PLoS ONE: Forhøjede niveauer af komplement aktivering Product C4d i bronkial Væsker til diagnosticering af Lung Cancer

Abstrakt

Molekylære markører i bronchiale væsker kan bidrage til diagnosticering af lungekræft. Vi har tidligere observeret en betydelig forøgelse af C4d-holdige komplement nedbrydning fragmenter i bronchoalveolær lavage (BAL) supernatanter fra patienter med lungecancer i en kohorte af 50 tilfælde og 22 kontroller (CUN kohorte). Den foreliggende undersøgelse er designet til at bestemme den diagnostiske udførelsen af ​​disse komplement fragmenter (i det følgende samlet benævnt som C4d) i bronkierne væsker. C4d niveauer blev bestemt i BAL supernatanter fra to uafhængige kohorter: CU kohorte (25 tilfælde og 26 kontroller) og HUVR kohorten (60 tilfælde og 98 kontroller). En række spontane spytprøver fra 68 patienter med lungekræft og 10 kontroller blev også brugt (LCCCIO kohorte). Totalt indhold af protein, supplerer C4, supplerer C5a, og CYFRA 21-1 blev også målt i alle årgange. C4d niveauer blev øget væsentligt i BAL-prøver fra patienter med lungecancer. Arealet under ROC-kurven var 0,82 (95% CI = 0,71-0,94) og 0,67 (95% CI = 0,58 til 0,76) til CU og HUVR kohorter, hhv. Desuden, i modsætning til de andre markører, C4d niveauer i BAL-prøver var meget konsekvent på tværs af CUN, CU og HUVR kohorter. Interessant, C4d test markant forøget følsomhed bronkoskopi i de to kohorter, hvor cytologiske data var til rådighed (CUN og HUVR kohorter). Endelig i LCCCIO kohorten, C4d niveauer var højere i sputum supernatanter fra patienter med lungecancer (areal under ROC-kurven: 0,7; 95% CI = 0,56-0,83). Afslutningsvis er C4d konsekvent forhøjet i bronchiale væsker fra patienter med lungecancer og kan anvendes til at forbedre diagnosticering af sygdommen

Henvisning:. Ajona D, Razquin C, Pastor MD, Pajares MJ, Garcia J, Cardenal F, et al. (2015) forhøjede niveauer af komplementsystemet Activation Product C4d i bronkial Væsker til diagnosticering af lungekræft. PLoS ONE 10 (3): e0119878. doi: 10,1371 /journal.pone.0119878

Academic Redaktør: Cordula M. Stover, University of Leicester, England

Modtaget: 20. november 2014 Accepteret: 2 februar 2015; Udgivet: 23 marts 2015

Copyright: © 2015 Ajona et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for de sagsakter

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af “UTE projekt CIMA”, den spanske regering (Red Tematica de Investigación Cooperativa en Cancer RD12 /0036/0028, RD12 /0036/0040, RD12 /0036/0045, og RD12 /0036/0062, og Fondo de Investigación Sanitaria-Fondo Europeo de Desarrollo Regional (EFRU) PI08 /1156, CD09 /00148, PI10 /01652, PI10 /00166, PI11 /00618, PI11 /02.688, PI13 /00806, og PI14 /01686), og det Europæiske Fællesskabs syvende rammeprogram (SUNDHED-F2-2010-258677-CURELUNG). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Jeg har læst tidsskriftets politik og forfatterne af dette manuskript har følgende konkurrerende interesser : En foreløbig patentansøgning er fyldt af Digna Biotech for Drs. Ajona, Pajares, Montuenga, og Pio som opfindere af “Nye lungecancer molekylære markører.” (EU foreløbig patentansøgning nr. EP12382113.) Dette ændrer ikke forfatternes overholdelse PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Lungekræft er den hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan [1]. Den samlede fem-årige overlevelsesrate for lungekræft er ca. 15-20%, og mindre end 5% i metastatiske tilfælde [2]. En af årsagerne til denne dystre resultat er manglen på effektive teknikker til tidlig diagnosticering af sygdommen. Øjeblikket, lungecancer diagnose involverer kombinationen af ​​radiologiske og histologiske analyser af læsioner. Fleksibel bronkoskopi udgør en relativt ikke-invasiv indledende diagnostisk test hos individer med mistanke, og er det primære diagnostiske værktøj til patienter med centralt placeret lungekræft. Bronkoskopiske teknikker til diagnosticering af lungecancer omfatter cytologisk undersøgelse af prøver fra bronkial biopsi, bronkial børste, bronkial vask, og bronchoalveolær lavage (BAL) [3, 4]. Specificitet af cytologi af bronkoskopisk materiale er 100%; dog følsomhed er fortsat lav, især i mere perifere læsioner, hvor der rutinemæssigt behov for mere invasive diagnostiske procedurer [5]. Således er der et klinisk behov for adjungerede markører, der kan forbedre følsomheden af ​​diagnostiske procedurer lungekræft.

Flere biomarkører detekterbare i bronchiale væsker fra patienter med lungecancer er blevet foreslået [6, 7, 8, 9, 10 , 11, 12]. Vi har for nylig vist, at lungecancerceller effektivt aktivere den klassiske omsætningsvej af komplement. Som følge heraf, C4d, et stabilt split produkt af denne vej, er fundet forhøjet i plasma og BAL-prøver fra patienter med lungecancer [13]. Formålet med den foreliggende undersøgelse var at validere vores tidligere observation i uafhængige case-kontrol kohorter. Vi har også til formål at sammenligne den diagnostiske ydeevne C4d med andre potentielle diagnostiske biomarkører: CYFRA 21-1, total protein, C4, og C5a. CYFRA 21-1 har længe været foreslået som en lungekræft biomarkør i bronchiale væsker [7, 14], er plasmaproteiner steg i BAL fluider fra patienter med lungecancer [15], C4 er en rigelig plasmaprotein hvorfra C4d frembringes efter komplement aktivering [16], og C5a er et aktivt komplement fragment steg i plasmaprøver fra patienter med ikke-småcellet lungekræft [17]. Vores resultater antyder, at bestemmelsen af ​​C4d i luftvejs fluider udkonkurrerer de andre markører og kan være nyttige til diagnostiske oparbejdning af patienter med lungecancer.

Materialer og metoder Salg

Kliniske prøver

undersøgelsen omfattede tre kohorter af BAL-prøver og en af ​​spytprøver. BAL væsker blev opnået fra individer, der gennemgår diagnostisk bronkoskopi og opbevaret ved -80 ° C. Proceduren for BAL samling er tidligere blevet beskrevet [15]. Den kohorte fra Clinica Universidad de Navarra (CUN) inkluderet BAL-prøver fra 50 patienter med lunge maligniteter og 22 patienter med ikke-maligne lungesygdomme. Flere detaljer om denne kohorte er tidligere blevet beskrevet [15]. Den kohorte fra Charité-Universitätsmedizin (CU) inkluderet BAL prøver fra 25 lungekræftpatienter og 26 kontrolpersoner. Disse kontrolpersoner undergik bronkoskopi for ikke-maligne luftvejssygdomme såsom infektion, godartet luftveje stenose eller sarcoidosis. Ingen yderligere data var tilgængelige fra denne kohorte. Den tredje kohorte blev opnået på hospitalet Universitario Virgen del Rocio (HUVR) og omfattede BAL væsker fra 60 lungekræftpatienter og 98 kontrolpatienter. Kendetegnene for disse patienter er vist i tabel 1. bronkoskopi var påkrævet i kontrolpatienter grund af tilstedeværelsen af ​​hæmoptyse eller en pulmonal læsion i brystet-x ray eller CT-scanning. Endelig lungekræft Klinik catalanske Institut for Onkologi (LCCCIO) kohorte af spytprøver omfattede 68 prøver fra lungekræftpatienter og 10 prøver fra raske individer. Prøver blev opsamlet efter spontan expectoration, fortyndet i 10 ml saltvand, ekstensivt hvirvlet og opbevaret ved -80 ° C. Forsøgsmedarbejderne protokoller blev udført i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen, blev godkendt af Research Ethics Committee ved universitetet i Navarra (Institutional Review Board # 015-2014), og alle patienter gav skriftligt informeret samtykke. Lungetumorer blev klassificeret ved hjælp af WHO 2004 klassifikationen og det internationale system for Iscenesættelse Lung Cancer [18, 19].

Marker målinger

C4d-holdige fragmenter blev målt ved en enzym- linked immunosorbent assay (Quidel). Denne analyse anerkender alle C4d-holdige fragmenter af aktiveret C4 (C4b, iC4b og /eller C4d), der tilsammen omtales i dette dokument som C4d. Kvantitative enzymmaerket assays blev også anvendt til bestemmelser af C4 (Assaypro), C5a (R 0,001). Arealet under ROC-kurven var 0,73 (95% CI = 0,61-0,84; p = 0,002). Denne analyse blev udført på BAL-prøver fra en kohorte af patienter heri betegnet CUN kohorte. Kendetegnene for disse patienter er allerede blevet offentliggjort [15]. I den foreliggende undersøgelse, søgte vi at validere dette resultat ved hjælp af to uafhængige kohorter af BAL-prøver: den HUVR og Cu kohorter. I sidstnævnte kohorte, C4d niveauer i lungekræft prøver og kontroller var 0,19 (0,11-0,84) og 0,11 (0,11-0,13) pg /ml (P 0,001;. Figur 1A). Arealet under ROC-kurven var 0,82 (95% CI = 0,71-0,94; P 0,001). I HUVR kohorte, C4d niveauer i kræft gruppen var 0,18 (0,15-0,26) pg /ml, og i kontrolgruppen var 0,16 (0,14 til 0,18) pg /ml (P 0,001;. Figur 1B). Arealet under ROC-kurven var 0,67 (95% CI = 0,58-0,76; P 0,001). I denne kohorte, C4d niveauer tendens til at være højere i BAL væsker fra småcellet lungekræft (SCLC) patienter eller tidligere rygere, selv om forskellene ikke nåede statistisk signifikans (tabel 1). I overensstemmelse med denne observation, i vores tidligere undersøgelse (CUN kohorte) fandt vi en signifikant stigning af C4d i tidligere rygere i kræft gruppe og en tendens til højere C4d niveauer hos patienter med SCLC [13].

A) C4d niveauer og ROC-kurven fra BAL supernatanter af CU kohorte. B) C4d niveauer og ROC-kurven fra BAL prøver af HUVR kohorte. Forskelle mellem grupper blev vurderet ved anvendelse af Mann-Whitney U test. Arealerne under ROC kurver (AUC) og deres tilhørende P-værdier er angivet.

Ydelse sammenligning af C4d med andre molekylære markører

For at vurdere nytten af ​​C4d som en diagnostisk biomarkør i BAL væsker, vi sammenlignet dens præstationer med andre potentielle diagnostiske molekylære markører. Til dette formål, vi målte niveauer af CYFRA 21-1, C4 og C5a i CUN, CU, og HUVR kohorter. Bortset CYFRA 21-1 og C5a i CUN kohorte, og for C5a i HUVR kohorte, blev niveauet for alle markørerne steget betydeligt i patienter med lungecancer (tabel 2).

Ophobning af plasmaproteiner i tumoren interstitium er et fælles træk af faste tumorer [20]. Faktisk kan plasmaproteiner findes i BAL fluider fra lungekræftpatienter [15]. Efter aftale med denne iagttagelse, i de tre kohorter, niveauerne af totale proteiner blev fundet forøget i BAL væsker fra patienter med lungecancer i forhold til kontroller (tabel 2). For at vurdere muligheden for, at C4d, CYFRA 21-1, blev C4, og C5a findes i BAL-prøver som en simpel konsekvens af deres ekstravasation af blod, vi analyserede berigelse af disse markører i BAL-prøver fra patienter med lungecancer med hensyn til blod ved hjælp totale proteinindhold som reference (tabel 3). Meget tilsvarende fordeling af C4 blev fundet i BAL-prøver og blod, hvilket antyder, at tilstedeværelsen af ​​denne komplement protein i tumormikromiljøet skyldes primært dets ekstravasation. Men CYFRA 21-1, C4d, og C5a viste en markant højere andel i BAL væsker, hvilket tyder på en lokal produktion af disse molekyler i tumor mikromiljø.

En faktor, der har stor indflydelse ydeevne og anvendelighed af en diagnostisk markør er dens sammenhæng på tværs af forskellige patientgrupper. Vi sammenlignede derfor niveauerne af de fire molekylære markører på tværs af de tre uafhængige kohorter. Som vist i fig. 2, blev der observeret signifikante forskelle blandt patienter med lungecancer i CUN, CU, og HUVR kohorter for CYFRA 21-1, C5a, C4, og totalt protein (P 0,001, P 0,001, P 0,001 og P = 0,029, henholdsvis). Vi observerede højere niveauer af disse markører i CUN kohorten, selv om årsagen til denne forskel er uklar. Ikke desto mindre er niveauerne af C4d var bemærkelsesværdigt ens på tværs af tre serier med ingen signifikante forskelle mellem dem (P = 0,922). Konsistensen af ​​C4d niveauer tilladt os at foreslå C4d afskæringsværdier med tilfredsstillende sensitivitet og specificitet på tværs af de tre grupper. For eksempel med en cut-off værdi på 0,18 ug /ml, følsomheden ved diagnosen af ​​lungekræft var 62%, 52% og 53%, med en specificitet på 73% (odds ratio (OR) = 4,35, 95 % CI = 1,45-13,05, P = 0,009), 100%, og 80% (OR = 4,46, 95% CI = 2,20-9,03, P 0,001) i CUN, CU, og HUVR kohorter, hhv. Når samle de tre studier sammen, følsomheden var 56% og specificiteten var 82% (OR = 5,94, 95% CI = 3,45-10,24, P 0,001). Sammenfattende konkluderer vi, at C4d er produceret inden for lunge tumor mikromiljø, hvilket resulterer i en konsekvent stigning af denne molekyle i BAL væsker fra patienter med lungecancer.

A) C4d (data fra CUN kohorten blev offentliggjort tidligere [ ,,,0],13]). B) CYFRA 21-1. C) C5a. D) C4. E) Samlet protein. P-værdier blev beregnet ved anvendelse af Kruskal-Wallis test.

Bestemmelse af C4d i BAL supernatanter som et supplement til cytologi for lungekræft diagnose

Vi næste vurderede kapacitet C4d vilje til at forbedre den diagnostiske ydeevne cytologisk undersøgelse af bronkoskopisk materiale, en teknik med høj specificitet men lav følsomhed. Til dette formål brugte vi de to kohorter, hvorfra vi havde cytologi data: CUN og HUVR kohorter. I CUN kohorte, cytologisk undersøgelse af BAL-prøver gav en specificitet på 100% og en sensitivitet på 32%. Undersøgelse af diagnostiske værdi af de oplysninger, som C4d, fandt vi, at denne markør blev øget betydeligt i både cytologisk positive og negative BAL supernatanter fra patienter med lungecancer (Fig. 3). Niveauerne af C4d i kontrolgruppen var 0,11 (0,11-0,23) pg /ml og steg til 0,33 (0,23 til 0,5) pg /ml i cytologisk positive prøver (P 0,001), og til 0,24 (0,11 til 0,62) ug /ml i cytologisk negative prøver (P = 0,018). Arealerne under ROC kurver var 0,85 (95% CI = 0,71-0,98; P 0,001) og 0,67 (95% CI = ,53-,81; P = 0,033), hhv. Den diagnostiske ydeevne C4d var bedre i cytologisk positive BAL-prøver, selv om der blev fundet nogen signifikante forskelle mellem disse to grupper (P = 0,187). Dette resultat tyder på, at bestemmelsen af ​​C4d-niveauer kan være nyttig, selv i tilfælde, hvor den cytologiske undersøgelse af BAL væsker er rapporteret som negativ. Faktisk anvendelse af den tidligere etablerede afskæringsværdi (0,18 ug /ml), 18 ud af 34 lungekræft rapporteret som negative ved cytologisk undersøgelse blev klassificeret som positive af C4d bestemmelse, forøgelse af følsomheden ved diagnosen af ​​lungekræft fra 32% til 68%, med en specificitet på 73%. Denne observation blev valideret med analysen af ​​HUVR kohorte. Cytologisk undersøgelse i denne kohorte gav en følsomhed på 32% og en specificitet på 100%. Indholdet af C4d i BAL supernatanterne steg betydeligt i både cytologisk positive og negative lungekræft BAL supernatanter sammenlignet med kontrolindivider (fig. 4). C4d niveauer i kontrolgruppen var 0,16 (0,14-0,18) pg /ml, og steg til 0,22 (0,16 til 0,40) pg /ml i cytologisk positive prøver (P 0,001), og til 0,18 (0,15-0,23) pg /ml i cytologisk negative prøver (P = 0,017). Arealerne under ROC kurver var 0,76 (95% CI = 0,63-0,88; P 0,001) og 0,63 (95% CI = 0,52-0,74; P = 0,011), hhv. Der blev ikke observeret nogen signifikante forskelle i C4d niveauer mellem cytologisk positive og negative BAL-prøver (P = 0,123). Med en cut-off værdi på 0,18 ug /ml, 19 ud af 41 kræftformer rapporteret som negative ved cytologi blev klassificeret som positive af C4d, forøgelse af følsomheden ved diagnosen af ​​lungekræft fra 32% til 63%, med en specificitet på 80 %.

p-værdier blev beregnet under anvendelse af Mann-Whitney U test. Arealerne under ROC-kurver (AUC) og deres tilhørende P-værdier er vist.

P-værdier blev beregnet under anvendelse af Mann-Whitney U test. Arealerne under ROC kurver (AUC) og deres tilhørende P-værdier er angivet.

C4d niveauer i sputum supernatanter fra lungekræftpatienter

Diagnose af lungekræft ved undersøgelse af spyt er et attraktivt alternativ til bronkoskopi. For at foreløbige vurdere nytten af ​​C4d som diagnostisk markør i dette biologiske materiale, blev C4d-niveauer bestemt i spontane spytprøver fra lungecancerpatienter (n = 68) fra LCCCIO kohorte. C4d niveauer varierede fra 0,04 til 0,56 ug /ml med en median (IQR) på 0,06 (0,06-0,07) ug /ml. Ingen signifikante associationer blev fundet mellem niveauerne af markøren og klinisk-patologiske data, såsom køn, rygning status, histologi (NSCLC vs. SCLC) eller trin (I-III vs. IV). Endelig har vi sammenlignet niveauerne af C4d i disse sputum prøver med niveauerne i 10 raske kontroller. Som vist i fig. 5, C4d niveauet var lidt højere i sputum supernatanter fra patienter med lungekræft end i dem fra kontrolpersoner (P = 0,047). Arealet under ROC-kurven var 0,7 (95% CI = 0,56-0,83, P = 0,047). Med en 0,06 ug /ml cut-off, følsomhed og specificitet var henholdsvis 54% og 80%, hhv. Afslutningsvis C4d niveauer er signifikant højere i spontane spytprøver fra lungecancerpatienter end i disse prøver fra cancerpatienter-fri fag.

P-værdier blev beregnet under anvendelse af Mann-Whitney U test. Arealet under ROC-kurven (AUC) og dens tilhørende P-værdi er angivet.

Diskussion

I denne undersøgelse viser vi, at C4d-holdige komplement nedbrydning fragmenter (samlet benævnt som C4d) er forhøjet i bronchiale væsker fra patienter med lungecancer og deres beslutsomhed klarer sig bedre end tidligere foreslåede protein biomarkører for lungekræft diagnose. Vores konklusioner er understøttet af fire store bemærkninger: i) vi har valideret, i to uafhængige kohorter, stigningen i C4d tidligere observeret i en kohorte af BAL-prøver fra lungecancerpatienter [13]; ii) blev der ikke observeret forskelle i niveauerne af markøren tværs BAL-prøver fra lungekræftpatienter af tre uafhængige kohorter; iii) C4d kvantificering forbedret følsomhed cytologisk undersøgelse af BAL fluider; og iv) C4d niveauer blev let øget i sputum supernatanter fra patienter med lungecancer.

Indtil videre til den indsats identificere klinisk værdifulde diagnostiske markører for lungekræft har enten mislykkedes eller haft begrænset succes. Dette kan forklares delvist af den lave grad af reproducerbarhed tværs uafhængige undersøgelser på grund af den høje genetiske og fænotypiske heterogenitet lungetumorer [21]. For at overvinde denne begrænsning, er det blevet foreslået, at immunrelaterede markører kan være mere homogent og følsom end cancer-afledte markører [22]. I denne forstand under neoplastisk transformation, lunge tumorceller fra forskellige histologiske undertyper kan genkendes af komplementsystemet [17], [23, 24]. Komplement er en vigtig del af det medfødte immunreaktion, der forsvarer værten mod ikke-selv elementer. Interessant, på grund af den forhøjede ekspression af komplement inhibitorer, lungecancerceller styre komplementaktivering og er modstandsdygtige over for komplement-medieret cytotoksicitet [23, 24, 25, 26, 27]. Denne styrede immunrespons kan resultere i en permanent frigivelse af komplement-fragmenter til tumormikromiljøet, hvilket ville forklare hvorfor C4d, et fragment stammer fra komplement C4, er forøget i biologiske væsker fra patienter med lungecancer [13]. Interessant, observerede vi bemærkelsesværdigt lignende koncentrationer af C4d tværs BAL-prøver fra de tre undersøgte kohorter. Det er et relevant punkt, da standardisering af målinger mellem forskellige studier er et stort problem i biomarkør opdagelse [28, 29]. I forhold til den primære kilde til C4d, dette molekyle er et proteolytisk fragment af komplement C4 genereret efter aktivering af det klassiske komplementforløb [16]. Derfor vil den mest sandsynlige forklaring på sin tilstedeværelse i tumor mikromiljø være dens lokale produktion efter aktivering af denne kanoniske vej. Men vi kan ikke udelukke andre mekanismer. For eksempel kan exoproteaser til stede i biologiske væsker fra kræftpatienter generere peptider fra komplementproteiner [30]. På den anden side, selv om C4d niveauer også øges i plasma fra patienter med lungecancer [13], niveauerne af markøren i bronchiale væsker er mærkbart højere end forventet af ekstravasation, som favoriserer den lokale oprindelse C4d.

Vi fandt også, at C4d klaret sig bedre end andre komplement-relaterede markører, C4 og C5a, eller den foreslåede tumormarkør CYFRA 21-1. I tilfældet med C4, precursormolekylet for C4d, konkluderer vi, at dets tilstedeværelse i luftvejs væsker er for det meste på grund af sin ekstravasation fra blod. Tilsvarende forøgede niveauer af andre ekstravaserede plasmaproteiner, såsom komplement faktor H eller albumin, blev tidligere observeret i bronchiale fluider fra patienter med lungecancer [15]. På den anden side, vore data indikerer en lokal produktion af C5a, et anaphylatoxin der kan fremstilles ved lungecancerceller [17]. Men denne markør blev fundet, steget betydeligt i BAL-prøver fra lungecancerpatienter i kun én af de tre aldersgrupper. Lignende resultater blev observeret med CYFRA 21-1, en af ​​de mest undersøgte lungekræft biomarkører i litteraturen [7, 14]. Vores data foreslog en lokal produktion af CYFRA 21-1 inden tumor mikromiljø, men dens niveauer på tværs af kohorter var dårligt konsekvent og forskelle mellem maligne og ikke-maligne prøver blev ikke fundet i en af ​​de serier. Disse observationer antyder, at C5a og CYFRA 21-1 produceres i nærvær af lungetumorer, men også i nærvær af ikke-maligne inflammatoriske tilstande er fælles for patienter, der gennemgår bronkoskopi.

I betragtning af den relativt lave følsomhed af cytologiske undersøgelse af bronkoskopiske prøver, er mere invasive diagnostiske tests normalt behov. I denne sammenhæng til en diagnostisk procedure anvendelig afgøre, hvilke patienter med mistanke om lungekræft, men negative bronchoscopies, bør gennemgå yderligere diagnostisk test ville være klinisk relevant. I denne undersøgelse tilsætning af C4d kvantificering til den diagnostiske procedure øget følsomhed bronkoskopi, selvom reduceret sin specificitet. Reduktionen i specificitet kan begrænse dens vedtagelse som en rutinemæssig klinisk diagnostisk værktøj. Men konsekvensen af ​​markøren tværs uafhængige kohorter af bronchiale væskeprøver og dens bedre ydeevne end tidligere foreslåede biomarkører fremme integrationen af ​​C4d i et panel af biomarkører til at supplere cytologi i diagnosticering af sygdommen. Dette er et vigtigt punkt, da nye paneler af biomarkører såsom autoantistoffer, microRNA eller proteomiske klassificører har givet lovende resultater i blodprøver fra lungekræft kliniske kohorter [31, 32, 33]. Desuden vores data tyder på, at C4d evaluering i ikke-invasive spytprøver også kan være et nyttigt redskab for lungekræft diagnose. Denne observation, baseret på et lille kohorte af spytprøver, fortjener yderligere evaluering i større serier ved hjælp af mere klinisk relevante kontroller med ikke-malign lungesygdom. Andre aspekter, der skal afklares, er udførelsen af ​​analysen i de forskellige histologiske undertyper, samt indflydelse af rygning, og specifikke ikke-maligne luftvejssygdomme og behandlinger på C4d niveauer. På nuværende tidspunkt kan vi konkludere, at C4d niveauer konsekvent steget i bronchiale væsker fra patienter med lungecancer og kan supplere cytologi i diagnosticering af sygdommen.

Tak

Vi takker Amaya Lavin, usua Montes og Ana Remirez til teknisk bistand.