PLoS ONE: Krop Størrelse, fysisk aktivitet og risikoen for kolorektal cancer med eller uden CpG Island Methylator Fænotype (CIMP)

Abstrakt

Baggrund

Vi undersøgte, hvordan kropsstørrelse og fysisk aktivitet påvirker risikoen for CpG øen methylator fænotype (CIMP) i kolorektal cancer (CRC).

Metoder

i Holland Cohort Study (n = 120.852), blev selvrapporteret risikofaktorer ved baseline i 1986. Efter 7,3 år follow-up, 603 tilfælde og 4.631 sub-kohorte medlemmer var til rådighed. CIMP stilling ifølge de Weisenberger markører blev bestemt under anvendelse methylering specifik PCR på DNA fra paraffinindlejret tumorvæv. Hazard rate ratio (HR) og 95% konfidensintervaller for CIMP (27,7%) og ikke-CIMP (72,3%) tumorer blev beregnet ifølge BMI, BMI i en alder af 20, BMI forandring, bukse /nederdel størrelse, højde og fysisk aktivitet .

Resultater

BMI modelleret pr 5 kg /m

2 stigning var forbundet med både CIMP og ikke-CIMP tumorer dog HRs blev svækket, da desuden korrigeret for buks /nederdel størrelse . Varme /nederdel størrelse, pr 2 størrelse stigning, var forbundet med både tumor undertyper, selv efter justering for BMI (CIMP HR: 1,20, 95% CI: 1,01-1,43; ikke-CIMP HR: 1,14, 95% CI: 1,04-1,28 ). Højde pr 5 cm var forbundet med både tumor undertyper, men HRs blev svækket, når der korrigeres for legemsvægt. BMI i en alder af 20 var positivt associeret med øget risiko for CIMP tumorer og foreningen var signifikant mindre udtalt for ikke-CIMP tumorer (

P

-heterogeneity = 0,01). Fysisk aktivitet blev omvendt forbundet med både undertyper, men en dosis-respons association sås kun for ikke-CIMP tumorer (

P

-trenden = 0,02).

Konklusioner

Krop størrelse, især central fedme, kan øge risikoen for både CIMP og ikke-CIMP tumorer. Krop fedt på ung alder kan forskelligt indflydelse risiko. Fysisk aktivitet synes at mindske risikoen for CRC uanset disse molekylære undertyper

Henvisning:. Hughes LAE, Simons CCJM, van den Brandt PA, Goldbohm RA, de Goeij AF, de Bruine AP, et al. (2011) Krop Størrelse, fysisk aktivitet og risikoen for kolorektal cancer med eller uden CpG Island Methylator Fænotype (CIMP). PLoS ONE 6 (4): e18571. doi: 10,1371 /journal.pone.0018571

Redaktør: Syed A. Aziz, Health Canada, Canada

Modtaget: Februar 15, 2011; Accepteret: 4 marts 2011; Udgivet: April 5, 2011

Copyright: © 2011 Hughes et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette projekt blev finansieret af World Cancer Research Fund (WCRF), tildele # 2007/54 til Matty P. Weijenberg. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

det er godt accepteret, at indikatorer for energibalancen indflydelse på risikoen for colorectal cancer (CRC). Et højt body mass index (BMI), taljemål, og voksen nået højden er klare risikofaktorer for CRC, mens fysisk aktivitet har vist sig at være beskyttende [1]. Selvom CRC er en af ​​de bedst beskrevne cancere med hensyn til genetiske og epigenetiske begivenheder involveret [2] – [5], kun lidt om, hvordan målinger af antropometri og fysisk aktivitet er associeret med forskellige molekylære undergrupper af denne sygdom. Belyse potentielle forskelle i risiko mellem molekylære undertyper af CRC kan føre til en bedre forståelse af CRC, behandling og forebyggelse. Dette er især vigtigt, da den globale forekomst af overvægt og fedme stiger fortsat.

En særskilt karakteristisk for epigenetisk ustabilitet i CRC er CpG øen methylator fænotype (CIMP), kendetegnet ved talrige promoter CpG ø hypermethylerede tumor suppressor- og DNA-reparationsgener [6] – [9]. Dette på sin side er forbundet med transkriptionel inaktivering af genekspression [10]. Kun få studier har undersøgt foreninger mellem indikatorer for energibalance og CIMP status, og dem, der har, kun betragtes BMI som en indikator for kroppens størrelse. I en case-kontrol indstilling, Slattery

et al.

Rapporteret en sammenhæng mellem en høj BMI og CIMP lav, men ikke CIMP høje kolon tumorer [11], og ingen sammenhæng mellem BMI og CIMP status i rektale tumorer [12 ]. Voldsom fysisk aktivitet blev forbundet med både CIMP høj og CIMP lav colontumorer, men ikke rektale tumorer [11], [12]. Det er blevet antaget, at DNA-methylering er en konsekvens af inflammation [13], [14]. Central adipositas er også forbundet med kronisk inflammation [15]. Derfor overvejer taljemål som en risikofaktor for CIMP foruden BMI er vigtig. Derudover er methylering menes at være en tidlig begivenhed i CRC [16], så overvejer højde og BMI i en ung alder kan også være informativt som disse variabler er vejledende for

i livmoderen

og tidlige liv eksponering [17] .

Brug af prospektive Holland Kohorte om kost og kræft (NLCS), undersøgte vi sammenhængen mellem BMI, tøjstørrelser (som proxy for taljemål) og fysisk aktivitet og risikoen for at udvikle en tumor karakteriseret ved CIMP . Endvidere i forsøg på at belyse, om timingen af ​​eksponering er vigtig for modulering denne risiko, undersøgte vi også foreninger i henhold til BMI i en alder af 20, BMI forandring, og voksen-opnået højde.

Resultater

Baseline og molekylære karakteristika er beskrevet i tabel 1. Forholdsvis, CIMP CRC tilfælde var mere tilbøjelige til at være kvindelig, har en svulst i den proksimale colon, og være ældre end ikke-CIMP sager.

Foreninger mellem foranstaltninger af antropometri, fysisk aktivitet og CRC risiko ifølge CIMP status er vist i tabel 2. efter justering for alder og køn, BMI modelleret pr 5 kg /m

2 stigning var statistisk signifikant associeret med CIMP tumorer (HR: 1,29, 95% CI: 1,01-1,66), og en statistisk signifikant dosis-respons forhold blev observeret, når modellering kvartiler af BMI (

P

-trenden = 0,02). Men når modeller blev gensidigt justeret for buks /nederdel størrelse, disse foreninger var stærkt svækket. BMI var også positivt, men ikke statistisk signifikant, forbundet med ikke-CIMP tumorer. Disse blev også svækket, når gensidigt justeret for buks /nederdel størrelse. HRS for CIMP og ikke-CIMP tumorer ikke adskiller sig væsentligt fra hinanden (

P

-heterogeneity = 0,78). BMI i en alder af 20 modelleret pr 5 kg /m

2 stigning var forbundet med øget risiko for begge undertyper, men HRs nåede ikke statistisk signifikans. Når BMI i en alder 20 blev modelleret i kvartiler, blev en statistisk signifikant tendens til CIMP tumorer (

P

= 0,03). Denne tendens blev borderline signifikant når modellen blev justeret for buks /nederdel størrelse (

P

-trenden = 0,07). Testen for heterogenitet mellem tumor undertyper var statistisk signifikant i forhold til BMI i en alder af 20, selv efter justering for buks /nederdel størrelse (

P

-heterogeneity = 0,01). Ingen statistisk signifikante observationer blev observeret med hensyn til BMI forandring

Varme /nederdel størrelse, modelleret pr 2 enhed størrelse stigning, var forbundet med både CIMP (HR:. 1,20, 95% CI: 1,05-1,37 ) og ikke-CIMP tumorer (HR: 1,14, 95% CI: 1,05-1,24) efter multivariat justering, og disse foreninger forblev selv når modeller blev gensidigt justeret for BMI. Når buks /nederdel størrelse blev overvejet i omtrentlige kvartiler, testen for tendens var signifikant for CIMP (p = 0,02) og borderline væsentlige for ikke-CIMP (

P

= 0,06) tumorer, selvom disse blev svækket, når modeller blev gensidigt justeret for BMI. Foreninger observeret for CIMP og ikke-CIMP tumorer var ikke statistisk signifikant forskellige fra hinanden (

P

-heterogeneity = 0,61).

Højde, modelleret pr 5 cm stigning var forbundet med både CIMP ( HR: 1,16, 95% CI: 1,01-1,33) og ikke-CIMP (HR: 1,10, 95% CI: 1,00-1,21) tumorer efter multivariat justering. Et grænsetilfælde statistisk signifikant tendens blev observeret for risiko for ikke-CIMP tumorer når højde blev betragtet i kvartiler (højeste versus laveste kvartil HR: 1,45, 95% CI: 1,03-2,06;

P

= 0,06) (p- heterogenitet = 0,98). Disse foreninger blev svækket, da modellen blev gensidigt justeret for legemsvægt.

Med lav fysisk aktivitet som reference kategori, var der ingen invers dosis-respons sammenhæng mellem fysisk aktivitet og CIMP tumorer, selv om HR for mellemliggende fysisk aktivitet var statistisk signifikant (HR: 0,50, 95% CI: 0,30-0,82) (tabel 3). En omvendt sammenhæng blev observeret i en dosis-respons mode for ikke-CIMP tumorer (mellemliggende fysisk aktivitet HR: 0,80, 95% CI: 0,61-1,04; høj fysisk aktivitet HR: 0,69, 95% CI: 0,47-0,96;

P

-trenden = 0,02), men gjorde foreninger med CIMP og ikke-CIMP tumorer ikke adskiller sig væsentligt fra hinanden (

P

-heterogeneity = 0,33).

sammenslutninger til en tumor methylering indeks i forhold til antropometriske risikofaktorer og fysisk aktivitet er vist i tabel 4. Der var ikke noget klart mønster med hensyn til graden af ​​methylering, men når modelleret pr 2 enhed størrelse stigning, bukser /nederdel størrelse var forbundet i en dosis-respons måde med tumorer, der udviser den højeste grad af methylering (4-7 gener methylerede HR: 1,29, 95% CI: 1,06-1,58;

P

-trenden = 0,08)

diskussion

Disse data tyder på, at voksne krop fedme og højde kan øge risikoen for CRC, men er ikke forskelligt forbundet med CIMP og ikke-CIMP tumorer. Modsat kan BMI i en alder af 20 være en stærkere risikofaktor for CIMP + tumorer. Baseline fysisk aktivitet synes at mindske risikoen for CRC uanset CIMP status.

En væsentlig styrke i denne undersøgelse er, at vi undersøgte foreninger i et prospektivt kohorte indstilling. Den NLCS har næsten fuldstændig konstatering af kolorektal cancer og meget lidt tab til opfølgning. Selv om antallet af samlede CRC efter 7,3 års opfølgning i NLCS var betydelig, at antallet af tilfælde med CIMP fænotype var lille. Med begrænset magt til at opdage foreninger, er det muligt, at nogle resultater er opstået ved en tilfældighed. En anden potentiel begrænsning ved denne undersøgelse er, at antropometriske variabler blev opnået ved selvrapportering. Men der er mange eksempler i litteraturen viser, at denne metode er et gyldigt og pålideligt værktøj til vurdering kropsvægt og højde i kohortestudier [18] – [21].

Til vores viden, sammenhænge mellem indikatorer for energibalance og CIMP status kolorektale tumorer er blevet rapporteret kun Slattery

et al.

i en case-kontrol indstilling [11], [12]. Ud over undersøgelsen design, der er forskel på vores undersøgelser, som bør tages i betragtning, når man sammenligner resultater.

NLCS udnyttede Weisenberger panel af gener for at definere CIMP (

CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3

og

SOCS1

), mens studiet af Slattery

et al.

, udnyttede den klassiske panel (

MINT1, MINT2, MINT31, p16 og hMLH1

) samt forskellige cut-offs for at definere CIMP i tumorer [22], [23]. Den “rigtige” definition af CIMP er stadig et meget omdiskuteret emne, som er den ideelle gen panel og den passende metode til methylering afsløring [12], [24]. Mens Weisenberger panelet er blevet valideret, kan forskellige markører for methylering være mere eller mindre informativ med hensyn til at studere forskellige eksponeringer. Forekomsten af ​​CIMP i NLCS befolkningen er højere end i undersøgelsen fra Slattery

et al

. (27% vs. 11%) [12]. Imidlertid kan en forskel i primer design og PCR-betingelser væsentligt ændrer sensitivitet og specificitet af en bestemt markør til påvisning af CIMP i CRC [25]. Derfor er det sandsynligt, at forskelle i udbredelsen ikke skyldes de forskellige metoder i sig selv, men snarere en forskel i valg af primere. Den MSP analyser, der er gennemført i NLCS har en høj afsløring signal, og efterfølgende er der observeret en højere forekomst af CIMP. I den foreliggende undersøgelse, vi har forsøgt at afklare vores observationer ved at konstruere en methylering indeks med forskellige cut-off points, der omfattede syv gener almindeligvis methylerede i CRC.

I den foreliggende undersøgelse vi overvejet colon og rektal tumorer sammen for at øge statistisk styrke. En følsomhedsanalyse viste, at dette ikke gjorde skævhed vores fund (data ikke vist). Desuden foreslår vi, at idéen om at kombinere sub-lokaliseringer af tumorer kan være acceptable, når studerer molekylære endpoints, da dette kan bidrage til at forklare forskelle i ætiologi efter sub-lokalisering.

Vi observerede, at BMI var forbundet med både tumor CIMP og ikke-CIMP tumorer; men efter justering for tøjstørrelser, disse foreninger forsvundet. Dette er i modsætning til sag kohortedata tyder på, at BMI er forbundet kun med CIMP negativ kolon tumorer og ikke med rektal tumorer [11], [12]. I vores undersøgelse, synes bukse /nederdel størrelse at være en stærk, uafhængig prædiktor for både tumor undertyper, selv efter justering for BMI. Dette er logisk, fordi taljemål, en indikator for central fedme, er en stærkere indikator for CRC end BMI [1], [26]. Når vi overvejet foreninger efter en methylering indeks, vi ikke observere klare associationer i forhold til BMI og graden af ​​promotor methylering, men vi observeret, at bukse /nederdel størrelse var forbundet med det højeste niveau af methylering. At vi observerede sammenhænge mellem buks /nederdel størrelse og både CIMP og ikke-CIMP tumorer tyder på, at det centrale fedme kan påvirke CRC risiko gennem både en methylering og en ikke-methylering vej.

Selvom meget få undersøgelser har overvejet associationer mellem BMI og CIMP har en række overvejet endepunkter i samme vej som CIMP. Colorectal cancer har forskellige molekylære delmængder, som udvikler gennem forskellige veje [16]. Vejen til en savtakket adenocarcinom synes at tage en af ​​to store ruter: den traditionelle savtakket vej eller siddende savtakket vej [27]. Den sessile savtakket forløb er karakteriseret ved en høj grad af CIMP,

BRAF

V600E mutationer, og i sidste ende udvikler sig til mikrosatellit instabilitet (MSI) [27]. MSI kan tjene som markør for CIMP eller andre molekylære begivenheder i CRC [28], derfor kan det være oplysende at overveje resultaterne af den foreliggende undersøgelse i forbindelse med denne forskning. To case-kontrol-studier har rapporteret, at BMI synes forbundet med mikrosatellit stabile (MSS) tumorer, og mindre med MSI tumorer [29], [30]. Hverken undersøgelse rapporteret foreninger efter taljemålet. I en nylig poolet analyse af NLCS og data fra Melbourne Collaborative Kohorte, vi observerede lignende foreninger, selvom testen for heterogenitet mellem tumor undertyper ikke var statistisk signifikant (Hughes

et al.

, Indsendt).

Der er tegn på, at tidlig liv eksponering indflydelse epigenetiske mekanismer forbundet med voksne sygdomsrisiko [31], [32]. Derfor undersøgte vi også associationer mellem BMI i en alder af 20, BMI forandring, højde og CIMP status. Højde er en markør for en samlet føtal og barndom erfaring, og kan betragtes som en proxy foranstaltning for vigtige ernæringsmæssige engagementer, som påvirker flere hormonelle og metaboliske akser [17]. I NLCS har vi observeret, at barndom og teenager energi begrænsning er forbundet med en nedsat risiko for CRC senere i livet [33], [34], som er støttet af andre befolkningsgrupper baseret undersøgelser [35] – [37]. Vi har også for nylig rapporteret, at udsættelse for alvorlig energi begrænsning i barndommen og ungdommen var forbundet med en lav risiko for at udvikle en CIMP tumor [32]. Desuden poolede data tyder på, at højere individer er i større risiko for at udvikle en MSI tumor (Hughes

et al

. Indsendt). Ifølge den foreliggende undersøgelse, er højden ikke differentielt forbundet med risikoen for tumorer, men vi observere signifikant heterogenitet i forhold til BMI i en alder 20 og tumor undertyper. Tilsammen vores resultater tyder på, at kropsstørrelse forskelligt kan påvirke CIMP status i forskellige perioder af livet, som kan berøre senere CRC risiko. Sammenhængen mellem BMI i en alder af 20 og CIMP tumorer var stærkere end med ikke-CIMP tumorer, hvilket er i overensstemmelse med tidligere resultater for alvorlig energi begrænsning i barndommen og ungdommen. Selvom vores bootstrapping metode er ganske konservativ, vi ikke observere en klar sammenhæng med hensyn til BMI i en alder af 20 og methylering indeks, og derfor kan vi ikke udelukke, at forskellen samarbejde med CIMP status er en tilfældighed. Hypotesen om, at timingen af ​​eksponering kan påvirke epigenetiske mekanismer kræver yderligere undersøgelser.

At vi ikke observere nogen klare associationer mellem BMI forandring og risiko for tumorer var overraskende. Dette kan indikere, metaboliske ændringer i fedt kan være vigtigere til modulation risiko over tid, frem for BMI. Alternativt overvejer mænd og kvinder sammen kan have svækket disse observationer. Campbell

et al.

Rapportere, at voksne vægtforøgelse var forbundet med CRC hos mænd, men ikke hos kvinder, og kun for så vidt angår personer, der opnåede mere end 21 kg, da alder 20 [29]. Endelig kun overvejer to tidspunkter kan ikke være tegn på ægte BMI forandring.

Vores resultater med hensyn til fysisk aktivitet støtte dem af Slattery

et al.

[11], og tyder på, at høj niveauer af daglig motion er forbundet med en nedsat risiko for både CIMP og ikke-CIMP tumorer. Observationer med hensyn til vores methylering indeks tyder på, at fysisk aktivitet kan være mere beskyttende af tumorer med stigende methylering, men der kræves mere forskning, før der kan drages endelige konklusioner.

foreløbige beviser tyder på, at molekylære markører kan anvendes til at klassificere tarmkræft i distinkte undertyper, som har konsekvenser for både ætiologi og forebyggelse [28]. Færre tumorer opstår fra sessile savtakket pathway sammenlignet med den traditionelle adenom pathway [27], [38]. Som overvægt og fedme er så stærke risikofaktorer for CRC, er der en mulighed for, at disse betingelser kan forskelligt indflydelse risiko gennem veje og andre end hvad vi undersøgte her molekylære mekanismer. Mere forskning er nødvendig for at afklare sammenhængen mellem indikatorer for energibalance og epigenetiske mekanismer, der fører til CRC; helst i et prospektivt kohorte indstilling, med mange tilfælde [39]. Som inden for molekylær patologiske epidemiologi [40] fortsætter med at udvikle sig, standardisering af metoderne og definitioner af molekylære endpoints bør behandles. Dette vil blive særligt kritisk som flere muligheder for at samle opstår data.

Som konklusion, vores resultater tyder på, at foranstaltninger af antropometri afspejler en stor kropsstørrelse øger risikoen for både CIMP og ikke-CIMP tumorer, og at kropsfedt på ung alder kan forskelligt indflydelse risiko. Fysisk aktivitet synes at mindske risikoen for CRC uanset disse molekylære undertyper. Vores observationer gentager vigtigheden af ​​en sund kropsvægt med hensyn til offentlig CRC forebyggelse.

Materialer og metoder

Undersøgelse befolkninger og design

NLCS er et prospektivt kohortestudie, der blev påbegyndt i 1986 for at undersøge sammenhængen mellem kost og udvikling af kræft. Det omfatter 58,279 mænd og 62,573 kvinder i alderen 55-69 år ved baseline, der fuldførte en selvadministreret mad frekvens spørgeskema involverer 150 fødevarer samt spørgsmål om kostvaner, livsstil, sundhed og demografi. Kommunale registre fra hele Holland blev brugt til at udgøre en effektiv ramme prøveudtagning. Den NLCS bruger et – kohorte tilgang til behandling og analyse af data; case emner blev afledt fra hele kohorte, og antallet af personår i risiko for hele kohorten blev estimeret ud fra en sub kohorte af 5000 mænd og kvinder, som blev tilfældigt udtaget fra den fulde kohorte ved baseline. Alle sub kohorte medlemmer, der rapporterede fremherskende kræft (undtagen hudkræft) ved baseline blev ekskluderet fra analyserne, efterlod 4654. Yderligere oplysninger i NLCS design er blevet beskrevet [41] – [43].

Incident CRC sager identificeret ved den årlige rekord kobling til ni regionale kræftregistre og en national patologi database (PALGA) [44]. Fuldstændighed kræft opfølgning er næsten 100% [45]. Paraffinindlejret tumormateriale fra CRC patienter blev hentet, som tidligere [46] beskrevne. I alt blev 734 hændelse CRC patienter identificeret fra en opfølgningsperiode på 7,3 år efter baseline, bortset fra de første 2 år af follow-up, hvoraf en PALGA rapport af læsionen samt tilstrækkelig DNA var tilgængelig [46].

undersøgelsen protokol den blev godkendt af medicinsk etik udvalg i Universitetshospital Maastricht og TNO Nutrition. På rekruttering blev deltagerne informeret skriftligt om detaljerne i undersøgelsen og dens mål. I overensstemmelse med reglerne på det tidspunkt, blev skriftligt informeret samtykke opnås, når deltagerne returnerede udfyldt baseline spørgeskema. Tumor materiale blev opsamlet efter godkendelse fra de etiske anmeldelse bestyrelser Maastricht University, National Cancer Registry, og PALGA.

Konstatering af risikofaktorer

Antropometriske variabler.

Højde ( cm), legemsvægt (kg), og kropsvægt i en alder 20 (kg) var selvrapporteret på baseline spørgeskema. Fra disse variabler, BMI og BMI i en alder af 20, og BMI forandring blev efterfølgende beregnet. Ved baseline blev individer også bedt om at indberette deres underkrop (bukser eller nederdel) tøjstørrelser fra deres tøj label (hollandsk størrelser). Varme /nederdel størrelse har vist sig at være en tilstrækkelig proxy foranstaltning for taljemålet når forudsige kræftrisiko i NLCS, og detaljer om, hvordan tøjstørrelser svarer til taljen målinger i mænd og kvinder i denne hollandske befolkning er blevet offentliggjort [47]. BMI, BMI i en alder af 20, nederdel /bukse størrelse og højde blev kategoriseret i omtrentlige kønsspecifikke kvartiler. Som i tidligere NLCS analyser blev BMI ændring kategoriseret som: 0 kg /m

2, 0-4 kg /m

2, 4-8 kg /m

2, og 8 kg /m

2 [48].

fysisk aktivitet.

med hensyn til fysisk aktivitet og CRC risiko i NLCS befolkning, synes erhvervsmæssig fysisk aktivitet for at være vigtigere for mænd og rekreative fysisk aktivitet for kvinder til forudsigelse af risiko (Simons

et al.

, indsendt). Derfor har vi brugt disse to variabler til at skabe kønsrelaterede kategorier af ‘lav’, ‘mellemliggende’ og “høj” fysisk aktivitet.

Occupational fysisk aktivitet stammer fra data om deltagernes arbejdsforhold. Brug oplysninger om type job og varigheden, energiforbrug og sidde tid blev beregnet for den længste og sidste holdt job. udgifter Energi var baseret på en vurdering udviklet af Hettinger

et al

[49] og skelner mellem arbejde lav, moderat og høj aktivitet, som svarer til en energi udgifter. 8, 8-12 og 12 kJ /min. Mænd blev kategoriseret i kategorien “lav”, hvis deres erhvervsmæssige fysisk aktivitet var 8 kj /minut, ‘mellemliggende’, hvis de faldt i 8-12 kJ /minut kategori, og høj, hvis deres erhvervsmæssige fysisk aktivitet var 12 kJ /minut.

Baseline ikke-erhvervsmæssig fysisk aktivitet blev beregnet på grundlag af to spørgsmål. Den første (åbent) Spørgsmålet var “Hvor mange minutter bruger du i gennemsnit pr dag at gå eller cykle til dit arbejde, at gå på indkøb eller til at tegne din hund?« Den rapporterede tidsforbrug per dag blev kategoriseret i ≤10, 10-30, 30-60 og 60 minutter om dagen. Det andet spørgsmål var “Hvor mange timer af din fritid tid bruger du i gennemsnit om ugen på en) rekreativ cykling, gang, 2) havearbejde /laver forefaldende arbejde og 3) sport, gymnastik? ‘Besvarelse muligheder var aldrig, 1 time om ugen, 1-2 timer om ugen og 2 timer om ugen. Tiden brugt på disse aktiviteter og de minutter brugt pr dag på at gå eller cykle til arbejde, at gå på indkøb eller til at tegne hunden blev opsummeret at få et samlet mål for baseline ikke-erhvervsmæssig fysisk aktivitet, med kategorier 30, 60-90 og 90 minutter om dagen. Lav fysisk aktivitet blev defineret som 30 minutter /dag, mellemprodukt som 30-90 minutter /dag, og høj som 90 minutter /dag

Promotor methylering Analyser

CIMP i tumor. væv af CRC tilfælde blev defineret ved CpG ø promotor hypermethylering på mindst 3 ud af 5 methylering markører (

CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3

og

SOCS1

), som foreslået af Weisenberger

et al.

[9] blev bestemt ved bisulfit modifikation af 500 ng genomisk DNA ved hjælp af et kommercielt tilgængeligt kit (Zymo Research), og efterfølgende methylering specifik PCR (MSP) [50], [51]. Vi valgte at anvende MFP som en metode, fordi det er effektivt, specifik og kræver ikke specifikt udstyr. Det har vist sig, at resultaterne fra MSP er i overensstemmelse med andre teknologier, såsom MethyLight [52]. Derudover status methylering af to andre gener,

APC

og

MLH1

, blev bestemt, og vi tilføjede dem til CIMP markører til at oprette en methylering indeks på syv gener.

for at lette MSP-analyse på DNA hentet fra formalin-fikseret, paraffin-indstøbt væv, DNA blev først forstærket med flankerende PCR primere, der forstærker bisulfit-modificeret DNA, men ikke fortrinsvis forstærke methyleret eller umethyleret DNA. Det resulterende fragment blev anvendt som en template til MSP reaktionen. Alle PCR’er blev udført med kontroller for umethylerede alleler (DNA fra normale lymfocytter), denatureret alleler [normal lymfocyt DNA behandlet

in vitro

med

Sss

jeg methyltransferase (New England Biolabs, Ipswich, MA )], og en kontrol uden DNA. Ti mikroliter af hver MSP reaktionen direkte lastet på ikke-denaturerende 6% polyacrylamidgeler farvet med ethidiumbromid og visualiseret under UV-belysning. De MSP analyser var en succes for 81%, 79%, 79%, 90%, 83%, 93%, og 93% ud af de 734 sager for

CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3, SOCS1

,

MLH1

, og

APC

hhv.

statistiske analyser

data blev analyseret med Stata (version 10, Statacorp, College Station, TX, USA). Cox proportionel risiko analyse ved hjælp af case-kohorte fremgangsmåde blev anvendt til at opnå hazard ratio (HR) og intervaller 95% sikkerhedsgrænser (CI) for sammenhængen mellem foranstaltninger af antropometri og fysisk aktivitet og CRC karakteriseret ved CIMP status. For at forbedre statistisk styrke, betragtede vi mænd og kvinder sammen. Tests for effekt modifikation af sex var ikke statistisk signifikante. Den proportionale farer antagelse blev testet ved hjælp af de skalerede Schoenfeld residualer og visuel inspektion af de farlige kurver. For at tage højde for den ekstra varians indført ved prøveudtagning subcohort fra hele kohorten blev standardfejl estimeres ved anvendelse af robust løsning. Statistisk signifikans blev testet på 0,05-niveau.

For alle antropometriske variable pågældende tre modeller blev overvejet. Den første blev justeret kun for alder og køn. Den anden blev desuden justeret for variabler identificeret som værende forbundet med både CRC og energibalance fra tidligere litteratur. Disse omfattede familiehistorie med CRC (ja /nej), rygning status (aldrig ryger, ex-ryger, nuværende ryger), socioøkonomisk status (uddannelsesniveau: folkeskole, junior high school, senior high school, højere erhvervsskole eller universitet ), samlede energiindtag (kcal /dag), alkohol indtag (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /dag), fysisk aktivitet (lav, medium, høj som tidligere beskrevet), og forbruget af rødt kød, frugt, grøntsager og korn (g /dag). Endelig blev modeller gensidigt justeret for andre antropometriske variable. Modeller herunder BMI og BMI i en alder af 20 blev gensidigt justeret for nederdel /bukser størrelse, blev BMI ændring korrigeret for BMI i en alder af 20, blev bukse /nederdel størrelse justeret for BMI, og højde blev justeret for legemsvægt.

Vi modelleret fysisk aktivitet korrigeret for alder og køn og desuden korrigeret for buks /nederdel størrelse, familie historie af CRC (ja /nej), rygning status (aldrig ryger, ex-ryger, nuværende ryger), socioøkonomisk status (uddannelsesniveau: grundskolen, junior high school, senior high school, højere erhvervsskole eller universitet), samlede energiindtag (kcal /dag), alkohol indtag (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /dag ), tøjstørrelser, og forbrug af rødt kød, frugt, grøntsager, og fiber (g /dag).

for at vurdere, hvordan foranstaltninger af antropometri og fysisk aktivitet var forbundet med omfanget af promotor methylering i CRC tumorer brugte vi den førnævnte methylering indekset til at kategorisere sager i én af tre grupper: “0-1 gener methylerede ‘,’ 2-3 gener methylerede« eller »4-7 gener denatureret«. Af de 734 sager, 556 havde tilstrækkelige oplysninger, der skal klassificeres i en af ​​de tre kategorier. Modeller herunder antropometriske variabler blev justeret for alder, køn, og gensidigt justeret for andre antropometriske variabler som tidligere beskrevet, og den model for fysisk aktivitet blev justeret for alder og køn.

Tests for heterogenitet blev udført for at evaluere forskelle mellem undertyper af tumorer (f.eks

CIMP vs. non-CIMP

) ved hjælp af konkurrerende risici proceduren i STATA. Men SE for forskellen mellem de log-hazard ratio fra denne fremgangsmåde forudsætter, uafhængighed af både estimerede hazard ratio, hvilket ville overvurdere, at SE og dermed overvurdere de

P

værdier for deres forskel. Derfor disse

P

værdier og de tilhørende konfidensintervaller blev estimeret ud fra en bootstrapping metode, der blev udviklet til den retspraksis kohorte design, som tidligere [53] beskrevet. Hver bootstrap analyse var baseret på 1000 gentagelser.

Tak

Vi står i gæld til deltagerne i denne undersøgelse, og takke kræftregistre (IKA, IKL, IKMN, IKN, IKO, IKR, IKST , IKW, IKZ, og VIKC) og Nederlandene Nationwide Registry Patologi (PALGA). Vi takker også S van de Crommert og J Nelissen for deres hjælp med indtastning af data og datastyring; En Volovics og A Kester for statistisk rådgivning; L Schouten, C de Zwart, M Moll, W van Dijk, M Jansen, og A Pisters om assistance og H van Montfort, T van Moergastel, L van den Bosch, og R Schmeitz til programmering bistand K Wouters, S Hulsmans, og A Spiertz til laboratorie- assistance.