksperimentelle undersøgelser med anvendelse af cellelinjer har rapporteret modstridende resultater [17,24,25,32]. En sådan uoverensstemmelse kan forklares med flere faktorer. Dette omfatter brug af forskellige antistoffer, vævsbehandling, antigen hentning metoder, antal vævsprøver og forskellige pointsystemer, og kan afspejle en manglende metodologisk standardisering. Det monoklonale antistof 1E2, der anvendes i vores undersøgelse er blevet optimeret til klinisk anvendelse og anvendes i rutinemæssig praksis i vurdering af PGR status i brystkræft. Dette er også tilfældet for NCL-PGR1A6 antistof anvendt i artiklerne, som Bonkhoff et al. [10] og Hiramatsu et al. [23], som bekræfter tilstedeværelsen af ​​PGR i TE. Flere af IHC undersøgelser modsiger den nuværende undersøgelse konklusion blev udført forud for udvikling af nye metoder stigende metodiske nøjagtighed [17,19,20]. Sådanne metoder omfatter anvendelse af nye, meget specifikke monoklonale antistoffer mod PGR, mikrobølge bestråling metode ved den tid effektiv vævsbehandling metode TMA [33], som er blevet rapporteret som et værdifuldt redskab til evaluering af patientens materiale og en god erstatning for hele § analyse [34].

Yu et al. nylig undersøgt placering og rolle både PGR isoformer i PCa og rapportere resultaterne modstridende til vores. Dette kan forklares ved deres undersøgelse af PGR som de fandt udelukkende udtrykkes i en delmængde af stromale celler i de 27 radikal prostatektomi prøver [22]. Dette er i modsætning til vores arbejde var ekspressionen af ​​PGR i både TE og TS blev klart detekteret. I vores kohorte havde 129 (28,3%) patienter ingen PGR ekspression i TE, i modsætning til kun 8 patienter (1,7%) med negativ PGR farvning i TS. Imidlertid blev dem med en høj tæthed niveau af PGR i TE signifikant associeret med CF. Forskellen i kohorte størrelse potentielt kunne forklare nogle af uoverensstemmelsen mellem resultaterne. Desuden begge de valgte antistof og væv forarbejdningsmetoder er forskellige.

I en anden undersøgelse ved anvendelse celleproliferationsassay, Yu et al. fundet PGR negativt regulere stromal celledeling

in vitro

[32]. I vores arbejde demonstrerede univariat analyse en høj PGR ekspression i TS at være forbundet med klinisk svigt i PCA patienter. Hidtil har vi endnu ikke har påvist den mekanisme bag denne forening.

Steroid hormoner regulerer cellens progression gennem cellecyklus ved binding til deres respektive receptorer. Disse receptorer er signaltransduktionsmolekyler og kan regulere spredningen på to forskellige måder, genomiske eller ikke-genomiske handlinger i komplekse signalering net [6]. Flere ikke-genomiske proliferative virkninger af progesteron er blevet foreslået i tumorceller af andre organer, herunder bryst- [35-37], astrocytoma [38] og osteosarkom [39] cellelinier. Men sådanne resultater modsagt af forslag til anti-proliferative virkninger af progesteron i endometriecancer [40]. Dette kunne tyde på, at de aktioner af progesteron er vævsspecifik. Vi fandt, at høj PGR densitet niveau i TE blev associeret med CF patienter med Gleason score ≥ 7, hvilket antyder en opregulering af PGR i skrider PSA. Dette er i konsistens med tidligere udgivelser. Bonkhoff et al. har foreslået en gradvis fremkomst af PGR under PCa progression og metastase [10]. Støtte disse resultater, Latil og medarbejdere fundet en nedsat PGR udtryk i klinisk lokaliserede tumorer og øget PGR udtryk i hormon-refraktær tumorer, sammenlignet med normal prostata væv [9].

I flere eksperimentelle studier med check et al., mus med PCa blev behandlet med en PGR-antagonist, mifepriston, og sammenlignet med kontroller. De fandt en højere dødelighed i de ikke behandles. Endvidere var der færre PCA komplikationer i den behandlede gruppe [41,42]. Lignende resultater af anti-progesteron aktivitet af mifepriston i både androgen følsomme og ikke-følsomme PCA cellelinjer

in vitro

in vivo

, er blevet rapporteret [43,44]. Vores resultater giver yderligere støtte til disse resultater, hvilket indikerer, at PGR spiller en rolle i patogenesen af ​​PSA. For at undersøge om afvigende PGR aktivitet er en mekanisme for udvikling kastrationsniveau resistent prostatacancer, et fase I klinisk /II forsøg er netop blevet indledt for at teste effekten af ​​anti-progestin, onapriston, hos patienter med denne tilstand (http: //clinicaltrials .gov /show /NCT02049190).

mekanismen bag PGR opregulering i PCa er endnu ikke klarlagt. I denne undersøgelse blev Ki67 og PGR i TE korreleret med CF (S3 Text), hvilket indikerer en associering mellem PGR og proliferativ aktivitet. Arora et. al. [12] har rapporteret, at opregulering af glucocorticoidreceptoren genaktiverer ekspressionen af ​​en undergruppe af androgen receptor-regulerede gener og derved inducerer kastrere resistente PSA. PGR er, ligesom glucocorticoidreceptoren, ligner androgen receptor med 88% sekvenshomologi i det ligandbindende domæne [45]. I overensstemmelse med dette fund kunne progesteroninduceret ekspression af androgen receptor-regulerede gener være en potentiel mekanisme bidrager til udviklingen af ​​kastrationsniveau resistent PSA. Men yderligere forskning undersøger dette er berettiget, for sådan en hypotese at blive bekræftet.

En mulighed for forskellige roller ved to PGR isoformer i normal prostata væv og PCa, som er foreslået for de østrogen-receptorer [13], skal også tages i betragtning. Vi ved nu, at krydstale mellem TE og TS er afgørende for udviklingen af ​​PSA. I en undersøgelse af Memarzadeh et al., Cancerassocierede fibroblastvækstfaktorer forårsagede en opregulering af epitelial androgenreceptor [46]. Dette kunne indikere, at epitel-stromale krydstale er mekanismen bag induktion af PGR udtryk i TE, og det er dermed fremme PCa progression. Men opregulering af PGR kan ikke være den direkte mekanisme bag øget proliferation, men snarere en følge af andre underliggende processer. Således respektive rolle epitelial versus stromale PGR i prostata carcinogenese og et potentielt individuel rolle PGR isoformer mangler at blive fastlagt.

Konklusion

Heri fandt vi, at en høj tæthed niveau PGR i TE er en uafhængig prognostisk faktor for progression til CF i PSA. Endvidere høje PGR tæthedsniveauer betydelige for progression til CF patienter med Gleason score ≥ 7. Progesteron /PGR kan af disse grunde være anvendelige som et prognostisk værktøj, men også som et mål for nye behandlingsstrategier i PSA. Yderligere funktionelle studier, der undersøger GB rolle i både epitel og stromale rum i PCa er stadig behov for at indgå, hvordan man bedst anvender denne viden i PCa diagnose og behandling.

Støtte Information

S1 datasæt. SPSS PCa og PGR datasæt

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116691.s001

(SAV)

S2 datasæt. SPSS PCa og Ki67 datasæt

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116691.s002

(SAV)

S1 Fig. Lysater af HEK 293-celler med enten en tom vektor (A) eller en PGR overekspression konstruktion (B) blev modtog en SDS-PAGE-gel og overført til en nitrocellulosemembran.

Membranen blev først probet med Ventana anti-PGR antistof (øverste panel), og derefter med anti-actin antistof til at styre for lastning (nederste panel)

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116691.s003

(TIFF)

S1 tekst. Antistof specificitet validering

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116691.s004

(DOCX)

S2 tekst. Ventana produktkatalog, CONFIRM anti-Progesteron receptor (PR) (1E2) Rabbit monoklonalt primært antistof

doi:. 10,1371 /journal.pone.0116691.s005

(PDF)

S3 tekst. . Ki67 immunfarvning

doi: 10,1371 /journal.pone.0116691.s006

(DOCX)

Tak

Vi vil gerne takke Magnus Persson, (Institut for Klinisk Patologi, University Hospital i Nordnorge), og Mona Pedersen (uit Arctic Universitet Norge) for deres meget omhyggelig laboratoriearbejde.