PLoS ONE: Påvisning af Core2 β-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase i Post-digital rektal undersøgelse Urin er en pålidelig indikator for ekstrakapsulær Udvidelse af prostata Cancer

Abstrakt

For at identificere egnede kandidater til aggressiv behandling, som radikal prostatektomi eller strålebehandling af lokaliseret prostatacancer (PCA), nye prædiktive biomarkører for PCa aggressivitet er afgørende. Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) er et vigtigt enzym, der danner kernen 2-forgrenede

O

-glycans. Dets ekspression er forbundet med progressionen af ​​flere kræftformer. Vi har etableret en muse-IgG monoklonalt antistof (mAb) mod GCNT1 og undersøgt forholdet mellem GCNT1 udtryk til klinisk-patologisk status PSA. Paraffinindlejrede PCA prøver blev analyseret ved immunhistokemi for GCNT1 udtryk ved hjælp af en nyetableret muse-anti-GCNT1 mAb af os selv. GCNT1-positive tumor viste signifikant højere Gleason score og større tumor volumen. Antallet af GCNT1-positive tilfælde var signifikant lavere i tilfælde af orgel-begrænset sygdom end i tilfælde af extracapsular forlængelse. GCNT1-negative tumorer blev associeret med signifikant bedre prostata-specifikt antigen (PSA) -fri overlevelse sammenlignet med GCNT1-positive tumorer. Multivariat analyse viste, at påvisning af GCNT1 udtryk var en uafhængig risikofaktor for PSA recidiv. Vi har etableret nye metoder til GCNT1 detektion fra PCA prøver. Immunoblotting blev anvendt til at undersøge post-digital rektal undersøgelse (DRE) urin fra PCA patienter. Over 90% af GCNT1-positive PCA patienter med høje koncentrationer af PSA viste extracapsular forlængelse. Afslutningsvis GCNT1 udtryk nøje forbinder med den aggressive potentiale PSA. Yderligere forskning sigter mod at udvikle GCNT1 opdagelse i post-DRE urin som en markør for PCa aggressivitet

Henvisning:. Kojima Y, Yoneyama T, Hatakeyama S, Mikami J, Sato T, Mori K, et al. (2015) Påvisning af Core2 β-1,6-

N

-Acetylglucosaminyltransferase i Post-digital rektal undersøgelse Urin er en pålidelig indikator for ekstrakapsulær Udvidelse af prostatakræft. PLoS ONE 10 (9): e0138520. doi: 10,1371 /journal.pone.0138520

Redaktør: Ming Tat Ling, Queensland University of Technology, AUSTRALIEN

Modtaget: April 27, 2015; Accepteret: September 1, 2015; Udgivet: 21 September, 2015

Dette er en åben adgang artiklen, fri for alle ophavsrettigheder, og kan frit gengives, distribueres, overføres, ændres, bygget på, eller på anden måde bruges af alle til ethvert lovligt formål. Værket gøres tilgængeligt under Creative Commons CC0 public domain dedikation

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering: Japan Society for fremme af videnskab (https://www.jsps.go.jp/), Grant-in-Aid for Unge Forskere (B) 24.791.631 og Grant-in-Støtte til videnskabelig forskning (C) 15K10569 (YT); Japan Society for fremme af Science (https://www.jsps.go.jp/), Grant-in-Støtte til videnskabelig forskning (B) 22.390.301, Grant-in-Støtte til videnskabelig forskning (A) 15H02563 og tilskuds- i-Aid for Udfordrende Forberedende forskning 24659708 (CO); National Institutes Health Tilskud UO1 CA168924 (MF); Suzuki Urologisk Research Foundation, forskningsbevilling 2014 (YT). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Forkortelser : DRE, digital rektal undersøgelse; GCNT1, Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1; HRP, peberrodsperoxidase; mAb, monoklonalt antistof; PCa, prostatakræft; PSA, prostata-specifikt antigen; RLU, relative lysenheder

Introduktion

I USA og Europa, prostatacancer (PCA) er den mest almindelige malignitet hos mænd og den anden førende årsag til kræft dødsfald [1 , 2]. Forekomsten af ​​PCa er efter sigende lav i asiatiske lande [3]. Imidlertid er forekomsten hastigt stigende i Asien-Pacific regionen [4]. Nogle af de mest kritiske spørgsmål i forbindelse med PCa i klinisk praksis er overdiagnostik og overbehandling [5]. Den manglende specificitet prostata-specifikt antigen (PSA) test har resulteret i en debat om nytten af ​​PSA-baserede PCa screening [6, 7]. Desuden unødvendig behandling for indolent PSA med et lavt malignt potentiale er et stort problem, da aggressiv PCa behandling undertiden er forbundet med bivirkninger. En lovende alternativ modalitet at forhindre overbehandling er aktiv overvågning [8]. Imidlertid er identifikationen af ​​egnede patienter, der er gode kandidater til aggressiv behandling forbundet med vanskeligheder. Til dato er der ingen perfekte værktøj til præcis detektering af god kandidat til aktiv overvågning [9]. Derfor er identifikation og validering af biomarkører for PCa aggressivitet er vigtige i forebyggelsen PCa overbehandling.

Præoperative serum PSA niveauer og biopsi Gleason score er traditionelle og stærke prædiktorer for biologiske resultater efter radikal prostatektomi for PCa [10, 11] . For at forbedre risikoen lagdeling for PCa recidiv efter primær behandling af patienter med lokaliseret PCa, har mange forskere forsøgt biomarkører, der afspejler den aggressive potentiale PCa [12]. Imidlertid har de fleste af de rapporterede biomarkører ikke blevet valideret til at give oplysninger, der er mere nyttigt end der tilbydes af konventionelle klinisk-patologiske parametre. Med en ny biomarkør repræsenterer maligne potentiale PCa, kan mere præcis forudsigelse af PSA recidiv og passende behandlingsvalg være muligt.

Cell overflade kulhydrat strukturer er ændret under carcinogenese og spiller en vigtig rolle i cancer metastaser [13, 14 ]. Tilstedeværelsen af ​​sialyl Lewis X, som er en af ​​den funktionelle terminale struktur, på celleoverfladen af ​​colorektal cancer er positivt korreleret med dårlig prognose [15]. På lignende måde, høj Gleason score prostatacancer prøver udtrykt sialyl Lewis X [16]. Forgrenende glycan har øget en funktionel terminal struktur, og en bindingsaffinitet for specifikke lectiner [17]. I tidligere undersøgelse, mannosyl (alfa-1,6 -) – glycoprotein β -1,6-

N

acetyl-glucosaminyltransferase (MGAT5) og Core 2 β -1, 6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) dannet GlcNAc β1,6 forgrening glycan øget PCa aggressivitet [18, 19].

GCNT1 [20, 21] er et vigtigt enzym, der syntetiserer kerne 2-forgrenede

O

-glycans ved katalysere overførslen af ​​

N

-acetylglucosamine fra uridin diphosphate-

N

-acetylglucosamine med en β1, 6-binding til a-

N

– acetylgalactosamin af en kerne 1

O

-glycan (fig 1A). En tidligere undersøgelse analyseret

GCNT1

mRNA-ekspression i friske kolorektal tumorprøver og viste, at ekspressionen af ​​kerne 2-forgrenede

O

-glycans er tæt korreleret med den maligne potentiale for kolorektal cancer [22]. Dette gælder også for pulmonal adenocarcinom [23]. I immunhistokemi under anvendelse af et polyklonalt antistof [21], vi demonstreret, at GCNT1 ekspression er tæt forbundet med den aggressive potentiale PCa [18], testikelkræft [24], og blærecancer [25]. I nyere undersøgelse viste en genekspression matrix GCNT1 blev overudtrykt i prostatacancer væv [26]. Men etableringen af ​​et monoklonalt anti-GCNT1 antistof er afgørende for yderligere forskning, herunder valideringsstudier at belyse den kliniske anvendelighed af GCNT1 som biomarkør.

(A) biosynteseveje for

O

-glycans. (B) PCA prøver blev inkuberet med et anti-Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) monoklonalt antistof (mAb) efterfulgt af en peberrodsperoxidase (HRP) -konjugeret sekundært antistof . Modfarvning blev udført under anvendelse hæmatoxylin. GCNT1-positive cancerceller er brun. (C) prostataspecifikt antigen-fri overlevelse perioder blev sammenlignet mellem GCNT1-positive og GCNT1-negative prøver. Overlevelse blev analyseret ved hjælp af Kaplan-Meier kurver.

Her har vi rejst et monoklonalt antistof (mAb) mod GCNT1 ved immunisering af en mus med GCNT1 specifikt peptid (S1 File) at vurdere potentialet af sidstnævnte som en indikator for PCa aggressivitet. I denne undersøgelse viste vi, at anti-GCNT1 mAb viste høj specificitet mod human GCNT1 og at GCNT1 ekspression i PCA prøver fra radikal prostatektomi korrelerer med PCa aggressivitet. Hertil kommer, detektion af GCNT1 i post-digital rektal undersøgelse (DRE) urin af anti-GCNT1 mAb forudsagde extracapsular udvidelse af PSA. Derfor kan påvisning af GCNT1 i post-DRE urin tjene som en minimalt invasiv metode til at forudsige PCa aggressivitet.

Materialer og metoder

Materialer

ISOGEN II Reagent blev købt fra Nippon Gene (Japan). Et oprenset kanin-anti-muse-IgG-antistof (γ-kæde-specifikt) blev indkøbt fra Zymed. En peberrodperoxidase (HRP) -konjugeret gede-anti-kanin IgG (H + L) antistof og et HRP-konjugeret gede-anti-muse-IgG-antistof blev erhvervet fra Cell Signaling Technology. Et HRP-konjugeret ged anti-mus IgG-antistof blev erhvervet fra Millipore. Oprenset muse myelom-protein fra MOPC 21 (IgG, κ), blev 2-mercaptoethanol, og bovint serumalbumin (BSA) indkøbt fra Sigma-Aldrich. Tween-20 blev købt hos Wako Pure Chemicals (Japan), som var DMEM og Hams F12-medium. Penicillin G /streptomycin opløsning var fra Hyclone. Præcisions Plus Protein standarder Dual Color var fra Bio-Rad, og skummetmælk var fra Yukijirushi (Japan).

Celler Salg

ovarieceller fra kinesisk hamster (CHO) celler blev holdt i alfa modifikation af Eagles minimum essentielt medium (α-MEM) suppleret med 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin og 10% føtalt bovint serum (FBS).

Immunohistokemisk analyse af PCa prøver

Mellem 2005 og 2011 blev 250 PCA patienter behandlet med radikal prostatektomi ved Institut for urologi, Hirosaki University Graduate School of Medicine, Hirosaki, Japan. De tumorprøver blev formalinfikserede og indlejret i paraffin. Deparaffinerede prøver blev inkuberet med 5 ug /ml muse-anti-humant GCNT1 mAb (klon HU127), efterfulgt af inkubering med HRP-konjugeret gede-anti-muse-IgG-antistof (H + L; Millipore).

Immunoblotting analyse af post-DRE urinprøver

post-DRE urin blev fyldt i 50 ml koniske rør, straks fryses og opbevares ved -80 ° C indtil analyse. Post-DRE urinprøver blev indsamlet fra 35 patienter, som gennemgik radikal prostatektomi 2010-2013 ved Institut for urologi, Hirosaki University Graduate School of Medicine, Hirosaki, Japan. Frosne prøver blev optøet natten over ved 4 ° C og kortvarigt centrifugeret (5000 x

g

, 5 min) for at adskille supernatanten og faste stoffer. Halvtreds mikroliter af supernatanten blev spottet på en nitrocellulosemembran. Membranen fastgøres med post-DRE urin protein blev inkuberet med et anti-GCNT1 mAb (HU127), efterfulgt af et HRP-konjugeret sekundært antistof. Signaler, der repræsenterer GCNT1 blev enzymatisk påvist ved anvendelse af ECL Novex® Chemiluminescent substratreagens Kit (Life Technologies) og visualiseres i en ChemiDocXRS + System (Bio-Rad). Signalgivere middelværdier blev målt af Image Lab-software (Bio-Rad). Mængde GCNT1 ekspression blev beregnet på grundlag af signal middelværdier af rekombinant human GCNT1 (R 0,001 ng /ml) efter operationen blev registreret som gentagelser ved tiden nul. Opfølgende intervaller blev beregnet fra datoen for operationen til den sidste registrerede opfølgning (median, 48,4 måneder rækkevidde, 13.2-82.9 måneder).

Statistisk analyse

chi-squared test blev anvendt til at analysere associering GCNT1 status med kliniske og histopatologiske parametre. PSA-overlevelse blev vurderet ved anvendelse Kaplan-Meier-kurver og forskelle mellem grupper blev vurderet ved anvendelse af log-rank test. Vi brugte SPSS 21,0 softwarepakke (SPSS, Chicago, IL) for alle statistiske analyser. Optimal PSA og GCNT1 udtryk cut-off-værdier blev beregnet ved hjælp af følgende formel: cut-off = (1 – følsomhed)

2 + (1 – specificitet)

2 [29, 30]

Resultater

GCNT1 udtryk i PCa positivt korrelerer med kræft progression og PSA recidiv

for at bekræfte antistofspecificitet for GCNT1 blev en muse-anti-humant GCNT1 antistof oprenset fra hybridomsupernatant. Dosis-afhængig binding af muse-anti-humant GCNT1 mAb (klon HU127) til immobiliseret rekombinant humant GCNT1 (rhGCNT1) blev påvist under anvendelse HRP-konjugeret ged anti-mus IgG i et enzymbundet immunsorbentassay (ELISA) (S1A Fig). I fravær af immobiliseret rhGCNT1, binding intet antistof blev observeret (S1B Fig). I immunoblotting analyse HU127 anti-humant GCNT1 mAb bundet specifikt til rhGCNT1, men ikke til rhGCNT3 (S1c Fig). HU127 anti-humant GCNT1 mAb også påvises specifikt transient ekspression af GCNT1 i CHO-celler (S1D og S1E Fig). I tilfælde af HU127 anti-humant GCNT1 mAb forblandet med GCNT1 peptidantigen før inkubering på immunhistokemi og immunblotting blev GCNT1 signaler formindsket (S1F og S1G Fig). Resultaterne også foreslået, at HU127 anti-humant GCNT1 mAb holdt høj specificitet mod GCNT1.

For at vurdere betydningen af ​​GCNT1 i PCa progression blev PCA prøver analyseret ved immunhistokemi hjælp af HU127 anti-human GCNT1 mAb. Resultaterne viste, at GCNT1 svagt blev udtrykt i raske prostata kirtler. I modsætning hertil en vis procent af PCA celler udtrykte signifikante niveauer af GCNT1 (Fig 1B). Når sammenholdes med disse kriterier, PCa prøver fra 250 patienter udviste forskellige kliniske parametre (S1 tabel). GCNT1 udtryk i prostatektomi prøver positivt korreleret med den postoperative Gleason score. Over 80% af tumorprøver med ekstrakapsulær udvidelse af PCa (pT3 og pT4) udtrykt GCNT1, og GCNT1-positive tumorer var signifikant større end GCNT1-negative tumorer (S2 Table).

Som vist i fig 1C, GCNT1 -positive patienter var markant højere risiko for PSA recidiv efter radikal prostatektomi. Ifølge multivariat analyse, PSA niveauer, status margin, og GCNT1 udtryk i tumoren blev uafhængige risikofaktorer for PSA recidiv (tabel 1).

Påvisning af GCNT1 i post-DRE urin af PCA patienter tillader forudsigelse af ekstrakapsulær forlængelse af PCa

at etablere en semi-kvantitativ high-throughput skærm til GCNT1 udtryk, post-DRE urinprøver, der indeholder høje koncentrationer af PCA proteiner, blev analyseret af dot-blotting metode ved hjælp af anti-humant GCNT1 antistof (figur 2). Forudsigelse af ekstrakapsulær udvidelse af PCa er en god forudsigelse af PSA recidiv (S2 Fig). Den indledende PSA-niveau og GCNT1 udtryk var stærkt korreleret til extracapsular udvidelse af PCa i en logistisk regressionsanalyse (tabel 2). De optimale afskæringsværdier for PSA og GCNT1 ekspressionsniveauer blev bestemt til at være 7,52 ng /ml og 79,36 pg /mg af modtageren-operatør karakteristisk kurve for forudsigelse af ekstrakapsulær udvidelse af PCa hjælp af følgende formel: afskæring = (1 – følsomhed)

2 + (1 – specificitet)

2 [29, 30] (fig 3A-3C). Baseret på disse klinisk-patologiske parametre, etablerede vi efter tilbagefald risiko lagdelinger: dobbelt negativ-risiko (PSA 7,52 ng /mL, GCNT1 79,36 pg /mg), enkelt positiv-risiko (PSA 7,52 ng /mL eller GCNT1 79,36 pg /mg) og dobbelt positiv-risiko (PSA 7,52 ng /mL og GCNT1 79,36 pg /mg). Over 90% af dobbelt patienter positiv risiko havde extracapsular forlængelse af PCa i denne risiko lagdeling (Fig 3D). Disse resultater viser, at en høj PSA koncentration og GCNT1 udtryk i post-DRE urin er gode prædiktorer for extracapsular udvidelse af PSA.

(A) Post-digital rektal undersøgelse urinprøver blev indsamlet og (B) centrifugeres. (C) Supernatanter blev opsamlet og plettet på en nitrocellulosemembran. (D) Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) blev påvist ved et anti-GCNT1 monoklonalt antistof, efterfulgt af en peberrodsperoxidase (HRP) -konjugeret antistof. (E) Efter behandling med et chemiluminescens reagens blev GCNT1 signal registreres af et ChemiDoc + systemet.

(A) Prostata-specifikt antigen (PSA) koncentration og (B) Core2 β-1,6 –

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) ekspressionsniveauerne var signifikant højere i prostatakræft (PCA) patienter med extracapsular udvidelse end hos patienter med orgel-begrænset sygdom. (C) Modtager-operatør karakteristik analyse af PSA og GCNT1 afslørede, at arealet under kurven af ​​PSA var 0,7455 og GCNT1 var 0,7614. (D) Risk lagdeling blev etableret ved hjælp af PSA og GCNT1 at forudsige udfaldet af lokale PSA. Dobbelt negativ (DN) -risk (PSA 7,52 ng /mL, GCNT1 79,36 pg /mg), single positive (SP) -risk (PSA 7,52 ng /mL eller GCNT1 79,36 pg /mg) og dobbelt positive (DP) -risk (PSA 7,52 ng /mL og GCNT1 79,36 pg /mg) patienter sammenlignes

diskussion

Afvigende glycosylering af celle. overflade glycoproteiner spiller en vigtig rolle i kræft initiering, proliferation, invasion, og metastase [31-33]. Biosyntese af oligosaccharider på glycoproteiner udføres i koncert af flere glycosyltransferaser. Den funktionelle terminale struktur, såsom sialy lewis X (sLeX) og sialyl Lewis A (slea) dannes også ved glycosyltransferaser [16, 34]. Den sLeX og Slea, som i vid udstrækning var kendt ligand af kulhydrat-bindende proteiner, er tæt knyttet til metastaser [35]. Ikke kun SLE-antigener, men også interne strukturer, især GlcNAc beta1,6 forgrening strukturer og polylactosamines, er tæt knyttet til kræft malignitet [22, 31]. GCNT1 er en af ​​de glycosyltransferaser, der danner kernen 2

O

-glycans på overfladen af ​​lymfocytter og forskellige cancerceller [18, 24, 36, 37]. Tidligere blev det rapporteret, at GCNT1 ekspression er associeret med metastatiske potentiale af colorektal cancer [22], lungecancer [23], testikelkræft [24] og PCa [18]. Det er også blevet rapporteret, at GCNT1-udtrykkende cancere kan undslippe værtens immunrespons [25, 38], især fra værten naturlige dræberceller, som binder til galectin-3 på kerne 2-forgrenende

O

-glycans [25 , 38].

Denne undersøgelse etableret et mAb mod GCNT1 og vurderet sit potentiale som en indikator for PCa aggressivitet. Immunhistokemisk analyse af radikal prostatektomi prøver viste, at GCNT1 udtryk på PCA celler tæt knyttet til extracapsular forlængelse af PCa (figur 1). Desuden patienter med GCNT1-positive PCa udstillet værre PSA overlevelse sammenlignet med patienter med GCNT1-negative tumorer (Fig 1). Disse resultater indikerer, at GCNT1 ekspression stærkt korrelerer med malign potentiale PSA.

Selvom immunohistokemi billede mange oplysninger om proteinekspression i PCa, ikke analysen var kvantitativ. Brug af post-DRE urin etablerede vi en semi-kvantitativ og high-throughput screening for malignt potentiale PCa (fig 2 og 3). Nylige undersøgelser rapporteret, at prostatakræft antigen 3 og en TMPRSS2: ERG fusion var to af de mest nyttige indikatorer for PSA. Disse markører blev fokuseret på potentielle PCa screening og tidlig påvisning af PCa [39]. Prostatacancer antigen 3 og TMPRSS2: ERG fusion næsten rapporterede PCR-baseret undersøgelse og ikke præsentere tilstrækkelige biologiske beviser for PCa aggressivitet. Vi rapporterede også, at påvisning af afvigende glycosylering af PSA forbedret PCa screening, men ikke forudsige PCa aggressivitet [40]. I denne undersøgelse blev GCNT1 ekspression i post-DRE urin korreleret med ekstrakapsulær udvidelse af PSA. Desuden kunne en kombination af initial PSA koncentration og GCNT1 udtryk forudsige extracapsular forlængelse i over 90% af PSA. Derfor GCNT1 påvisning i post-DRE urin forbedret forudsigelse af PCa invasiv.

Fordi GCNT1 er ikke en kræft-specifikt protein, dens udtryk var uegnet til PCa screening. Derfor kan en kombination af de indberettede PCA screeningsmarkører og GCNT1 forbedre udviklingen af ​​terapeutiske strategier PSA. Selvom mekanismen for GCNT1-drevne regulering i kræft progression er dårligt forstået, vores undersøgelse viser, at GCNT1 kan være en indikator for den maligne potentiale PSA. Yderligere klinisk forskning er nødvendig for at bestemme nytten af ​​GCNT1 som biomarkør for PSA.

Støtte Information

S1 Fig. Fremstilling af et anti-humant kerne 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 monoklonalt antistof.

(A) Binding af Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) -specifikke antistoffer. Kultursupernatanter blev fremstillet fra HU127 hybridomceller. Binding af anti-humant GCNT1 monoklonalt antistof (mAb, blå linje) eller IgG-myelom MOPC 21 (kontrol, orange linje) til immobiliseret rekombinant humant GCNT1 i en koncentrationsafhængig måde (abscisse) blev påvist under anvendelse af et peberrodperoxidase (HRP) – konjugeret anti-muse-IgG-antistof. Fejlsøjler angiver standardafvigelsen for tredobbelte målinger. Koncentrationer af antistof i supernatanterne blev bestemt ved anvendelse af en sandwich-ELISA. Resultaterne er repræsentative for to eksperimenter. (B) Anti-humant GCNT1 mAb anerkendt immobiliseret rekombinant human GCNT1, men ikke BSA. (C) For at bekræfte anti-humant GCNT1 mAb-specificitet, rekombinant humant GCNT1 og GCNT3 blev analyseret under anvendelse af elektroforese (SDS-PAGE) og overført til en PVDF-membran. Den anti-humant GCNT1 mAb specifikt genkendt GCNT1, men ikke GCNT3. (D) immunblotting og (E) immunocytokemi afslørede det anti-humane GCNT1 mAb også specifikt anerkendt GCNT1 i GCNT1-overeksprimeres CHO-celler. Peptid inhiberingsassay for (F) IHC og (G) dot-blotting metoder afslørede GCNT1 signaler blev hæmmet af GCNT1 antigenpeptid forbehandlet anti-humant GCNT1 mAb

doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s001

(TIF)

S2 fig. Extracapsular udvidelse af prostatakræft var en af ​​de stærk indikator for prostata-specifikt antigen tilbagefald.

Prostataspecifikt antigen-fri overlevelse perioder blev sammenlignet mellem orgel-begrænset sygdom (pT2) og extracapsular udvidelse (pT3 og pT4). Overlevelse blev analyseret ved Kaplan-Meier kurver

doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s002

(EPS)

S1 fil. Supplerende materialer og metoder

doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s003

(DOCX)

S1 Table. . Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 status og patientdata

doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s004

(DOCX)

S2 Table. . Core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 status og patologiske parametre

doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s005

(DOCX)

S3 Table. Patient data for post-digital rektal undersøgelse urinprøver

doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s006

(DOCX)

anerkendelser

Forfatterne takker Dr. Shigeru Tsuboi for nyttige diskussioner.