PLoS ONE: Reduktion af dødeligheden på grund af akut myokardieinfarkt i Patienter med kræft gennem Systemisk Restaurering af værdiforringede Nitrogenoxid

abstrakt

Indledning

Overdreven aggregering af blodplader på stedet for plaqueruptur på koronararterien førte til dannelsen af ​​thrombus, som er rapporteret at udfælde akut myokardieinfarkt (AMI). Nitrogenoxid (NO) er blevet rapporteret at hæmme trombocytaggregation og fremkalde trombolyse gennem

in situ

dannelsen af ​​plasmin. Som plasma NO niveauet i AMI-patienter fra to forskellige etniske grupper blev reduceret til 0 pM (median) sammenlignet med 4,0 uM (median) i normale kontroller, effekten af ​​restaureringen af ​​NO niveauet til normalområdet på forekomsten af ​​dødsfald som følge af AMI blev bestemt.

Metoder og Resultater

restaureringen af ​​plasma NO niveau blev opnået ved en stikning lille vatrondel (10 × 25 mm), der indeholder 0,28 mmol natrium (SNP) i 0,9% NaCl til den abdominale hud af deltagerne anvender ikke-toksisk tape, som blev rapporteret at normalisere plasma NO plan. Deltagerne (8283) var frivillige i en uafhængig undersøgelse, der havde forskellige former for kræft og ikke ønsker at bruge nogen konventionel behandling for deres tilstand, men valgte at modtage SNP “pad” for deres tilstand i 3 år.

brugen af ​​SNP “pad” som normaliseret (≈4.0 uM) plasma NO niveau, som i konsekvens reducerede dødeligheden på grund af AMI, blandt deltagerne, viste sig at blive reduceret væsentligt i forhold til døden på grund af AMI i normalbefolkningen.

Konklusion

Vores data tyder på at brug af SNP “pad” væsentligt reduceret død på grund af AMI.

prøve registrering

www.ctri. nic.in 004.236

Henvisning: Ghosh R, Ray U, Jana P, Bhattacharya R, Banerjee D, Sinha A (2014) Reduktion af dødeligheden på grund af akut myokardieinfarkt i fag med kræft gennem Systemisk Restaurering af værdiforringede Nitrogenoxid. PLoS ONE 9 (2): e88639. doi: 10,1371 /journal.pone.0088639

Redaktør: Carlo Gaetano, Goethe-universitetet, Tyskland

Modtaget: August 9, 2013; Accepteret: 6 jan 2014; Udgivet: 18 februar 2014

Copyright: © 2014 Ghosh et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev delvist understøttet af Forsvarets Research and Development Organization, Govt. Indien (DLS /81/48222 /LSRB-247 /EPB /2012 finansieringskilderne havde nogen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser..: forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

aggregering af blodplader ved en sammenlægning af agenter som ADP,

l

-epinephrine, collagen eller thrombin er et kritisk vigtigt fysiologisk begivenhed i livreddende blodkoagulation proces [1]. i modsætning hertil dannelsen af ​​blodprop (microaggregate af blodplader indlejret i fibrin masse) på grund af overdreven trombocytaggregation, især ved ADP [2], på de store eller mellemstore kranspulsåren , på stedet for aterosklerotisk plaque ruptur eller revnedannelse er blevet rapporteret at resultere i akutte koronare syndromer, der fører til ustabil angina eller akut myokardieinfarkt [3]. i akutte tilfælde, tromben induceret blokade af den normale blodcirkulation vil ikke blot hindre tilgængelighed af iltet blod, men ville også afbryde forsyningen af ​​næringsstoffer, mineraler og vand, der er afgørende for de normale aktiviteter hjerte-muskler, der fører til akut iskæmisk hjertesygdom (AIHD), herunder akut myokardieinfarkt (AMI). Og som sådan, dannelsen af ​​thromben på koronar arteriel væg spiller en særdeles vigtig rolle i patogeniciteten af ​​koronararteriesygdom (CAD). På den anden side opløsning af den dannede thrombus kan bidrage til at løse den betingelse ved gengivelsen af ​​den normale blodcirkulation i hjertet muskler. Forskellige trombolytiske midler anvendes til at opnå den opløsning af det dannede trombe [4] – [8].

Overdreven aggregation af blodplader påvirkes af forskellige blodplade aggregering agenter, der fører til trombedannelse. Imidlertid er den overdrevne blodpladeaggregering modvirket af effekten af ​​adskillige humorale inhibitorer af blodpladeaggregering herunder prostacyclin [9], interferon-α [10], og insulin [11]. Mens prostacylin (BGB

2) er rapporteret at inhibere blodpladeaggregering gennem den cellulære stigning af cyklisk AMP-niveau [12], insulin og interferon-α er rapporteret at inhibere blodpladeaggregering ved at øge den cellulære syntese af nitrogenoxid (NO) [ ,,,0],13], [10]. Nitrogenoxid er blevet rapporteret at inhibere blodpladeaggregering ikke kun gennem den cellulære stigning i både cyklisk AMP og GMP-niveau [14] – [16], NO kan også inhibere blodpladeaggregering gennem direkte aktivering af plasminogen til plasmin [10], som igen hæmmede trombocytaggregation gennem opløsningen af ​​inter blodplader ‘fibrinogen broer selv i fravær af både cykliske AMP og cyklisk GMP synteser i blodplader [17], [18].

hæmning af trombocytaggregation af acetylsalicylsyre (aspirin) er ikke kun rapporteret at inhibere blodpladeaggregation gennem inhibering af blodpladecyclooxygenase [19], men forbindelsen er også rapporteret at inducere NO syntese i blodplader og i andre celler [20]. således produceret Nitrogenoxid er rapporteret at udsvævende inter blodplader ‘fibrinogen obligationer ved dannelsen af ​​plasmin fra plasminogen [10], [20]. Omfattende undersøgelser har vist, at brugen af ​​aspirin reducerede signifikant forekomsten af ​​CAD [21], [22], og det er blevet foreslået, at effektiviteten af ​​aspirin til at reducere forekomsten af ​​CAD var relateret ikke blot til evnen hos forbindelsen til inhiberer blodplade cyclooxygenase [23], [24], men også til den thrombolytiske virkning af forbindelsen på grund af NO syntese fører til plasmin-dannelse [25]. I denne forbindelse kan det nævnes, at enten den direkte injektion af NO i 0,9% NaCl eller injektion af insulin, der stimulerede systemisk NO syntese i mus viste sig at effektivt beskytte dyret mod dødsfald som følge af koronar trombose som følge af injektion af ADP i den omsætning, selv i fravær af aterosklerotisk plaque ruptur i de “normale” dyr [26].

i en forundersøgelse for at bestemme den mulige rolle af systemisk NO i CAD, hvis nogen, når plasma NO niveau blev bestemt i patienter, der lider AMI, blev det konstateret, at plasma NO niveauet hos disse patienter (n = 125 M = 101, F = 24) blev kraftigt reduceret (0 nmol /ml; (median) resultaterne af den foreløbige. undersøgelse og den rolle, NO som en antitrombotisk og et trombolytisk middel som rapporteret ovenfor, fik os til at vurdere muligheden for at forhindre AMI, gennem den systemiske forhøjelse af plasma NO niveau ved hjælp natriumnitroprussid (SNP) “pad”, som beskrevet før i dyremodel samt hos mennesker [27], [28]. Som det var hverken muligt eller gennemførligt at anvende SNP “pad” uendelige for den systemiske forøgelse af NO niveau i normale frivillige, for at bestemme virkningen af ​​forøget plasma NO niveau for at reducere forekomsten af ​​AMI, er virkningen af ​​stigningen af ​​plasma NO-niveauer i forebyggelsen af ​​AMI hos forsøgspersoner med cancere blev udført i to forskellige årsager: 1) cancerpatienter er rapporteret at være en større risiko for død som følge af AMI forhold til normal befolkning [29] – [33], og 2) undersøgelse (deltagelse af cancerpatienter) blev ikke særlig igangsat for at bestemme virkningen af ​​forøget systemisk NO niveau ved hjælp af SNP “pad” (se nedenfor) på forekomsten af ​​AMI i cancerpatienter. Disse kræftpatienter deltaget i en uafhængig undersøgelse, og deres optagelse blev kun vedrørte en serendipitous observation, hvor de emner, der fik SNP “pad” havde bemærkelsesværdigt lavere dødelighed på grund af AMI i forhold til den normale befolkning. Det skal her bemærkes, at resultaterne evalueret i dette papir ikke var en del af den oprindelige kliniske forsøg og det var i stedet en sekundær analyse af de opnåede resultater før [28]. Disse individer med forskellige former for kræft, der deltog i vores undersøgelse havde valgt på deres eget ønske om ikke at modtage nogen kemoterapi, strålebehandling eller operation for tilstanden, men ønskede at modtage kun dermal “antineoplastin” terapi, der er faktisk en SNP “pad” [ ,,,0],28]. Det skal nævnes her, at disse frivillige allerede modtog dermal SNP “pad” for de sidste 3 år for deres neoplastiske tilstande, når dødeligheden blandt disse patienter blev sammenlignet med normale frivillige og analyseres kun til statistisk formål. Virkningerne af den systemiske stigning af plasma NO niveau i forebyggelsen af ​​AMI i dyremodellen samt hos mennesker med cancer, der blev rapporteret til at være disponeret for øget forekomst af AMI sammenlignet med den i den normale population [29] – [33 ] præsenteres heri

Materialer og metoder

protokollen for dette forsøg og støtte tjekliste er tilgængelige som underbyggende oplysninger.; se Tjekliste S1 og protokol S1.

Etik Statement

Denne undersøgelse anmodet deltagelse af både normale frivillige og alder og køns- matchede personer med forskellige slags kræft. Disse kræftpatienter på tidspunktet for præsentationen modtog kun “antineoplastin” dermal pad, en roman anticancer terapi som beskrevet før [28]. Kort fortalt “antineoplastin” pude når de påføres på huden af ​​recipienten er blevet rapporteret at øge plasma NO niveau, gennem “feedback” aktivering af insulin aktiveret nitrogenoxidsyntase (Ianos) i de dannede elementer i blodet samt i endotelcellerne af fartøjerne [34]. Disse patienter ved deres eget ønske ikke vælge at modtage nogen anden terapi samtidigt. Den passende godkendelse til anvendelse af den dermale “antineoplastin” (SNP “pad”) af disse frivillige med forskellige former for kræft blev opnået fra Institutional Review Board for menneskelige forskningspotentiale, Sinha Institut for Medicinsk Videnskab og Teknologi, Kolkata, Indien, og fra Calcutta High Court of Law, efter juridisk rådgivning blev stillet til rådighed for hver af disse frivillige i overværelse af familiemedlemmer som rapporteret før (protokol S1) [28]. Hver deltager fik fri adgang til rådgivning en advokat og et familiemedlem at få tilladelse. Ingen frivillige med kræft fik lov til at deltage i undersøgelsen, uden skriftlig tilladelse (retslig erklæring) som er underskrevet af en dommer, og når deltagerne blev udvalgt, blev de bedt om at underskrive en informeret samtykkeerklæring i overværelse af et vidne. Alle deltagere blev grundigt rådgivet om både fordele og risici i tilstedeværelse af en juridisk rådgiver med den forståelse, at deltageren kan afslutte forskningsaktiviteten uden forudgående tilladelse fra efterforskerne. Ingen økonomisk kompensation blev bedt enten af ​​deltagerne eller af efterforskerne i enhver fase af arbejdet. Dommen for at forfølge forskningsaktiviteten på kræftformer som beskrevet ovenfor ved hjælp af “antineoplastin” blev godkendt af den højeste domstol i staten dvs. The Calcutta High Court. Også bemærk venligst, at omfattende forsøg blev udført i tre typer af dyr, som spurgt af Calcutta High Court. Resultaterne af undersøgelsen og godkendelsen af ​​High Court er tilgængelige i det offentlige domæne til eftersyn enhver pågældende person.

plasma prøver fra AMI, der var fra Australien blev også anvendt i undersøgelsen og nødvendige tilladelse blev opnået fra human Research Ethics, University of Tasmania, Australien.

Denne undersøgelse også brugt sunde hvide schweiziske Albino mus efter at blive undersøgt af en certificeret dyrlæge. En standard pellet kost og sterilt vand blev givet

ad libitum

. Passende tilladelse blev opnået fra Institutional Review Board for Animal Care, Sinha Institut for Medicinsk Videnskab og Teknologi, Kolkata, Indien. Der blev draget omsorg for at sikre, at ingen dyr unødvendigt skadet eller blev udsat for smerte i løbet af undersøgelsen, og de blev udført kun i overværelse af et medlem tilhører Animal rigtige gruppe. Efter afslutningen af ​​undersøgelsen, blev dyrene aflivet ved eutanasi hjælp af en CO

2 kammer.

Udvalg af patienter med forskellige kræftformer

Detaljerne i udvælgelsen af ​​kræftpatienter og brugen af ​​”antineoplastin” pad i de udvalgte patienter er vist i fig. 1. Undersøgelsen blev gennemført i Sinha Institut for Medicinsk Videnskab og Teknologi, Kolkata, Indien, fra år 1999 til 2012 og er stadig fortsættes som pr rækkefølgen af ​​Calcutta High Court of lov (fig. 1). Den “antineoplastin” pad blev leveret til patienterne af den behandlende teknikere i overværelse af medicinsk personale med M.D. grad. En dobbelt-blind metode til at undersøge Undersøgelsen blev udført, hvor hverken undersøgeren eller de medicinske personale havde nogen viden om type kræft. Først efter en måned, når patienterne viste sammenlignende forbedring relateret til den komplette blodbilledet, smerter og andre kræftrelaterede problemer som bekræftet af fin nål aspiration cytologi, ultralydsscanning, hæmatologisk test og leverfunktionstest blev dataene tabuleret af en uafhængig tabulator, der havde ingen viden om kræftpatienter, eller om “antineoplastin” pad blev modtaget af disse patienter [28].

patienter med forskellige kræftformer blev udvalgt til undersøgelsen og “antineoplastin” pude bestående af 0,2 ml af den løsning (0,28 mmol SNP) gennemvædet med en band-støtte blev anvendt dermalt på den nederste abdominal hårfri område som beskrevet før [28]. Bemærk venligst, at hele processen med at levere den “pad” som indeholder “antineoplastin” tager mindre end 5 min. Folk fra forskellige dele af verden, der tilhører multi-etniske og multi-kulturelle baggrunde har deltaget i undersøgelsen, herunder Indien, Polen, Papua Ny Guinea, Sri Lanka og Bangladesh. De havde brugt denne “antineoplastin” pad i mindst et år med en maksimal løbetid på 5 år.

Valg af normale frivillige

Alder og køn matchede raske frivillige deltog også i studere. Disse personer på tidspunktet for deltagelse i undersøgelsen var ikke lider af forhøjet blodtryk eller havde historie af diabetes mellitus. Ingen af ​​de raske frivillige forsøgspersoner blev indlagt for enhver tilstand inden for de sidste 6 måneder, og ingen havde livstruende infektion. Passende informeret samtykkeerklæring blev underskrevet af disse frivillige.

Udvælgelse af patienter med akut myokardieinfarkt (AMI)

For at minimere indflydelsen af ​​etnisk baggrund og geografiske placering på plasma NO niveauet i AMI-patienter , fag fra både Calcutta i Indien, og fra Hobart, Tasmanien i Australien blev bedt om at deltage i undersøgelsen.

kriterier for alle AMI integration.

i Calcutta, alle patienter blev indlagt på intensivafdeling af Calcutta Medical College og Hospital, Calcutta, Indien, (n = 55 M = 45, F = 10; median alder 59 år). I Australien blev patienter indlagt på Royal Hobart Hospital, Tasmanien, Australien (n = 70 M = 56, F = 14; median alder 54 år). Alle deltagere havde brystsmerter karakteristika af myocardial iskæmi i 30 minutter eller mere. Den elektrokardiogram viste typiske ST-elevation af mindst to ledninger i EKG indikerer en enkelt myokardiet region. Bekræftelsen af ​​tilstanden blev bestemt ved de forhøjede kreatinkinase og kreatinkinase-MB isoenzymer i blodprøverne. Prøveudtagning af blodet blev foretaget inden for 6 timer af starten af ​​angina angreb før indledningen af ​​enhver terapi for tilstanden.

Eksklusionskriterier.

Patienter med diabetes mellitus, cerebrovaskulær ulykke eller viser tilstedeværelsen af ​​grenblok eller hypertrofi af venstre ventrikel i EKG, der ikke tillader diagnosticering af iskæmi /infarkt eller havde livstruende infektion blev udelukket fra undersøgelsen.

selv de deltagende patienter ved præsentationen havde nogen historie syge tilstande som nævnt ovenfor, nogle af patienterne under undersøgelsen gjorde udvikle kardiovaskulære risikofaktorer nemlig., hypertension og diabetes mellitus. Disse patienter blev behørigt behandlet ved hjælp af anti-hypertensive og hypoglykæmiske lægemidler som anses af den behandlende læge uafhængigt af undersøgelsen (tabel 1).

Kemikalier

ADP blev købt fra Sigma Chem . Co. Natriumnitroprussid var et produkt af Abraxis Pharm. Alle andre kemikalier, der anvendes i undersøgelsen var af analytisk kvalitet.

Udvikling af blodprop i hjertet hos mus

Swiss hvide albino mus blev anvendt til at udvikle koronar trombose ved at injicere ADP i halevenen som beskrevet før [26]. Disse dyr blev indavlet i vores dyrefacilitet fra fødslen til brugen af ​​2 måneder. De blev fodret standard laboratorium chow, og steriliseret vand blev givet

ad libitum

. Dyrene blev dyrket i 12 h cyklusser af lys og mørke. Før brug disse mus blev kontrolleret af en autoriseret dyrlæge for at fastslå, at de var fri for sygdomme.

Stimulering af plasma NO niveauer i dyre- og frivillige in vivo

Forøgelsen af ​​plasma NO niveau var opnås ved at stikke en steril vattampon (25 mm x 10 mm) gennemvædet med 1,6 M natriumnitroprussid dihydrat (SNP) i 0,9% NaCl indeholdende 0,28 mmol af SNP til håret frit område af maven ved hjælp af ikke-toksisk tape som beskrevet før [27], [28]. Efter behov SNP “pad” blev ændret hver 24 timer. Detaljerne i den mekanisme for øget syntese af NO ved dermal anvendelse af SNP “pad” er blevet rapporteret før [28].

Bestemmelse af plasma NO niveau

Plasma NO niveau var bestemt ved methæmoglobin assay som beskrevet før [20]. Typisk tilstedeværelsen af ​​NO i prøven konverterer oxyhæmoglobin til methæmoglobin med karakteristiske ændringer af absorptionsmaksima ved 575 nm og 600 nm. Dannelsen af ​​methæmoglobin blev bestemt ved at måle den optiske densitet ved disse absorptionsmaksima under N

2 ved anvendelse af et Beckman spektrofotometer (model DU) som beskrevet tidligere [20]. Den kvantificering af NO valideret af en uafhængig chemiluminescens metode [35].

Indsamling af blodprøver

Perifert blod blev opsamlet ved venepunktur ved hjælp 19 gauge silikoniseret nålen fra deltagerne i plastflasker og anti koaguleret ved at blande 9 vol blod med 1 vol af 0,013 M natriumcitrat som antikoagulans, og blandes ved forsigtig inversion. Cellefri plasma (FFP) blev fremstillet ved centrifugering af blodprøverne ved 10.000 g i 30 minutter ved 0 ° C.

Bestemmelse af plasmaet dermcidin isoform 2 niveauer Salg

Dermcidin isoform 2, en 11 kDa protein, der er rapporteret at forekomme i plasmaet fra de patienter, der lider AMI, blev bestemt til at være en potent inhibitor af alle kendte former for nitrogenoxidsyntase [36]. Dermcidin blev målt ved enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) ved anvendelse elektroforetisk rent dermcidin isoform 2 som antigenet som rapporteret før [36].

Fremstilling af Goat Arteria carotis endotelcelle Homogenisat Salg

Endotelceller fra carotidarterien af ​​friskslagtet ged blev fremstillet i Tyrod buffer pH 7,4 som tidligere beskrevet [37]. Det sprængte cellemasse blev centrifugeret ved 60.000 g i 30 minutter ved 0 ° C. Supernatanten blev anvendt som kilde til endotel nitrogenoxidsyntase (eNOS).

Lineweaver-Burk plot af insulin-aktiveret eNOS i Endothelial cellehomogenatet i nærvær eller fravær af Dermcidin

A totalvolumen på 1,0 ml af reaktionsblandingen indeholdt forskellige koncentrationer af

l

-arginin i nærvær af 2 mM CaCl

2 med 100 μunits af insulin /ml og i nærvær eller fravær af 0,1 uM dermcidin i Tyrod buffer, pH 7,4. Produktet NO blev bestemt efter 20 minutters inkubation ved 37 ° C under N

2, (under steady state for dannelse af NO (1-30 min), som beskrevet før [38].

Statistisk analyse

betydningen af ​​forebyggelse af dødsfald på grund af ADP-induceret blodprop i hjertet ved hjælp af SNP “pad” i dyremodel blev bestemt ved Students “t” test. betydningen af ​​overlevelsesraten i disse dyr blev bestemt af Kaplan-Meir overlevelse analyse. i tilfælde af frivillige mennesker, betydningen af ​​reduktionen af ​​plasma NO-niveauer i både de indiske og australske AMI-patienter blev analyseret ved en regressionsmodel. betydningen af ​​forebyggelse af dødsfald på grund af AMI i de personer med forskellige former for kræft, som deltog og modtaget SNP “pad” i undersøgelsen blev analyseret ved Z-test. resultaterne blev betragtet som signifikante, når nulhypotesen blev afvist med den beregnede z-værdi større end den kritiske to-halede z-værdi og P. alpha 0.5 de statistiske analyser blev udført af Graphpad Prism software

Resultater

plasmaniveauerne af NO og plasma dermcidin niveau i AMI patienter i Australien og i Indien og i køn. og alderen matchede raske frivillige

Som beskrevet ovenfor, for at minimere påvirkninger af etniske og geografiske placeringer af deltagerne i plasma NO niveauer i AMI, plasma NO niveau i denne tilstand blev bestemt både i Calcutta, Indien og i Hobart, Australien.

det blev konstateret, at plasma NO niveauet i de australske patienter (n = 70) var 0 nmol /ml (median) (fra 0,07 nmol /ml til 0 nmol /ml) ( fig. 2A) og plasma NO niveauet i de indiske modparter (n = 55) havde også en median værdi på 0 nmol /ml (på mellem 0,05 nmol /ml til 0 nmol /ml) (Fig. 2B). Disse resultater tydede på, at hverken den etniske baggrund eller den geografiske placering af de AMI-patienter påvirket plasma NO-niveauer i AMI og plasmaet NO-niveauer var i det væsentlige ens i de to tilfælde. Det blev endvidere bemærket, at plasma INGEN niveauer både i hanner og hunner var ens i intervaller.

NO niveau blev bestemt ved methæmoglobin som beskrevet i materialer og metoder afsnit i begge tilfælde. Panel A repræsenterer medianværdier plasma NO niveau i AMI-patienter og i samme antal alder og køn matchede raske frivillige i Australien. Panel B viser medianværdier plasma NO niveau i AMI-patienter og i alder og køn matchede raske frivillige i Indien.

Regression kurve af plasma NO niveau, og den aldersgruppe, viste, at forekomsten af AMI var fremherskende i lignende serier af aldersgruppe og plasma NO niveau fandtes at ligge omkring 0 nmol /h i begge grupperne af patient (fig. 3). Det kan konkluderes, at såvel i indiske og australske patienter aldersgruppen og ingen plan er betydelige med r

2 = 0,8021.

Regression model af aldersrelaterede NO niveau til det plasma i både den indiske og Australsk AMI-patienter blev afbildet. Alderen og den tilsvarende plasma NO niveau af deltagerne kunne bestemmes fra plottet. Solid linje repræsenterer regression kurve af aldersgruppen fra de indiske AMI-patienter. Stiplet linje angiver regression kurve af aldersgruppen fra de australske AMI-patienter. Solid cirkler (•) angiver variationer i aldersgruppen af ​​indiske AMI-patienter. Solid kvadrater (▪) angiver variationer i aldersgruppen af ​​australske AMI-patienter. De hule cirkler (○) og hule kvadrater (□) repræsenterer plasma NO niveauet i indiske og australske patienter hhv.

Plasma dermcidin niveauer i AMI fag og i alder og køn matchede raske frivillige

Mens plasma dermcidin niveauet i raske frivillige viste sig at være 9,89 ± 3,9 nM, det steg til 115,5 ± 9,9 nM i AMI-patienter (p 0,0001, n = 125). Mekanismen for dermcidin induceret hæmning af NO blev undersøgt i et separat eksperiment, hvor dermcidin blev fundet at inhibere insulin aktiveret nitrogenoxidsyntase i ged endotelceller, hvilket fører til inhibering af NO fra

l

-arginin. Lineweaver-Burk plot foreslået, at dermcidin på området fra 0,1 pM øgede Km fra 9,03 pM til 25,45 uM arginin med ledsagende fald i Vmax fra 6,5 ​​nmol NO /h /mg til 4,0 nmol NO /h /mg.

beskyttelsen af ​​mus mod død som følge af ADP-induceret koronar trombose induceret af forøgelsen af ​​plasma NO niveau ved hjælp SNP “pad”

koronartrombose blev induceret i mus som en dyremodel ved at injicere ADP i halevenen som beskrevet i Materialer og Metoder. Injektionen af ​​ADP i halevenen på musene forårsagede død i disse dyr inden for 20 minutter med udviklingen af ​​thrombe i kranspulsåren som tidligere beskrevet [26].

For at bestemme virkningen af ​​den systemiske stigning på NO niveau på ADP-induceret dødsfald på grund af dannelsen af ​​koronar trombose, blev samme koncentration af SNP “pad” som i tilfælde af humane frivillige (0,28 mmol) anvendes til håret befriet område af maven i mus som beskrevet. Plasmaet NO niveau blev bestemt på forskellige tidspunkter efter anvendelse af “pad”. Det konstateredes, at plasmaet NO niveau, der var 2,1 ± 0,2 pM ved nul timer (dvs. inden anvendelsen af ​​”pad”) steg til 4,1 ± 0,3 pM efter 24 timer af den dermale anvendelse af SNP “pad” (p lt 0,0001, n = 10). Ved 24 timer efter påføringen af ​​den “pad” blev dyrene udfordret ved at injicere 1,5 pmol ADP /g legemsvægt i halevenen. Det blev konstateret, at dyrene var beskyttet mod død som følge af injektion af ADP (mindst 2 dage). I modsætning hertil injektion af ADP resulterede i død af mus inden for 20 minutter, hvor dyrene ikke modtog nogen SNP “pad” med plasma NO niveau på 2,0 ± 0,2 uM (p 0,0001, n = 10), der var ens til i kontrolgruppen dyr (ubehandlet med “pad”).

ændringen af ​​nitroprussid “pad” hver 24 timer, der genoprettede plasma NO niveauet til 4,2 ± 0,2 uM blev fundet at beskytte dyrene mod døden ubestemt tid på grund af den gentagne thrombogen overfald induceret ved gentagen injektion af ADP hver 24 timer i mindst 7 dage.

overlevelsesraten for dyrene injiceret med ADP behandlet med og uden SNP “pad” var udsat for Kaplan-Meir overlevelse test til bestemmelse af betydningen af ​​overlevelsesraten i disse dyr (fig. 4). En sammenligning af overlevelseskurverne som fastsat af Log-rank (Mantel-Cox) Test foreslog, at overlevelseskurverne var signifikant forskellige med en P-værdi på 0. 0331. Derudover Gehan-Breslow-Wilcoxon Test bestemt også overlevelseskurverne til være væsentligt anderledes med en P-værdi på 0. 0399.

for at bestemme overlevelsen i dyrene fra blodprop i hjertet ved dermal anvendelse af SNP “pad” fremkaldt af ADP, blev Kaplan-Meier overlevelse kurve plottet. Gruppe 1 repræsenterer de dyr, der har modtaget dermal anvendelse af SNP “pad”. Kurven viser overlevelsesperioden som viser overlevelsen af ​​dyrene op til 72 timer efter gentagen injektion af ADP. Gruppe 2 repræsenterer kontrolgruppen uden SNP “pad” behandling. Overlevelsestiden for dyrene var mindre end en time som det fremgår af kurven.

Effekten af ​​øget plasma NO niveau ved hjælp SNP “pad” på hastigheden af ​​dødsfald på grund af AMI hos forsøgspersoner med forskellige kræftformer

som det blev fundet brugen af ​​SNP “pad” i dyrene for at beskytte dyr fra døden på grund af ADP-induceret trombose, blev hastigheden af ​​dødsfald på grund af AMI bestemt hos kræftpatienter, der havde modtaget SNP “pad” mindst 3 år hverdagen for forskellige former for kræft, som beskrevet før [28]. Det blev rapporteret, at mens plasma NO niveau var ≈4 uM i raske frivillige, blev fundet plasmaniveauet af NO i alle testede kræftformer at blive reduceret til 0 pM [28]. I alt 8,283 patienter med forskellige former for kræft (tabel 2), der modtog den dermale SNP “pad”, i mindst 3 år plasma blev NO niveauer gendannet til ≈4 uM, (p 0,0001) som rapporteret før [28 ]. Interessant, det faktiske antal dødsfald på grund af AMI selv hos disse patienter var kun 895. Som beskrevet i tabel 3, blev det konstateret, at dødeligheden i normalbefolkningen grund AMI var 40%. Men hastigheden af ​​dødsfald på grund af AMI i kræftpatienter, der havde fået den “pad” i 3 år var 12,265%, som kontrast dødeligheden i de kræftpatienter (29,858%), som ikke modtog nogen SNP “pad”. Z-test analyse mellem grupperne blev udført, hvor den beregnede z-værdien for dødeligheden på grund af AMI mellem den normale befolkning og de kræftpatienter bruger SNP “pad” var 17,239, som var større end den kritiske tosidede z-værdi 1,159 . Også z-værdien af ​​de dødeligheden på grund af AMI mellem kræftpatienter ikke fik den SNP “pad” og kræftpatienter ved hjælp af “pad” var 22,3, som var igen større end den kritiske tosidede z-værdi 1,959. P-værdien for den tosidede test i alle de tilfælde viste sig at være 0, hvilket var mindre end den a-værdi på 0,5 (dvs. P 0,5). Z-test analyse derfor fastsat, at antallet af dødsfald som følge af AMI i de deltagende kræftpatienter var signifikant lavere end selv at i den normale befolkning, der i kontrast en betydelig forøgelse af dødeligheden på grund af AMI hos kræftpatienter.

diskussion

Disse resultater tydede på, at en alvorlig reduktion af plasma NO niveau kan resultere i værste prognostiske udfald af AMI, idet, NO var ikke kun en potent hæmmer af trombocytaggregation [10 ] og en

in situ

trombolytisk middel [20], [25], men den unormale reduktion af plasma NO-plan kunne også spille en kritisk rolle i udviklingen af ​​alvorlige smerter i brystet, der er normalt forbundet med AMI for hvilke der ikke acceptabel mekanisme er i øjeblikket tilgængelig. Som INGEN genererende forbindelser som økologiske “Nitro” forbindelser, herunder isosorbate dinitrate og nitoglycerine

in vivo

har betydelig anti-angina effekt gennem den systemiske generation af NO i ofrene for AMI [39], det kunne udledes, da en naturlig følge, at den alvorlig reduktion af plasmaet NO niveau til 0 nmol /ml, kan have en betydelig og en medvirkende rolle i udviklingen af ​​den kardiale smerter forbundet med AMI. I den forbindelse kan det også nævnes, at mens det mandlige køn hormon, testosteron, er en inhibitor af systemisk NO-syntese, østrogen, det kvindelige køn hormon derimod var en potent aktivator af nitrogenoxid syntase (ikke offentliggjort).