PLoS ONE: Høj Tumor Cannabinoid CB1 receptor Immunoreaktivitet negativt påvirker sygdomsspecifikke overlevelse i fase II mikrosatelitter Stable Colorectal Cancer

Abstrakt

Baggrund

Der er god dokumentation i litteraturen, at cannabinoid-systemet forstyrres i kolorektal cancer. I den foreliggende undersøgelse har vi undersøgt, om CB

1 receptor immunoreaktiv intensitet (CB

1IR intensitet) er forbundet med sygdommens sværhedsgrad og resultat.

Metodologi /vigtigste resultater

CB

1IR blev vurderet i formalinfikserede, paraffinindlejrede prøver udtaget med en fortløbende hensigt under primær tumor kirurgisk resektion fra en række sager diagnosticeret med tyktarmskræft. Tumor center (n = 483) og invasive front (n = 486) CB

1IR blev scoret 0 (fraværende) til 3 (intens farvning), og dataene blev analyseret som en median split dvs CB

1IR 2 og ≥2. I mikrosatellit stabil, men ikke mikrosatellit ustabile tumorer (som bedømmes på grundlag af immunhistokemisk bestemmelse af fire mismatch reparation proteiner), var der en signifikant positiv association af tumoren kvalitet med CB

1IR intensitet. Forskellen mellem mikrosatellitmarkørerne stabile og ustabile tumorer for denne sammenslutning af CB

1IR var relateret til ø methylering status CpG af tilfældene. Cox proportionel risiko regressions analyser indikerer et væsentligt bidrag af CB

1IR til sygdomsspecifikke overlevelse i mikrosatellitmarkørerne stabile tumorer når der korrigeres for tumor fase. I de tilfælde, med stadie II mikrosatellitmarkørerne stabile tumorer, var der en signifikant effekt af både tumor center og front CB

1IR på sygdomsspecifikke overlevelse. De 5 års sandsynligheder for event-fri overlevelse var: 85 ± 5 og 66 ± 8%; tumor interiør, 86 ± 4% og 63 ± 8% for CB

1IR. 2 og CB

1IR≥2 grupper, henholdsvis

Konklusioner /Betydning

Niveauet af CB

1 receptorekspression i colorektal cancer er forbundet med tumorklassificering på en måde afhængig af graden af ​​CpG hypermethylering. En høj CB

1IR er tegn på en dårligere prognose i fase II mikrosatellit stabile tumor patienter

Henvisning:. Gustafsson SB, Palmqvist R, Henriksson ML, Dahlin AM, Edin S, Jacobsson SOP, et al. (2011) Høj Tumor cannabinoid CB

1 receptor Immunoreaktivitet negativt påvirker sygdomsspecifikke overlevelse i fase II mikrosatelitter Stabil kolorektal cancer. PLoS ONE 6 (8): e23003. doi: 10,1371 /journal.pone.0023003

Redaktør: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, USA

Modtaget: December 29, 2010; Accepteret: 11. juli, 2011; Udgivet: 25 August, 2011

Copyright: © 2011 Gustafsson et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne takke det svenske Science Council (Grant nr 12158, medicin, CJ Fowler.); den svenske Cancer Society (Grant nr CAN2008 /856, R. Palmqvist;. Grant ingen CAN2010 /437, C. J. Fowler.); og forskningsmidler i det medicinske fakultet, Umeå Universitet (C.J. Fowler) om økonomisk støtte. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

G-protein koblede cannabinoid

1 (CB

1) receptorer er mest kendt for deres rolle i formidlingen af ​​de psykotrope effekter efterspurgt af rekreative brugere af cannabis. Men CB

1-receptorer og deres endogene ligander anandamid (arachidonoylethanolamide) og 2-arachidonoylglycerol mægle et væld af virkninger i kroppen, herunder regulering af smerte, knogledannelse, energi homeostase og gastrointestinal funktion [1] – [4]. I den menneskelige tyktarm, CB

1 receptorer findes i krypten epitel såvel som i subepiteliale inflammatoriske celler, i glat muskulatur i blodkar og i submukøse plexus [5], [6], hvor de modulerer, blandt andre funktioner , satsen for intestinal transit og colon fremdrift [4].

Udover de ovenfor beskrevne funktioner, det endocannabinoide system fungerer som en “skade begrænser” system til at afbøde virkningerne af patologiske situationer. Dette synes at være især for mave endocannabinoide system. Således inflammation induceret af midler, såsom 2,4-dinitrobenzen sulfonsyre, trinitrobenzensulfonsyre, sennepsolie eller dextransulfat natrium er mere udtalt i CB

1

– /- mus end i deres vildtype kuld, mens behandling med en CB-receptor-agonist eller med forbindelser blokerer cellulær fjernelse og metabolisme af endocannabinoids, lindrer inflammation [7] – [11]. En CB

1 receptor polymorfi (1359 G /A) er forbundet med en reduceret følsomhed over for ulcerativ colitis hos mennesker [12], selv om så vidt vides det vides endnu ikke, hvordan dette enkelt-nukleotid polymorfisme påvirker cannabinoid signalering. Kryptfoci i tyktarmen, en tidlig patologisk ændring i adenom-carcinom-sekvensen i colorektal cancerudvikling, er dannet som et resultat af azoxymethan behandling hos mus, og behandlingen er forbundet med en stigning i niveauerne af 2-arachidonoylglycerol. Blokade af metabolismen af ​​denne endocannabinoide reduceret forekomsten af ​​kryptfoci, som gjorde behandling med en CB-receptoragonist [13] og, måske overraskende, ved behandling med et CB

1 receptor omvendt agonist [14].

Cannabinoider og endocannabinoids producere potentielt nyttige virkninger på kræft celleproliferation, motilitet og invasive adfærd (anmeldelser, se [15], [16]). I kolorektale cancercellelinjer, har både CB

1-afhængige og -uafhængige virkninger af endogene og /eller syntetiske cannabinoider upon cellelevedygtighed blevet rapporteret [17] – [20]. I en genetisk model for colorectal cancer progression (APC

Min /+ mus), dyr, der mangler CB

1 receptor udviste et større antal små intestinale og tyktarmspolypper end det tilsvarende CB

1

+ /+ mus [21]. Kolorektal cancer patienter, der er enten homo- eller heterozygot for 1359 G /A CB

1 receptor polymorfi viser en kortere overlevelsestid end vildtype-patienter G /G [22]. Endelig har reduceret ekspression af CB

1-receptor-mRNA og protein er rapporteret i colorektal cancer [17], [21], skyldes mindst til dels en forøget methylering af promotorregionen af ​​receptoren [21].

ovenstående data er i overensstemmelse med forslaget om, at den endogene cannabinoid-systemet kan være dysfunktionel i kolorektal cancer, og at en sådan dysfunktion kan påvirke sygdommens sværhedsgrad og /eller resultat. En måde at undersøge denne mulighed er at bestemme niveauet af CB

1 receptor udtryk i en stor kohorte af velkarakteriserede tilfælde af kolorektal cancer med lange opfølgende gange. Dette er blevet gennemført i den foreliggende undersøgelse. I betragtning af at kolorektal cancer er meget heterogen, er der gjort et særligt fokus på relationen af ​​CB

1 immunoreaktive intensiteter med centrale patologiske /molekylære komponenter af sygdommen [23]: fase, tumor kvalitet, mikrosatellit ustabilitet screening status, forekomst af knopper på tumor foran, og CpG ø methylator fænotype (CIMP).

Metoder

Etik Statement

forskningen etiske komité på Umeå universitetshospital (Regional etisk Review Board i Umeå, Sverige) godkendte håndtering af vævsprøver og patientdata i nærværende undersøgelse, herunder den procedure, hvorved patienterne verbalt gav deres informerede samtykke. Dette samtykke blev dokumenteret i hver patient rekord, og dette blev behandlet af den etiske komité at være tilstrækkelig. I databasen bruges til analyserne her blev vævsprøver givet et sagsnummer og år, og navnene patient var ikke angivet i databasen.

Patienter

formalin-fikseret, paraffin -embedded prøver anvendt i den foreliggende undersøgelse blev opnået fra væv indsamlet under primær tumor kirurgisk resektion af kolorektal cancer (crums (kolorektal kræft i Umeå undersøgelse)). Prøverne blev indsamlet med en fortløbende hensigt ved Institut for Kirurgi, Umeå Universitetshospital, Sverige, i perioden 1995-2003, og hvor det er muligt patienterne blev fulgt i op til 113 måneder [24]. Ud over de klinisk-patologiske data rapporteret i [24], har data om mikrosatellit stabilitet /ustabilitet screening status (immunokemisk bestemmelse af ekspressionen af ​​fire fejlparringsreparationsgener proteiner) og CIMP blevet indsamlet og tidligere rapporteret [25]. Forekomst af knopper på tumoren fronten blev evalueret som i [26]. Eksklusionskriterier var utilstrækkelige eller utilgængelige tumor vævsprøve og utilstrækkelig klinisk information. Alt i alt blev 487 sager scoret til enten tumor center eller tumor foran CB

1 receptor immunoreaktivitet (se nedenfor). Den kliniske oplysninger i databasen for disse patienter var som følger: median alder 71 år (interval 26-96, n = 487, hvoraf 269 var mænd og 218 kvinder); cancer placering i højre colon 31,1%, venstre colon 31,1%, rektum 37,8% (n = 482); sygdom trin I 15,5%, II 39,3%, III 21,0%, IV 24,2% (n = 476); tumorklassificering brønd /well-moderat differentieret 48,75%, moderat-fattige /dårligt differentieret 51.25% (n = 480); mikrosatellit stabil 85,0%, mikrosatellit ustabilt 15,0%; (N = 473); CIMP status negativ 50,4%, lav 37,2%, høj 12,4% (n = 484). Endvidere havde 82,4% (af 483 tilfælde) ikke modtage præoperativ strålebehandling (enten 5 × 5 Gy eller 25 × 2 Gy); 75,0% (af 476 tilfælde) havde radikal kirurgi; og 13,7% (af 475 sager) modtog adjuverende kemoterapi.

Måling af CB

1 receptor immunoreaktivitet (CB

1IR) i tumorvæv

De paraffin vævssnit blev afparaffiniseret og rehydreret før antigen hentning i en trykkoger (2100 retriever, Biocare Medical) i Diva Decloaker (Biocare Medical). Prøverne blev efterfølgende placeret i en Ventana halvautomatiseret immunfarvning maskine (Ventana Medical Systems Inc., Tucson, AZ). CB

1-receptor-antistof (ABCAM kat. Nr. 23703, ABCAM plc, Cambridge, UK, fortyndet 1:50), og de sekundære komponenter (iView DAB Detection Kit, Ventana Medical Systems Inc.) blev derefter tilsat. Antistoffet, et kanin polyklonalt hævet til et peptid svarende til C-terminal aminosyrerne 461-472 af den humane CB

1 receptor og som krydsreagerer med menneske, mus og rotte CB

1 receptor ifølge data fra fabrikanterne, er tidligere blevet vist af forskere i Umeå (herunder den tilsvarende forfatter) for at frembringe den passende mønster af farvning i human cerebellum, men ikke at producere immunoreaktivitet i forhjernerne fra CB

1

– /- mus [27 ]. En ExPASy Blast (https://expasy.org/tools/blast/) af peptidsekvensen gav CB

1 og de to splejsningsvarianter som de eneste hits i mennesket. I flere andre arter, blev CB

1-receptorer igen konstateret, den eneste ikke-CB

1 hits er fra proteiner betegnet “ukarakteriseret protein [Gene: CNR1]” (fra svin, hund og kylling) samt ” formodede karakteriseret protein [Gene: PANDA_015085] -.

Ailuropoda melanoleuca

(Giant panda) “og” kromosom 14 SCAF15003, hele genomet shotgun sekvens fragment “i

tetraodon nigroviridis

(Grøn pufferfish)

CB

1IR blev vurderet ved en investigator (SBG), som blev blindet for den kliniske status af patienterne. Prøverne blev gradueret på grundlag af den dominerende CB

1 receptor immunoreaktiv intensitet (CB

1IR) i tumor interiører og i tumor invasive fronter og scorede fra 0 (fraværende) til 3 (intens) for cellerne . Når alle prøver var blevet scoret, investigator gentog proceduren (uden adgang til de tidligere scoringer) og derefter sammenlignede scorer på de to kørsler. Tilfælde, hvor de scoringer var divergerende blev derefter vurderet en tredje gang, igen uden adgang til de tidligere scoringer. For tumor forreste prøver scoret, for eksempel, var der 53 tilfælde, hvor den første og anden scoringer var uenig, hovedsagelig som følge fejlagtige scoringer fra den indledende fase af den første løb. De endelige score blev derefter optaget af en anden investigator (CJF) i databasen til analyse.

Statistiske evalueringer

Kaplan-Meier overlevelse analyser, Fishers eksakte test og χ

2 tests blev gennemført anvendelse af den statistiske pakke indbygget i GraphPad Prism 5 computerprogram til Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Cox proportional-farer og binære logistiske regression analyser blev udført ved hjælp af IBM SPSS statistik 19 software til Macintosh (IBM Inc., Somers, NY, USA). For at overleve analyser blev sygdomsspecifikke begivenheder defineret som død med kendt dissemineret eller tilbagevendende sygdom ( “†

CA”). Døden fra andre årsager blev censureret, som var de tilfælde, hvor patienten var stadig i live på tidspunktet for sidste opfølgning. Varigheden af ​​begivenhed overlevelse er defineret som tiden fra diagnosen, indtil enten datoen for kolorektal cancer død, død andre årsager, eller hvis der ikke døden indtraf, indtil datoen for den sidste opfølgning.

Resultater

CB

1IR immunhistokemi

Indledende undersøgelser blev foretaget ved hjælp af den samme batch af antistoffet som i en tidligere undersøgelse foretaget af forskere i Umeå bruger væv microarrays fra prostatakræft prøver [27]. Vi fandt, at ved en fortynding på 1:300, CB

1IR blev fundet i epitelceller krypterne, med spredte positivitet i subepiteliale inflammatoriske celler (Fig. S1A), en konstatering konsistent med studier af CB

1IR i den normale colon [5], [6]. Et eksempel på tumorvæv farves med denne batch er vist i fig. 1B. På grund af begrænsede mængder af antistof tilbage, brugte vi en senere batch af ABCAM antistof (batch 761.993) for hovedundersøgelsen, og fandt, at en lavere fortynding (1:50) var påkrævet for god immunfarvning. Et eksempel på farvning ses i fig. 1A, med en tilsvarende seriel sektion uden primært antistof er vist i fig. 1B.

Snit fra den samme sag blev anvendt i nærvær (panel A) og fravær (panel B) af det primære antistof. Mål forstørrelse er 10 ×.

Den bedste specificitet test for immunkemi anses for at være brugen af ​​knockout kontrol [28]. Vi fandt, at passende immunokemisk farvning blev set i hjernerne hos vildtypemus, hvorimod dette ikke var til stede fra hjerner af CB

1

– /- mus (. Fig S2). Ashton [29] har for nylig anført, optiske densitet histogrammer er anvendelig til at skelne mellem en ændring i mønstret for immunomærkning (som skal ses for en sand tab af signalering i en knockout) sammenlignet med en reduktion i mærkning intensitet (hvilket ville rejse en spørgsmål om gyldigheden af ​​antistoffet). Optiske densitet histogrammer for vores vildtype og CB

1

– /-. Væv er klart forskellige (. Ses bedst for de højere forstørrelse dias, Fig S2), i overensstemmelse med god antistofspecificitet [29]

En almindelig måde at teste for antistofspecificitet er at undersøge preadsorbtion af antistoffet med det immuniserende peptid, selv om nytten af ​​denne foranstaltning er blevet sat spørgsmålstegn [30]. Ikke desto mindre blev en række forsøg under anvendelse af præinkubation af antistoffet med det immuniserende peptid (Abcam, katalog nr. 50.542) også udføres. Imidlertid præinkubering med det immuniserende peptid stærkt forøget den observerede immunreaktivitet stedet blokeret, og gav et temmelig tilfældigt mønster af immunoreaktivt farvning (data ikke vist). Det immuniserende peptid (aminosyresekvens MSVSTDTSAEAL) har to negativt ladede aminosyrer (aspartat og glutamat), fem polære aminosyrer (tre serin, threonin to) og ingen positivt ladede aminosyrer. Det er velkendt, at negativt ladede peptider binder til glas, og vi konkludere, at vaskeproceduren i Ventana teknikken, og samtidig være tilstrækkelig til at tilvejebringe god specificitet

per se

(som set i knockout-musene), er ikke tilstrækkelig til at fjerne antistof-bundne positiv kontrol peptid vedhængende ikke-specifikt til glas og /eller at zwitterioniske lipider.

Fordeling af CB

1IR scorer i tumoren center og fronter

i alt af 483 (tumor indvendig) og 486 (tumor front) sager blev scoret for CB

1IR intensitet og trådte i databasen. Både plasmamembranen og cytoplasmatisk CB

1IR blev scoret, så værdierne repræsenterer den samlede pulje af CB

1-receptorer. Nuklear farvning af CB

1IR (findes i 42 tilfælde) blev ikke scoret. Frekvensen fordelinger af CB

1IR for tumor center og fronter var ens, med en score på 0 returneres til 77 og 60 tilfælde; en score på 1 for 196 og 185 tilfælde; en score på 2 for 140 og 156 sager; og en score på 3 for 70 og 85 tilfælde (numre er tumor center og fronter, henholdsvis). Der var ingen signifikant forskel i fordelingen mønster af de to sæt scorer (p 0,1, χ

2 test). Det blev bemærket, at de scorer for de to regioner var ikke altid det samme for en given sag. Faktisk i de 482 sager scoret for både tumor center og front, de scoringer var den samme i kun 319 (66%) af tilfældene, er højere i tumoren foran i 110 (23%) tilfælde og højere i tumoren center i 53 (11%) tilfælde. Følgelig hele denne undersøgelse, både tumor center og tumor forreste scores er blevet analyseret separat. Ikke-maligne væv blev ikke scoret, men generelt niveauet af immunoreaktivitet syntes at være lavere i stedet højere end set for tumorvæv.

Foreningen af ​​CB

1IR med patientkarakteristika ved kirurgi

i betragtning af frekvensfordelingen af ​​CB

1IR, analyserne blev udført under anvendelse af en simpel median split, dvs. CB

1IR 2 og ≥2. Brug af hele datasættet for at søge efter variabler, en binær logistisk regression med parametrene køn, anlæg (dvs. højre colon, venstre tyktarm, endetarm), strålebehandling (før operation), sygdomsstadie, tumor histologisk bedømmelse (dvs. differentiering), tumortype (dvs. mucinøs eller ikke-mucinous), mikrosatellit ustabilitet screening status [stabil (MSS) eller ustabil (MSI)], mængden af ​​lymfocytter mod tumoren foran og hyppigheden af ​​tumor knopper (små aggregater af tumorceller ved tumorinvasion foran, [31]) blev udført. Af disse variabler, kun tumoren histologisk bedømmelse (p 0,005) og mikrosatellit instabilitet screening status (p 0,05) var signifikant associeret med CB

1IR (data ikke vist). Disse virkninger kan simpelthen visualiseres ved at dividere datasæt i fire grupper på basis af de to væsentlige parametre (fig. 2). Størstedelen af ​​sagerne blev klassificeret som MSS, og den detaljerede CB

1IR fordelinger for de MSS sager, der ikke fik strålebehandling før operationen er sammenfattet i tabel 1. I både tumoren center og tumor fronter, der er flere tilfælde, med en CB

1IR≥2 for MSS tilfælde med moderat-ringe /dårlig tumor differentiering end med godt /godt moderat differentierede tumorer. I MSI tilfælde er denne effekt af tumoren histologiske klasse ikke set, og sagerne har en lignende CB

1IR distribution til de moderat fattige /dårligt differentierede MSS tilfælde (fig. 2). Yderligere analyse af de 62 sager med MSI scorede for CB

1IR som ikke fik strålebehandling før biopsi viste ingen signifikant sammenhæng af tumor center eller foran CB

1IR med enten sygdom fase (her iscenesætter I og II blev kombineret da kun 4 tilfælde med trin i blev bedømt for tumor center CB

1IR), tumorklassificering, hvorvidt tumorerne var mucinøs eller ikke-mucinous, forekomst af lymfocytter ved tumoren foran eller CIMP status (p 0,1, Fishers eksakte test eller χ

2 test, som er relevant, data ikke vist). For køn, de p-værdier for CB

1IR distributioner var 0,069 og 0,18 for tumor center og front, henholdsvis (Fishers eksakte test), og forekomsten af ​​knopper på tumoren foran, de p-værdier (χ

2 test) var 0,086 og 0,073, henholdsvis (data ikke vist)

Felt A, tumor center.; Panel B, tumor front. Dataene er inddelt efter tumor histologisk bedømmelse (w-m, godt /godt moderat differentieret; m-p, moderat-ringe /dårligt differentieret) og mikrosatellit stabilitet (MSS, stabil, MSI, ustabilt). Den χ

2 og dermed p-værdier er for de data, grupperet som en 4 × 2 matrix (hvor 2 er CB

1IR). n henviser til det samlede antal sager for hver bar.

En væsentlig forskel mellem MSS og MSI er den større forekomst af en høj grad af CpG ø methylering i sidstnævnte [32]. I vores datasæt, af de 467 sager scorede for mikrosatellit ustabilitet screening status, CIMP status og tumor center CB

1IR, de CIMP distributioner var: MSS (n = 396), negativ 225 (57%), lav 153 (39 %) og høj 18 (4,5%); MSI (n = 71), negativ 15 (21%), lav 17 (24%) og høj 39 (55%) (p 0,0001, χ

2 test). Når CIMP status af prøverne blev tilsat til den binære logistisk regression af hele datasæt med parametrene beskrevet ovenfor, blev signifikant effekt af tumoren histologiske grad bevaret (p 0,005) for både tumor center og foran CB

1IR , men virkningen af ​​mikrosatellit instabilitet screening status blev tabt for tumor centre (p 0,1), men ikke for tumor fronter (p 0,05) (data ikke vist). For at undersøge dette yderligere, blev dataene for prøverne opdelt i tre CIMP grupper: negativ, lave og høje uanset mikrosatellit ustabilitet screening status eller om patienterne havde fået strålebehandling inden operationen. Der var en klar indflydelse CIMP status på resultaterne, hvor effekten af ​​tumoren histologiske klasse blev set i de tilfælde med et CIMP-negativ score, men ikke i de tilfælde, med en CIMP-høj score, de CIMP-lave sager bliver et sted i midten (fig. 3). Denne analyse har ikke taget højde for den mikrosatellit instabilitet screening status af sagerne med henblik på at opnå tilstrækkelige gruppestørrelser. Men et lignende mønster ses, når MSS og MSI tilfælde analyseres separat, selvom som en advarsel skal det bemærkes, at nogle af de gruppe størrelser er meget små (fig. S3).

Panel A, tumor center; Panel B, tumor front. Dataene er inddelt efter tumor histologisk bedømmelse (w-m, godt /godt moderat differentieret; m-p, moderat-ringe /dårligt differentieret) og CIMP status. Af de 473 sager scorede for tumor center CB

1IR, 389 blev klassificeret som MSS, 71 som MSI og 13 ikke er klassificeret i databasen. De tilsvarende tal for tumor foran CB den

1IR var 392, 71 og 13, henholdsvis. De p-værdier er for Fishers eksakte test. Den samlede (dvs. CB

1IR 2 og ≥2). Antallet af sager er vist lukket inden for hver bar

Foreningen af ​​CB

1IR med sygdom udfald

Sagerne i databasen var blevet fulgt i op til 113 måneder [24] tillader indflydelse CB

1IR score ved diagnose på resultatet sygdom, der skal bestemmes. Brug af hele datasættet (dvs. selv de tilfælde, hvor CB

1IR blev ikke scoret, en univariate Cox proportionel risiko regressions analyse på hele datasættet angivet, at administrationen af ​​strålebehandling før operationen blev, ikke overraskende, der er forbundet med udfaldet sygdom (Exp ( B) 0,60 [95% CI 0,40-0,91] p. 0,05), hvor antallet af sager, der ikke modtager /modtager strålebehandling var 441/102 Cox proportionel risiko regressions analyse er en test bruges til at bestemme bidraget fra parameter (s) under undersøgelse på sygdomsspecifikke overlevelse uden at antagelser med hensyn til arten af ​​overlevelse kurven. foranstaltningen Exp (B), også kaldet hazard ratio, angiver ændringen i risiko som parameter, der undersøges, er ændret fra standard parameter (her ingen radioterapi) på prøve parameter (her strålebehandling). i dette tilfælde er strålebehandling reducerede risikoen for dødsfald forårsaget af sygdommen, da Exp (B) værdien var signifikant lavere end enhed. for at fjerne indflydelsen af ​​denne parameter, CB

1IR data blev analyseret kun for de tilfælde, som ikke modtog strålebehandling. Desuden blev de MSS og MSI tilfælde analyseret separat.

For MSS tilfælde, en univariate Cox proportionel risiko regressions analyse ikke påvist en signifikant effekt af enten tumor interiør eller foran CB

1IR på sygdoms- specifik overlevelse. Men når en bivariate analyse blev foretaget med sygdomsstadium som den anden parameter, en meget signifikant bidrag CB

1IR blev set (tabel 2). Dette blev bekræftet i Kaplan-Meier overlevelse plots: for hele datasættet, var der ingen signifikant bidrag tumoren interiør CB

1IR (. Figur 4A) mens der i tumor fase II (hvor tumorer har infiltreret muscularis propria i tyktarmen eller endetarmen, men ikke har givet anledning til lymfeknudemetastaser), og i tumor stadie IV (hvor tumorer har spredt sig til andre organer), sager med en CB

1IR≥2 har en dårligere sygdomsspecifik overlevelse end sager med en CB

1IR 2 (. figur 4B og D, definitioner af sygdom iscenesættelse givet i [33]). Ingen forskel blev set for tumor fase III, selv om det skal bemærkes, at dette er en meget heterogen gruppe, at antallet af sager var mindre end for sygdom stadier II og IV og den undergruppe analyser lider lav effekt. Der var kun tre patienter diagnosticeret med stadium I colorectal cancer (hvor tumoren kun har infiltreret den submukøse lag af tyktarmen eller endetarmen, og har ikke spredt sig til lymfeknuder eller andre organer), der døde som følge af deres kræft i løbet af føl- up periode, hinder analyse af den indflydelse, CB

1IR på sygdomsspecifikke resultat i denne patientgruppe. I tilfælde af tumoren forreste CB

1IR, den signifikant virkning på tumor udfald i scenen II-patienter blev også set, men ikke i trin IV patienter (fig. 4 og data ikke vist henholdsvis). I fase II-sager, de 5 års sandsynligheder for event-fri overlevelse var: 85 ± 5 og 66 ± 8%; tumor interiør, 86 ± 4% og 63 ± 8% for CB

1IR 2 og CB

1IR≥2 grupper hhv. Det kan bemærkes, at nogle af de fase II-sager døde inden for en måned af kirurgi. Men når disse sager blev udelukket, det betydelige bidrag fra CB

1IR til sygdomsspecifikke udfald blev bevaret (data ikke vist). Efter yderligere inddeling af fase II-sager i henhold til kræft site, et væsentligt bidrag af både tumor center og front CB

1IR på sygdomsspecifikke overlevelse blev set for rektal kræft, men ikke for kolon kræft, selvom retningen ( dvs. dårligere overlevelse for en høj CB

1IR) var den samme. Det er vigtigt at bemærke, at fortolkning af resultater med disse undergrupper er begrænset af en lav effekt og understøttes ikke af Cox analyser (se nedenfor).

Kaplan-Meier afbildninger af sygdomsspecifikke overlevelse for tumor regioner og sygdomsstadier vist. Vist i figurerne er antallet af tilfælde (n), efterfulgt af det antal, der døde som følge af den kolorektal cancer (†

ca). Den χ

2 værdi i tallene er fra log-rank (Mantel- Cox) test sammenligne de to kurver; ** P 0,01, * p 0,05,

† 0,05 p 0,1;

NSP 0,1. Den tilsvarende χ

2 værdier for tumor foran iscenesætter III og IV var 0,24

NS og 1,44

NS hhv.

Det faktum, at i MSS patienter CB

1IR er forbundet med tumoren histologisk klasse på kirurgi kan naturligvis betyde, at foreningen beskrevet ovenfor, er simpelthen en afspejling af indflydelsen af ​​tumoren histologisk bedømmelse ved udfald sygdom. Denne mulighed blev undersøgt ved hjælp af multivariat Cox proportionel risiko regressions analyser (tabel 2), hvor det blev konstateret, at tumoren histologiske kvalitet forudsat additiv prognostisk information, der ses med tumoren center CB

1IR når sygdommen scenen var også inkluderet som en parameter. I modsætning hertil tumor foran CB

1IR parameteren mistet betydning. Men når forekomsten af ​​knopper på tumoren fronten var også inkluderet (i sig selv en prognostisk faktor), blev indflydelsen af ​​tumoren histologiske grad efter udfaldet sygdom reduceret, hvorimod indflydelsen af ​​både tumor center og foran CB

1IR var signifikant (tabel 2). Disse data tyder på, at den prognostiske betydning af tumor center og muligvis også tumor foran CB

1IR er ikke sekundær til sin tilknytning til tumoren histologiske klasse. Yderligere analyse viste, at den prognostiske betydning af CB

1IR forblev da CIMP status, køn og tumor-regionen blev inkluderet i den multivariate analyse (tumor center, Exp (B) 1,77 [95% CL 1,16-2,72, p 0,01; tumor foran Exp (B) 1,67 [95% CL 1,11-2,50] p. 0,05)

for MSI tilfælde, ingen konklusioner kunne drages, om CB

1IR påvirket på sygdomsspecifikke overlevelse i fase II-sager, simpelthen på grund af de 32 sager, der faldt ind under denne kategori (efter udelukkelse af sager, der modtager strålebehandling før operationen), kun én døde af kræft i løbet af opfølgningsperioden.

diskussion

den foreliggende undersøgelse var motiveret af data fra både dyrkede celler og patientprøver antyder, at en dysfunktionel endocannabinoid signalsystem er involveret enten i patogenesen og /eller som følge af colorektal cancer [13], [14], [17 ], [21], [22]. Indledningsvis er det værd at kommentere på det faktum, at både celleoverfladen og cytoplasmatisk CB

1 receptorer blev scoret. CB

1-receptorer er ofte betragtes som celleoverfladereceptorer, men det er godt etableret i mange celler og væv, som de er blevet fundet intracellulært [34] – [37], som ville forventes for receptorer, der internaliserer efter vedvarende agonist stimulering [38], [39]. Det er blevet foreslået, at disse intracellulære receptorer er aktive og par til ekstracellulært signal-regulerede kinase [35], selv om andre forfattere ikke har set intracellulær co-lokalisering af CB

1-receptorer med Ga-underenheder [39]. Naturligt forekommende ligander for CB

1 receptorer er stærkt lipofilt, og dermed plasmamembranen er ikke en barriere for deres cellulære penetration. Ekstracellulær signal-kinase er et vigtigt signalmolekyle, og har været impliceret i antiproliferative virkninger af cannabinoider i en række forskellige cancercellelinier [40], så det er ikke urimeligt (og teknisk betydeligt mindre svært) at score det kombinerede intensitet fra plasmamembranen og intracellulær CB

1-receptorer. Der er tre vigtigste resultater i fra undersøgelsen, og disse diskuteres igen.

1.