PLoS ONE: Målretning kræft-relaterede Inflammation: kinesisk urtemedicin Forhindrer Epithelial-til-Mesenchymale Transition i kræft i bugspytkirtlen

Abstrakt

Kræft i bugspytkirtlen er en næsten universelt dødelig sygdom som følge af tidlig invasion af tilstødende strukturer og metastase og manglen på en effektiv behandling modalitet. Vores tidligere undersøgelser har vist, at Qingyihuaji formlen (QYHJ), en syv-urt kinesisk medicin formel, havde betydelige anti-cancer effekter i bugspytkirtelkræft. Her har vi undersøgt virkningerne af QYHJ på bugspytkirtelkræft celleinvasion og metastase og potentialet tilknyttede mekanisme (r). Vi fandt, at QYHJ hæmmede både tumorvækst og metastase i nøgne mus med humane kræft i bugspytkirtlen celle implanteret. Yderligere undersøgelser indikerede, at QYHJ inhiberede epitel-til-mesenchymal overgang (EMT), som er karakteriseret ved forøget E-cadherin ekspression og nedsat vimentin, N-cadherin og Slug ekspression. Interleukin 6 (IL-6), en pro-inflammatorisk cytokin der hovedsagelig produceres af makrofager, kan fremme cancercelle EMT og invasion. I modsætning hertil behandling med QYHJ inhiberede cancerrelateret inflammation i tumorer ved at nedsætte infiltration af tumorassocierede makrofager og IL-6-produktion, hvilket således forhindrer celleinvasion og metastase. Disse resultater tydede på, at kinesisk urtemedicin QYHJ kunne hæmme kræft i bugspytkirtlen celle invasion og metastase dels ved at vende tumor-støtte betændelse

Henvisning:. Zhang J, Wang P, Ouyang H, Yin J, Liu A, Ma C, et al. (2013) Målretning kræft-relaterede Inflammation: kinesisk urtemedicin Forhindrer Epithelial-til-Mesenchymale Transition i kræft i bugspytkirtlen. PLoS ONE 8 (7): e70334. doi: 10,1371 /journal.pone.0070334

Redaktør: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Italien

Modtaget: Februar 3, 2013; Accepteret: 18 juni 2013; Udgivet: 29 juli 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af National Science Foundation of China (81001061, 81072942, 81173461); Shanghai Nature Science Fund, Shanghai, Kina (09ZR1406800); Ph.d.-programmer Foundation of Undervisningsministeriet i Kina (20090071120076); Shanghai Videnskab og Teknologi Udvalg Rising-Star Program (11QA1401300); og Medicinsk Talents Training Program of Health Bureau of Shanghai (XYQ2011008). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i bugspytkirtlen er stadig en af ​​de mest vanskelige kræftformer at behandle [1]. Den dårlige prognose for patienter med kræft i bugspytkirtlen skyldes i høj grad tidlig lokal invasion af tilstødende strukturer og fjernmetastaser [2]. De fleste patienter med kræft i bugspytkirtlen er diagnosticeret med metastatisk sygdom, og kun 10% til 20% af patienter med lokaliseret sygdom resektabel på diagnosetidspunktet [3]. Gemcitabin monoterapi eller kombinationsbehandling med Erlotinib er blevet standard kemoterapi til behandling af fremskreden kræft i bugspytkirtlen; dog median overlevelse er 5-6 måneder [4]. Således er det vigtigt at finde en terapeutisk fremgangsmåde, der hjælper i forebyggelsen og /eller behandlingen af ​​pancreascancer metastase.

Epithelial-til-mesenchymal overgang (EMT), processen med celler mister deres epitel fænotype og erhverve en vandrende mesenchymale fænotype, er blevet accepteret at spille en vigtig rolle i cancer metastaser i flere humane maligniteter, herunder kræft i bugspytkirtlen [5], [6]. EMT har vist sig at have en negativ indvirkning på samlet overlevelse af patienter med kræft i bugspytkirtlen [7]. Endvidere EMT bidrager til medikamentresistens i pancreascancer [8]. Således kan hæmning af EMT i bugspytkirtelkræftceller fremme udviklingen af ​​en effektiv strategi til forebyggelse og /eller behandling af metastatisk kræft i bugspytkirtlen.

Stigende tyder på, at nogle kinesiske urtemedicin, såsom

Coptis chinensis

(Huang lian),

Scutellaria baicalensis

(Huang Qin),

Camellia sinensis Hotel (Lu cha),

Wedelia chinensis

(Peng qi ju) og Songyou Yin (en kinesisk herbal forbindelse) indeholdende nogle bioaktive forbindelser eller en række fytokemikalier, kan vende EMT og reducere metastase [9] – [13]. Således kan disse urter anvendes som komplementære og alternative behandlinger og /eller som adjuverende behandling for konventionelle cytotoksiske behandlinger. QYHJ, en syv-urt kinesiske lægemidler formel og anvendt til bugspytkirtelkræft i Kina, har vist sig at inhibere både tumorvækst og metastase i nøgne mus med kræft i bugspytkirtlen celle xenografter [14] – [16]. Desuden QYHJ kombineret med konventionel vestlig medicin har vist sig at forlænge overlevelsestiden hos patienter med levermetastaser fra pancreascancer [17]. Men den underliggende molekylære mekanisme er stadig uklar.

Her viser vi, at QYHJ hæmmer både tumorvækst og metastase i nøgne mus med kræft i bugspytkirtlen celle implanteret. Resultaterne indikerede, at QYHJ inhiberede cancerrelateret inflammation i tumorer ved at nedsætte infiltration af tumorassocierede makrofager og IL-6-produktion, hvilket i sidste ende faldt EMT og celleinvasion. Derfor er de foreliggende resultater tyder på, at QYHJ kan hæmme kræft i bugspytkirtlen celleinvasion og metastase i human pancreascancer delvis ved at vende tumor-understøttende inflammation.

Materialer og metoder Salg

etiske retningslinjer

Alle mus forsøg blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra National Institutes of Health for Pleje og anvendelse af forsøgsdyr. Undersøgelsen protokol Den blev ligeledes godkendt af Udvalget om brugen af ​​levende dyr i undervisning og forskning, Fudan University, Shanghai. Under etableringen af ​​en levermetastaser model og en ortotopisk model af kræft i bugspytkirtlen, blev musene bedøvet med 3% pentobarbital natrium (40 mg /kg) og blev gjort alle bestræbelser på at minimere lidelse.

cellelinjer og mus

den humane pancreas cancercellelinie BxPC3 blev opnået fra American Type Culture Collection. SW1990HM, en højt metastatisk humant pancreatisk carcinom linje, blev subklonet fra SW1990 fra vores gruppe [18]. Alle de dyrkede celler blev dyrket i RPMI1640 /10% føtalt kalveserum og holdt i en befugtet 5% CO

2 atmosfære ved 37 ° C. Alle cellelinjer blev regelmæssigt bekræftet ved at kontrollere deres morfologi og testet for fravær af mycoplasma forurening (MycoAlert, Lonza, Rockland, ME, USA).

BALB /c-nu /nu nøgne mus alderen 4 -6 uger blev opnået fra Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina), og har til huse i laminar flow kabinetter under specifikke patogenfrie betingelser og forsynet med mad og vand

ad libitum

.

Narkotika og reagenser

QYHJ, en syv-urt kinesisk medicinsk formel, bestod

Scutellria barbata Hotel (Ban zhi lian),

Heydyotis diffusa Hotel (Bai hua hun hun cao),

Amorphophallus kiusianus

(hun liu gu),

Coix Lacryma-JOBI Hotel (Yi ren),

Gynostemma pentaphyllum

(Jiao gu lan),

Ganoderma luncidum

(Ling zhi) og

Amomum cardamomum Hotel (Bai dou Kou). QYHJ blev fremstillet som previouly beskrevne måleapparatur [14] – [16]. Kort fortalt blev pulvere af QYHJ formel produceret af Jiang-yin Tianjiang Pharmaceutical Co, Ltd For at sikre standardisering og vedligeholde interbatch pålidelighed QYHJ blev en højtydende væskekromatografi (HPLC) kromatografisk fingeraftryk udviklet for sin kvalitetskontrol. De fingeraftryk kromatogrammer af QYHJ formel blev vist i figur S1. Den endelige afkog af QYHJ blev fremstillet ved opløsning af plantestoffer pulver i destilleret vand til den ønskede koncentration. Den daglige dosering til nøgne mus var 18 g /kg, som beregnet ifølge den følgende menneske-muse transfer formel Db = Da × (Rb /Ra) × (Wb /Wa) 2/3, hvor D, R, og W betegner dosering, form koefficient, og kropsvægt henholdsvis og a og b repræsenterer mennesker og mus, henholdsvis. Human rekombinant interleukin-6 (IL-6) blev opnået fra R kanin-anti-CD68 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA); gede-anti-IL-6 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA); GAPDH (Epitomics, Burlingame, CA).

Etablering af en levermetastaser model i nøgne mus

En model af kræft i bugspytkirtlen levermetastaser blev etableret som tidligere [18] beskrevet. Kort fortalt blev nøgne mus bedøvet med chloralhydrat; milten blev eksponeret; og bugspytkirtelkræftceller SW1990HM (5 x 10

6 /0,2 ml PBS) blev injiceret i milten med en sprøjte. Milten blev returneret til maven, og såret blev lukket i et lag med sårklips. Seks uger efter injektion, blev musene undersøgt groft ved obduktion for levermetastaser. Dernæst vurderede vi tumormetastase ved at tælle antallet af metastatiske kolonier i en histologisk snit af midterdelen af ​​hver lever prøve fra hver mus og ved at bestemme forholdet af den metastatiske område til det samlede areal i histologiske snit fra midterdelen af ​​hver leveren [19], [20] .Den metastatiske til samlede areal blev beregnet ved hjælp af Adobe Photoshop version 7.0 (Adobe Systems) og ImageJ udgave 1,29 (National Institutes of Health) software, og resultaterne er udtrykt som procenter.

ortotopisk model af kræft i bugspytkirtlen

ortotopisk model af kræft i bugspytkirtlen blev etableret som tidligere beskrevet [21]. Kort fortalt, 2 × 10

6 SW1990HM bugspytkirtelkræftceller per dyr i 100 pi phosphatpufret saltvand blev injiceret subkutant i den venstre flanke af en nøgen mus. Tumorstørrelser blev målt 3 gange om ugen ved anvendelse af en skydelære. Når tumorer dyrket subkutant nået en størrelse på 0,5 til 1 cm

3, blev de fjernet aseptisk fra musene og overført til petriskåle indeholdende 10 ml phosphatpufret saltopløsning. Makroskopisk vitale områder af tumoren blev skåret i 1 mm

3 stykker med en skalpel. Musene blev derefter bedøvet med 3% pentobarbital natrium (40 mg /kg) og blev gjort alle bestræbelser på at minimere lidelse. En lille tværgående indsnit blev skabt i den venstre abdominale flanke, og pancreas blev forsigtigt blottet. En lomme på 2 til 3 mm blev fremstillet på halen af ​​bugspytkirtlen hjælp af store milt vene som førende struktur, og tumorstykker blev indsat. Bugspytkirtlen blev derefter genindsat i maven, og bugvæggen blev lukket ved hjælp af 6-0 ikke-absorberbare suturer.

enzymmaerket (ELISA)

Koncentrationer af serum IL-6 og TNF-α blev målt under anvendelse af en ELISA. Blodprøven blev opbevaret ved stuetemperatur i 30 minutter, centrifugeret (12000 x g) i 15 min, og derefter kryopræserveret ved -80 ° C. Koncentrationerne af IL-6 og TNF-α blev målt under anvendelse af et sandwich-ELISA-kit (DuoSet; R 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS 15.0 softwarepakke.

Resultater

QYHJ Undertrykker levermetastaser fra human kræft i bugspytkirtlen in vivo

Først, vi bekræftet effekten af ​​QYHJ i undertrykke levermetastaser af pancreascancer. Nøgne mus blev inokuleret intramilt med den humane pancreas cancer cellelinje SW1990HM og tilfældigt opdelt i QYHJ eller kontrolgruppen. En uge efter randomisering blev mus i QYHJ gruppe behandlet oralt med QYHJ (0,2 ml, via sonde, daglig), mens mus i kontrolgruppen fik normalt saltvand som kontrol i 4 uger (dag 7-35). Seks uger efter injektion blev musene aflivet og deres levere høstet. Både QYHJ- og kontrol-behandlede celler dannede tumorer når implanteret i milten, men mus behandlet med QYHJ udviklet sig betydeligt færre levermetastaser end gjorde dem behandlet med kontrol normalt saltvand. Desuden mus behandlet med QYHJ vises færre metastatiske kolonier og en nedsat metastatisk til total arealforhold (figur 1A og B). Tilsammen udgør disse resultater viser, at QYHJ kunne undertrykke levermetastaser i human bugspytkirtelkræft.

A. En levermetastaser model blev etableret som beskrevet i Materialer og Metoder. Mus modtog en 28-dages behandling af QYHJ eller normalt saltvand som kontrol. Mus blev aflivet 6 uger efter injektion, og deres lever blev høstet. Repræsentative levere fra nøgne mus er vist. H T, tumor. Original forstørrelse, × 200. B. Western blot-analyse blev anvendt til at måle ekspressionen af ​​EMT-relaterede markører E-cadherin, N-cadherin, vimentin og Slug i celler afledt fra tre repræsentative xenograft prøver fra hver gruppe. Bandet intensiteter blev målt ved densitometri og den relative angivne proteinekspression blev vist (lavere).

QYHJ Undertrykker Kræft-relaterede Betændelse i bugspytkirtlen Kræft

Talrige undersøgelser har vist, at kræft- relaterede betændelse fremmer udviklingen af ​​tumorer [23], [24]. Desuden er nogle proinflammatoriske cytokiner, såsom IL-8, IL-6 og TNF-a, er blevet vist at aktivere EMT og i sidste ende til at lette celleinvasion og metastase [25] – [29]. Derfor brugte vi et enzymbundet immunosorbentassay at undersøge serumniveauer af de to pro-inflammatoriske cytokiner IL-6 og TNF-α i nøgne mus. Serum IL-6-niveauer var lavere i mus behandlet med QYHJ (15,50 ng /l ± 4,49 ng /L) sammenlignet med dem, som fik behandling (29.06 ng /l ± 6,99 ng /L, P 0,01). Desuden blev serum TNF-α formindsket efter behandling med QYHJ (19.94 ± 3.55 ng /L vs 29.50 ± 5.09 ng /L, P 0,01) (figur 4A). Disse data viste, at QYHJ faldt produktionen af ​​pro-inflammatoriske cytokiner. Leukocytinfiltration observeres i de fleste tumorer og er involveret i tumorinvasion og metastase [30]. Tumor-associerede makrofager (Tams) er en vigtig del af leukocyt infiltrat [31]. TAM infiltrater er blevet vist at korrelere med tumorprogression og en dårlig prognose hos cancerpatienter [32], [33]. Vi fandt, at infiltration med TAM blev blokeret af QYHJ (figur 4B). Desuden QYHJ faldt ekspressionen af ​​IL-6 i TAM (figur 4C). Tilsammen disse resultater viste klart, at QYHJ reducerede TAM infiltration og hæmmede IL-6-ekspression, til sidst at undertrykke cancer-relateret inflammation.

A. En orthotopisk nøgen musemodel blev etableret og behandlet med QYHJ eller vehikel som beskrevet ovenfor. Blod blev opsamlet fra hver mus, og serumkoncentrationerne af de pro-inflammatoriske cytokiner IL-6 og TNF-a blev påvist ved ELISA. Den t-test blev anvendt til at bestemme den statistiske signifikans. B. Til bedømmelse TAM infiltration, blev CD68-farvning udført under anvendelse IHC. Original forstørrelse, 200 ×. TAM infiltration blev vurderet kvantitativt ved at beregne forholdet mellem CD68-positive område til det samlede areal i hvert felt, og middelværdien fra ti felter under 200 × mikroskopi blev bestemt. * P 0,05. C. Konfokal mikroskopi af pancreascancer væv behandlet med anti-CD68 (rød) og anti-IL-6 (grøn). Cellekerner blev modfarvet med DAPI.

IL-6 inducerer kræft i bugspytkirtlen Cell EMT

For yderligere at bekræfte sammenhængen mellem EMT og den inflammatoriske tumor mikromiljø, vi evaluerede effekten af ​​IL 6 om kræft i bugspytkirtlen celle EMT

i

vitro

. SW1990HM, som udviste et højt niveau af vimentin ekspression, og BxPC3, som udviste et højt niveau af E-cadherin ekspression, blev behandlet med rekombinant humant IL-6. IL-6 behandling resulterede i forøget vimentin ekspression i SW1990HM celler og faldt E-cadherin-ekspression i BxPC3 celler, som påvist ved immunocytofluorescence (figur 5A). Disse resultater blev bekræftet ved Western blot-analyse (figur 5B). Derfor er vores resultater indikerede, at overproduktion af den pro-inflammatoriske cytokin IL-6 fremmet pankreatisk cancercellelinie EMT.

A. De bugspytkirtelkræftceller SW1990HM og BxPC3 blev behandlet med IL-6 (100 ng /ml) i 24 timer. Celler blev derefter farvet til påvisning af E-cadherin og vimentin (grøn). Cellekerner blev modfarvet med DAPI. Original forstørrelse, × 200. B. bugspytkirtelkræftceller blev behandlet med IL-6 (100 ng /ml) i 24 timer. Totalt protein blev ekstraheret, og ekspressionen af ​​E-cadherin og vimentin blev detekteret ved western blotting. GAPDH blev anvendt som en belastning kontrol.

IL-6 Fremmer kræft i bugspytkirtlen Cell Migration og Invasion

Virkningerne af IL-6 på celle migration blev yderligere undersøgt ved hjælp af en sårhelende assay. Resultaterne viste, at flere celler flyttes ind i bunden såret i IL-6-behandlede celler sammenlignet med celler, der ikke modtog IL-6 behandling i begge cellelinier (figur 6A). For at undersøge invasion kapacitet af IL-6-behandlede bugspytkirtelkræftceller, udførte vi en

in vitro

invasion assay under anvendelse af et transwell kammer overtrukket med matrigel. Som forventet, IL-6 behandling resulterede i øget celleinvasion

in vitro

i begge cellelinier (figur 6b). Disse resultater kombineret med den iagttagelse, at IL-6 inducerede bugspytkirtelkræft celle EMT indikerede, at cancerrelateret inflammation blev forbundet med en øget kapacitet for EMT og invasion (figur 7).

A. Celle vandringshastigheder af pancreascancer celler behandlet med IL-6 (100 ng /ml) eller vehikel alene blev sammenlignet via sårhelende assays. Mikroskopiske observationer blev registreret ved 48 timer efter at ridse overfladen af ​​et konfluerende lag af celler. Asterisk angiver såret blev fuldstændig helbredt. B. invasive kapacitet bugspytkirtelkræftceller behandlet med IL-6 (100 ng /ml) eller vehikel alene blev sammenlignet under anvendelse Matrigel invasion assays. Antallet af celler, der rejste gennem membranen blev talt i 10 felter under et × 20 objektivlinse. Original forstørrelse, × 200. Resultaterne repræsenterer de midler ± SD af værdier opnået i tre uafhængige forsøg. Statistisk signifikans blev beregnet ved hjælp af t-test.

QYHJ fokuserer på cancer-relaterede betændelse i bugspytkirtelkræft via faldt TAM infiltration og IL-6-produktion. Fordi IL-6 kan fremme kræft celle migration og invasion ved at inducere EMT, undertrykkelse af kræft-relaterede betændelse ved QYHJ kan hæmme kræft i bugspytkirtlen celle invasion og metastase.

Diskussion

foreliggende resultater viste, at den kinesiske urtemedicin QYHJ kunne hæmme kræft i bugspytkirtlen celleinvasion og metastase via suppression af cancer-relaterede inflammation, især reduktionen af ​​TAM-afledt IL-6. Disse resultater udvide vores tidligere bemærkninger om betydningen af ​​tumor mikromiljø som et centralt mål for kinesisk urtemedicin.

Traditionel kinesisk medicin (TCM), som er baseret på en unik teori og enlige tids praktisk erfaring, er meget populær i Kina. Det er blevet rapporteret, at 90% af moderne kinesiske kræftpatienter har modtaget en form for TCM under deres behandlingsregime [34]. Satserne for TCM anvendes af sundhedspersonale og af hensyn til patienterne uden for Kina fortsætter med at stige årligt, især inden for onkologi [35]. Anvendelse af TCM som en adjuvans kræftbehandling er blevet rapporteret til at forbedre effektiviteten af ​​både kemo- og strålebehandling og at bidrage til at mindske de negative virkninger af hver behandling [36], [37]. Desuden lægeurter, der anvendes i TCM er for nylig blevet anerkendt som en vigtig kilde til nye lægemidler udvikling, herunder kræftmedicin [38], [39]. I den foreliggende undersøgelse, bekræftede vi, at QYHJ inhiberede metastase i pancreascancer; Men de underliggende mekanismer er fortsat uklare.

Nylige undersøgelser har bekræftet, at kræft-relaterede betændelse påvirker mange aspekter af malignitet, herunder spredning og overlevelse af maligne celler, angiogenese, metastase, og respons på behandling [24]. Tumorfremmende inflammatoriske celler indbefatter makrofag undertyper, mastceller og neutrofiler samt T- og B-lymfocytter. Makrofager udgør en vigtig komponent i immunforsvaret celleinfiltration observeret i stort set alle maligne sygdomme [31]. Det accepteres, at, cancerrelaterede og vært celle-afledte signaler program makrofager generelt, at erhverve en M2-lignende polariseret og ellers tumor-støttende fænotype [40]. I mange tilfælde er forhøjede antal TAM’er associeret med en dårligere prognose [32], [33]. TAM kan frigive vækstfaktorer (fx TGF-β), pro-inflammatoriske faktorer (fx IL-6) og enzymer (fx MMP2, MMP9), der fremmer angiogenese, tumorigenese, og metastase [24]. Alle disse faktorer eller enzymer kan fremme EMT. For eksempel er den pro-inflammatoriske cytokiner TNF-α, IL-6 og IL-8 kan inducere EMT og fremme cancermetastase [25] – [29]. Derudover en klinisk undersøgelse bekræftede, at disse cytokiner var forhøjet signifikant hos patienter med kræft i bugspytkirtlen og var forbundet med en dårlig prognose [41]. Derfor lægemidler rettet mod cancer-relaterede inflammation har potentiale til at genopdrage et tumorfremmende inflammatorisk infiltrat eller at forhindre sådanne celler i at migrere til tumorstedet. I den foreliggende undersøgelse viste vi, at QYHJ reduceret TAM infiltration og effektivt inhiberede multiple proinflammatoriske cytokiner, såsom TNF-α og IL-6, hvilket antydede, at QYHJ kunne hæmme cancer-relaterede inflammation i pancreas cancer.

under processen med EMT, ydre signaler aktiverer den iboende transkriptionsfaktorer sneglen, Slug, Twist og ZEB1, som undertrykker ekspressionen af ​​E-cadherin og fremme ekspressionen af ​​vimentin og N-cadherin, således at cellerne ændrer sig fra en polariseret epitel fænotype til en vandrende mesenkymale fænotype [42]. De “EMTed” carcinomceller menes at være ansvarlig for såning fjernt formidling, i sidste ende fører til kræft dødelighed [5], [7]. Derfor vi hypotese, at QYHJ hæmmer metastase af bugspytkirtelkræftceller, potentielt ved at undertrykke EMT. Som vi forventede, vores resultater bekræftede, at QYHJ behandling resulterede i øget E-cadherin udtryk og faldt vimentin, N-cadherin og Slug udtryk, som viste, at QYHJ hæmmede EMT af celler og undertrykt celle invasion.

IL-6 , som hovedsageligt produceres af mononukleære celler, makrofager og en mindre procentdel af fibroblaster, endotelceller T- og B-lymfocytter, chondrocytter og amnion celler [43], er et pleiotropisk cytokin, der forårsager carcinogenese, fremmer tumorvækst og letter tumorcellemetastase [ ,,,0],25] – [27]. Akkumulere tyder på, at IL-6 ofte er forhøjet, og dermed er forbundet med en dårlig prognose i mange typer af cancer, herunder pancreascancer [44], [45]. Derudover er nye behandlingsformer rettet mod IL-6 i øjeblikket deltager i kliniske undersøgelser [46]. Fordi vi viste, at QYHJ reducerede TAM infiltration og effektivt hæmmede IL-6 produktion, vi søgte at bekræfte, om den reducerede IL-6 produktionen var relateret til undertrykkelsen af ​​EMT og invasive kapacitet af celler.