PLoS ONE: Infiltration af Alternativt aktiverede makrofager i kræftvæv er forbundet med MDSC og Th2 polarisering i patienter med esophageal kræft

Abstrakt

Myeloide afledt suppressor celler (MDSCs) ekspandere i kræft bærer værter og bidrage til tumor immune skatteunddragelse. M2 makrofager udgør en stor cellulær komponent af cancer-relaterede inflammation. Men sammenhængen mellem cirkulerende MDSCs og infiltrere M2 makrofager i tumorvæv fra patienter med kræft i spiserøret (ECA), og dens potentielle forhold til polarisering af Th2 celler fortsat uklare. I den foreliggende undersøgelse viste vi niveauet for MDSCs i PBMC og ARG1 i plasma blev signifikant forhøjet i ECA patienter, og den øgede forhold mellem MDSC i PBMC var tæt relateret til ekspressionen af ​​CD163 i cancervæv. Desuden ECA patienterne udviste bemærkelsesværdige stigninger i mRNA niveauer af IL-4 og GATA3 samt protein niveauer af IL-13 og IL-6, men IFN-γ og IL-12 i perifert blod blev reduceret. Vores data viser, at de øgede Th2 cytokiner er forbundet med MDSCs og M2 makrofager polarisering, og fremme infiltration af CD163

+ M2 makrofager i kræft væv, som fremmer dannelsen af ​​immunosuppressive mikromiljø i ECA-patienter.

Henvisning: Gao J, Wu Y, Su Z, Amoah Barnie P, Jiao Z, Bie Q, et al. (2014) Infiltration af Alternativt aktiverede makrofager i kræftvæv er forbundet med MDSC og Th2 polarisering i patienter med esophageal kræft. PLoS ONE 9 (8): e104453. doi: 10,1371 /journal.pone.0104453

Redaktør: Jacques Zimmer, Centre de Recherche Public de la Santé (CRP-Santé), Luxembourg

Modtaget: Marts 4, 2014 Accepteret: 9 jul 2014; Udgivet: 21 August, 2014

Copyright: © 2014 Gao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (31270947, 31170849 og 30972748, https://www.nsfc.gov.cn/), Natural Science Foundation i Jiangsu-provinsen (BK2011472) og postdoc Foundation of China (2012M511705 ). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

kræft i spiserøret (ECA) er en af ​​de mest almindelige maligne lidelser over hele verden og den fjerde førende kræft død i Kina [1] – [3]. Der er stigende beviser på den afgørende rolle, immunsystemet i maligne tumorer, men de præcise mekanismer i immun graduering i ECA patienter forbliver undvigende. I det seneste årti har den rolle, som immunosuppressive og cancer-fremmende myelomonocytisk rum inde i tumoren miljø også modtaget megen opmærksomhed [4]. Selvom mekanismer er ufuldstændigt forstået, kræft fremmer akkumuleringen af ​​en heterogen pulje af knoglemarv-afledte umodne, ringe differentierede myelomonocytiske celler (monocytter, neutrofiler, umodne makrofager og dendritiske celler), der kaldes myeloide afledte suppressorceller (MDSCs), som er større vært komponent bidrager til immunosuppressive miljø. I patologiske tilstande, en delvis blokeret differentieringen af ​​umodne myeloide celler ind modnet myeloide celler resulterer i en udvidelse af MDSCs [5]. For nylig er det blevet klart, at den undertrykkende aktivitet af MDSCs kræver forskellige faktorer, som fremmer deres ekspansion eller inducerer deres aktivering. Disse faktorer, som omfatter IL-4, IL-13, ligander for Toll-lignende receptorer (TLRs), og transformerende vækstfaktor-β (TGF-β), aktiveres flere forskellige signalveje i MDSCs der involverer STAT6 og nuklear faktor-KB (NF-KB).

Svarende til MDSCs, makrofager er en forskelligartet population af myeloide celler, der undergår specifik differentiering afhængig af stimulerende midler, som dokumenteret udførligt. Nylige immunologiske undersøgelser har identificeret to forskellige stater i det polariserede makrofagaktivering: den klassisk aktiveret (eller M1) og de alternativt aktiveres (eller M2) makrofag fænotyper. M1 makrofager er typisk aktiveres af IFN-γ og LPS, hvorimod M2 makrofager aktiveres af IL-4 og IL-13 [6]. M1 makrofager er tumordræbende og fremme tumor afvisning, mens M2 makrofager fremmer tumor progression [7] – [9]. Både M2 ​​makrofager og MDSCs er en vigtig kilde til immunosuppression, der tillader tumor-flugt fra effektive anti-cancer svar, men ingen oplysninger om forholdet mellem M2 makrofager og MDSCs i udviklingen af ​​kræft i spiserøret er i øjeblikket tilgængelig.

en spændende observation er blevet beskrevet i laboratoriet af Dr. Teramoto, hvis gruppe viser, at samtidig aktivering af Th1 funktion kan forøge styrken af ​​dendritisk celle-baserede cancerimmunterapi [10]. I vores tidligere undersøgelse, har vi fundet, at der er en fremherskende Th2-fænotype hos patienter med gastrisk cancer [11]. Det formodede, at ubalancen i Th1 /Th2 kan bidrage til forekomsten og udviklingen af ​​tumor. MDSCs og /eller M2 makrofager, som store vært komponenter, der bidrager til den undertrykkende miljø tumor immunitet [12], deres polarisering bør være relateret til immun balance lidelser. I den aktuelle undersøgelse, analyserede vi niveauerne af M2 makrofager og MDSCs i ECA patienter, detekteres ekspressionen af ​​nogle relaterede faktorer, herunder Th1 /Th2 type cytokiner og vurderet forholdet mellem Th2-celler og M2 makrofager eller MDSCs. Det overordnede mål med undersøgelsen var at bidrage til en bedre forståelse af betydningen af ​​MDSCs og M2 makrofager fra patienter med kræft i spiserøret i Th2-celle polarisering tilstand.

Materialer og Metoder

Patienter

Halvtreds nydiagnosticerede ECA patienter, der fik behandling på Affiliated Folkets Hospital i Jiangsu University blev inkluderet i denne undersøgelse: 38 mænd og 12 kvinder, med gennemsnitsalder 61.97 ± 1,24 år. Ingen af ​​patienterne havde undergået strålebehandling eller kemoterapi før starten af ​​den aktuelle undersøgelse. Karakteregenskaber af ECA patienter blev opsummeret i tabel 1. Alle primære tumor sager blev iscenesat klinisk overensstemmelse med retningslinjerne fra Den Internationale Union for Cancer Kontrol og amerikanske fælles udvalg om kræft (UICC-AJCC) opdateret tumor- node-metastaser (TNM) cancer staging-systemet [13]. Tredive raske frivillige uden nogen kronisk inflammatorisk tilstand blev undersøgt samtidig som kontrol, der omfatter 24 hanner og 6 hunner. Tilmelding fandt sted mellem marts 2011 og december 2012. Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité i Jiangsu Universitet og skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle personer.

Cell forberedelse

Perifere blodprøver blev indsamlet fra ECA patienter og raske frivillige. Perifere mononukleære blodceller (PBMC’er) blev isoleret ved Ficoll-Hypaque densitetsgradient centrifugering (GE Healthcare). Cellen suspensioner blev delt i to lige store portioner; on blev straks anvendt til forsøgene. Den anden blev kryokonserveret ved -80 ° C og optøet til test på et senere tidspunkt

Flowcytometri

MDSCs befolkning blev defineret som HLA-DR

-. /CD14

– /CD11b

+ /CD33

+. Hepariniseret veneblod var frisk fremstillet af ECA patienter eller raske frivillige. PBMC’er blev isoleret ved standard Ficoll-Hypaque-densitetscentrifugering, og farvet med følgende antistoffer mix: FITC-konjugeret anti-humant HLA-DR, PerCP-Cy5.5-konjugeret anti-humant CD14, APC-konjugeret anti-humant CD11, eller PE-konjugeret anti-humant CD33. Den isotypekontrolantistof blev anvendt i alle tilfælde. Dataindsamling og -analyse blev udført på et FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson, CA, USA) under anvendelse af CellQuest software (Becton Dickinson, CA, USA).

RNA-ekstraktion og kvantitativ realtids-PCR

Efter producentens instruktioner, blev totalt RNA ekstraheret fra PBMC’er ved anvendelse af Trizol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA). Komplementært DNA blev syntetiseret fra 1 pg totalt RNA ved anvendelse RT reagenskit (Takara, Ohtsu, Japan). Til kvantitativ real-time PCR, revers transkriberet cDNA (2 pi) blev amplificeret ved realtids-PCR med SYBR Green Premix EX Taq (Takara, Ohtsu, Japan). Hver prøve blev analyseret to gange med CFX-96 Cycler (Thermal) og det normaliserede signalniveau blev beregnet baseret på dets forhold til den tilsvarende β-actin husholdning signal. Primere anvendt i PCR blev viste i tabel 2.

enzymkoblet immunosorbentassay (ELISA)

Til kvantitativ påvisning af IFN-γ, IL-4, IL-6, IL -13 og ARG1 i plasma, var kommercielt tilgængelige ELISA-kits anvendt ifølge producentens anvisninger (Biovender). Alle prøver blev kørt i partier for at minimere inter-assay variation og kvantificeret under anvendelse af en standardkurve.

Immunhistokemi

ECA væv og parrede tilstødende væv blev fikseret i 10% pufret formalinopløsning og indlejret i paraffin . Serielle sektioner af 4 um blev skåret fra paraffinblokke. CD68 eller CD163 antistof blev anvendt henholdsvis til at identificere makrofager og M2 makrofag subtype. Som negative kontroller blev de primære antistoffer erstattet af et irrelevant isotype anti-muse lgG1. Immunhistokemisk påvisning blev udført ved anvendelse af avidin-biotin-peroxidase metode. En multiheaded mikroskop blev anvendt til at læse immunohistokemiske resultater blev de detekterede celler imødegås ved 10 tilfældigt udvalgte områder af tre forskellige forskere på × 40 forstørrelse. Det endelige resultat blev anslået i henhold til den celle farvedybde og procentdelen af ​​farvede celler.

Statistisk analyse

Den statistiske analyse blev udført med GraphPad Prism, version 5.0, software (San Diego, Californien , USA). Korrelationer mellem variabler blev bestemt ved Spearman korrelationskoefficient. Sammenligninger mellem grupper blev udført ved hjælp af Students uparrede eller parrede

t

test. Forskelle blev betragtet som statistisk signifikant, når

P

-værdi. 0,05

Resultater

Forhøjede MDSCs korreleret med øget plasmaniveau af ARG1 i ECA patienter

MDSCs, defineret som HLA-DR

– /CD14

– /CD11

+ /CD33

+ celler, blev bestemt ved flowcytometri og beregnet som% PBMC. Niveauet af enkelte MDSCs var signifikant forhøjet i ECA patienter sammenlignet med raske kontroller (

P

0,05, figur 1). Som vist i tabel 3, er andelen af ​​MDSCs hos patienter med fremskreden cancer var signifikant højere end den i patienter med tidlig cancer (2,56 ± 0,25% versus 0,77 ± 0,15%;

P

0,05). Endvidere er andelen af ​​MDSCs hos patienter med lymfeknudemetastaser var højere end dem uden lymfeknudemetastaser (3,71 ± 0,34% versus 1,47 ± 0,13%;

P

0,0001). Der var imidlertid ingen signifikante forskelle mellem andelen af ​​MDSCs og patienternes alder, køn, tumorplacering, tumorstørrelse, eller tumorinfiltrerende dybde. Vi målte også plasmakoncentrationen af ​​arg1, som er en af ​​de vigtigste suppressive faktorer [14], [15]. Resultatet viste, at kontrol plasma havde minimal arg1 sammenlignet med ECA patienter (9,57 ± 1,51 ng /ml vs. 28,28 ± 4,10 ng /ml;

P

0,001). Derudover blev en positiv korrelation mellem andelen af ​​MDSCs fra PBMC og plasmaniveau af ARG1 i ECA patienter i efterfølgende tests. Salg

Hyppigheden af ​​MDSCs i PBMC blev analyseret ved flowcytometri, patienter og raske kontroller brugt i dette eksperiment var blevet matchet med køn, alder og antal. a: Repræsentativ diagram af flowcytometrianalyse til cirkulering MDSCs fra raske kontroller. b: Repræsentativ diagram af flowcytometrianalyse til cirkulering MDSCs fra ECA patienter. MDSCs, myeloid-afledte suppressorceller; ECA, esophageal cancer; FSC, forward scatter; FITC, fluoresceinisothiocyanat; PerCP-Cy5.5, peridinin klorofyl protein-cyanin 5.5; PE, phycoerythrin; APC, allophycocyanin.

Forbedret M2 makrofager i ECA patienter

CD163 er en ådselsæder receptor, opreguleres af makrofager i anti-inflammatoriske miljøer [16], og betragtes som en meget specifikke monocyt /makrofag markør for M2 makrofager [17] – [19]. De fleste papirer i metaanalysen anvendte CD68 som markør for tumor-associerede makrofager (Tams) [20]. CD68, anerkender imidlertid både M1 og M2 makrofager [21]. Derfor brugte vi CD68 og CD163 som markører for makrofager og M2 makrofager hhv. For at analysere, om lokaliseringen af ​​CD163

+ og CD68

+ makrofager havde en korrelation til kliniske karakteristika, fordelingen af ​​CD163

+ og CD68

+ makrofager i tumor og tumor-fri væv blev evalueret separat (figur 2). Farvningsresultaterne kategorier blev oprindeligt scoret fra 0 til 3 i makrofaginfiltration tæthed. Resultaterne viste, at de fleste tumorvæv havde højere tætheder af CD163

+ og CD68

+ makrofager infiltration end dem i de tumor-fri væv. De positive udtryk satser CD163

+ og CD68

+ 68% og 78% i kræft væv sammenlignet med 4% og 6% i de tilstødende kræft væv. Desuden blev forøget forhold af MDSC i PBMC fra ECA patienter tæt knyttet til ekspressionen af ​​CD163 i cancervæv (tabel 4-5).

Repræsentative immunohistokemiske billeder viste ekspressionen af ​​CD68 i en cancer-tilstødende væv (en). og en cancer væv (b). Repræsentative immunohistokemiske billeder viste ekspressionen af ​​CD163 i en cancer-tilstødende væv (c). og en cancer væv (d). Normal esophageal pladeepitel (hæmatoxylin-eosin /HE-farvning) (e). Planocellulært esophageal carcinom (HE farvning) (f). Analyse af antallet af CD68

+ makrofager (g). og CD163 + makrofager (h). i kræft og kræft-tilstødende væv, viste resultaterne, at de fleste kræft væv havde større antal CD68 + og CD163 + makrofager infiltration end i kræft-tilstødende væv. Vejviser

Øget IL -4 og GATA3 mRNA mens faldet IFN-γ-mRNA i PBMC fra ECA patienter

De relative ekspressionsniveauer af cytokin gener, der koder IL-4, IL-6, IL-12, IL-13 og IFN-γ, samt transkriptionsfaktorer GATA3 og T-bet blev vurderet ved anvendelse af real-time PCR. Som vist i figur 3, havde ECA patienter forøget udtryk af IL-4 og GATA3 mRNA sammenlignet med raske kontroller (

P

0,05). IFN-y, IL-12 og IL-13 mRNA udtryk i ECA-gruppen var signifikant lavere end i kontrolgruppen (alle

P

0,05). Men ingen signifikant forskel blev fundet i form af T-bet-mRNA-ekspression mellem de to grupper (

P

0,05, ***

P

0,001 vs. kontrolgruppen. NS, ingen signifikant forskel. ECA, esophageal cancer; PCR, polymerasekædereaktion; IFN, interferon; IL, interleukin. De patienter og raske kontroller, der anvendes i dette forsøg var blevet matchet med køn, alder og antal.

Øget IL-6, IL-13, ARG1 i plasma fra ECA patienter

Plasma IFN-γ, IL-4, IL-6, IL-13, og ARG1 blev bestemt ved ELISA. Som vist i figur 4, IL-6 og IL-13-koncentrationer var signifikant højere i ECA patienter sammenlignet med kontrolemnerne (

P

0,05 og

P

0,001). Desuden blev et højere ARG1 findes i plasma fra ECA patienter. Der var imidlertid ingen signifikante forskelle i IFN-γ eller IL-4-koncentration mellem de to grupper.

patienter og raske kontroller, der anvendes i dette forsøg var blevet matchet med køn, alder og antal. Plasmakoncentrationer af IFN-γ (a), IL-4 (b), IL-6 (c), ARG1 (d) og IL-13 (e) blev bestemt ved ELISA. Data blev analyseret ved t-test. *

P

0,05, ***

P

0,001 vs. kontrolgruppen. NS: ingen signifikant forskel, ECA: kræft i spiserøret, ELISA: enzymbundet immunosorbentassay, IFN: interferon, IL: interleukin, ARG1: arginase 1.

Korrelation analyse mellem forskellige cytokiner i ECA patienter

korrelationer mellem de forskellige cytokiner i ECA patienter blev analyseret. Som vist i figur 5, var der en signifikant positiv korrelation mellem niveauerne af ARG1 (MDSCs og M2 associeret cytokin) og IL-13 (Th2 typen cytokin) i plasma fra ECA-patienter. IL-4, som et cytokin af Th2 blev mRNA-ekspression øget efter plasma arg1 ekstraudstyr, men en negativ korrelation blev fundet mellem IFN-γ og ARG1. Hertil kommer, at koncentrationen af ​​IL-13 i plasma viste positiv korrelation med mRNA niveauet af IL-4 i PBMC (r = 0,45,

P

0,05)

A:. Korrelation mellem plasmakoncentrationen af ​​ARG1 og de procentdele af cirkulerende MDSCs i ECA-patienter. Positiv korrelation blev fundet mellem ARG1 og MDSCs (r = 0,493,

P

= 0,006). b: Korrelation mellem plasmakoncentrationen af ​​ARG1 og mRNA-niveauet af IL-4 fra ECA patienter. Positiv korrelation blev fundet mellem ARG1 og IL-4 mRNA (r = 0,510,

P

= 0,009). c: Sammenhæng mellem plasmakoncentrationen af ​​ARG1 og IL-13 fra ECA patienter. Positiv korrelation blev fundet mellem ARG1 og IL-13 (r = 0,455,

P

= 0,017). d: Korrelation mellem mRNA-niveauet af IL-4 og plasmaniveau af IL-13 fra ECA patienter. Positiv korrelation blev fundet mellem IL-4 og IL-13 (r = 0,484,

P

= 0,016). e: Korrelation mellem mRNA-niveauet af IFN-γ og plasmaniveau af ARG1 fra ECA patienter. Negativ korrelation blev fundet mellem IFN-γ og ARG1 i ECA-patienter (r = -0,381,

P

= 0,038). f: Sammenhæng mellem antallet af CD163

+ makrofager i kræft væv og de procentdele af cirkulerende MDSCs i PBMC fra ECA-patienter (r = 0,410,

P

= 0,003). g: Sammenhæng mellem antallet af CD163

+ makrofager i kræft væv og plasmakoncentrationen af ​​IL-13 fra ECA patienter (r = 0,405,

P

= 0,036)

diskussion

MDSCs, under normale forhold migrere til forskellige perifere organer og differentiere i dendritiske celler, makrofager og /eller granulocytter. Imidlertid faktorer produceret i tumormikromiljøet, alene eller i kombination, fremme akkumuleringen af ​​MDSCs, forhindre deres differentiering og inducerer deres aktivering. I tumoren miljø, kan MDSCs også differentiere til TAM’er, som er en unik fænotype, hvis funktion er forskellig fra MDSCs [5]. Makrofager er plasticceller, da de kan skifte fra en aktiveret M1 tilstand tilbage til en M2 /TAM’er tilstand, og omvendt, forudsat induktionen af ​​specifikke signaler. Makrofager infiltrerer i kræft væv betegnes som TAMs, som er tæt involveret i udviklingen af ​​tumor mikromiljø. Heterogenitet fænotyper observeres blandt TAM’er i forskellige ondartede tumorer, og en betydelig del af TAM’er /M2 fænotype er associeret med en dårligere klinisk prognose og høj grad af malignitet [22]. I 2007 Sinha et al. [23], anvendes den spontant metastatisk 4T1 musebrystcarcinom, og viste, at MDSCs forringet tumor immunitet ved at undertrykke T-celleaktivering samt interaktion med makrofager til at øge IL-10 og falde IL-12-produktion og dermed fremme en tumorfremmende typen 2 respons, en proces, som kan delvist er tilbageført i gemcitabin. Baseret på dette, vores undersøgelse målrettet ECA og undersøgt MDSCs i perifert blod, makrofager i tumorvæv og niveauet for nogle relaterede faktorer. Som forventet blev øget MDSCs fundet i perifert blod, og en vis mængde af M2 makrofager infiltreret ind i tumor sites, som viste, at disse cellepopulationer var involveret i patogenesen af ​​ECA. Desuden øget plasmaniveau af arg1, der var korreleret med MDSCs og M2 makrofager funktioner, blev også fundet i ECA-patienter. Navnlig blev forøget forhold af MDSCs i PBMC’er fra ECA patienter tæt knyttet til ekspressionen af ​​CD163 i cancervæv.

Tidligere viste vi, at der var en fremherskende Th2 fænotype i mavecancerpatienter, og man mente, at Th2 associerede cytokiner IL-4, IL-13, IL-6 og transkriptionelle faktorer GATA3 måske nøje relateres til polariseringen af ​​M2 og MDSCs, og fremmet et immunosuppressivt miljø hos kræftpatienter. I den foreliggende undersøgelse påviste vi, at ECA patienter udviste bemærkelsesværdige stigninger i mRNA niveauer af IL-4 og GATA3 samt plasmaniveauerne for IL-13 og IL-6. I modsætning hertil blev plasmaniveau af IFN-γ og mRNA-niveauer af IFN-γ og IL-12 faldt. Der var en positiv korrelation mellem mRNA-niveauet af IL-4 og plasmaniveau af IL-13, og disse to cytokiner øget efter ARG1 forbedring i plasma. I mellemtiden blev en negativ sammenhæng fundet mellem IFN-γ og ARG1. De foreliggende data viste, at der var en fremherskende Th2-fænotype i ECA patienter, og det var i overensstemmelse med forøget niveau af arg1, som var MDSCs og M2 associeret cytokin. For nylig Gabitass et al. [24] rapporterede, at MDSCs var forhøjet i pancreas og gastrisk cancer, og demonstrerede de var en uafhængig prognostiske faktorer og associeret med signifikant forhøjelse af Th2 cytokin IL-13. Disse resultater var delvis i overensstemmelse med vores data. Det skal nævnes, at IL-4-mRNA blev forøget i PBMC, mens ekspression af IL-4-protein i plasma uomdannet hos cancerpatienter. Det var ikke en helt ensartet resultat, som kan grundet IL-4 gentranskription og dens proteinsekretion var ikke synkrone, yderligere forskning var nødvendig for at undersøge dette nærmere.

Nogle forskere mener, at IL-4 og IL-13 er nok til at spille vigtige roller i M2 makrofager aktivering [6]. Desuden Gabitass RF et al. [24] og Pesce JT et al. [25], viste, at de Th2-cytokiner: IL-4 og IL-13 kan opregulere arginase aktivitet og derved øge undertrykkende funktion MDSCs og M2 makrofager. Derfor foreslår vi, at IL-4, IL-13 og ARG1 er nøglefaktorer medierer fordelingen af ​​MDSCs og M2 makrofager, og er nært beslægtede med Th2-celleaktivitet polarisering. Östrand-Rosenberg et al. [26], viser, at cross-talk mellem MDSCs og makrofag fremmer synergi mellem disse celler derved øger immun undertrykkende virkninger af de enkelte cellepopulationer. Som følge heraf er MDSCs og makrofager i tumoren mikromiljø uløseligt forbundet således at funktionen af ​​én befolkningen er påvirket af mængden af ​​de andre populationer [27] – [30]. I en nylig gennemgang af overlevelse analyser blev det konstateret, at mange undersøgelser har indikeret kliniske og patologiske egenskaber ved patienter med esophageal carcinoma som forklarende variabler med hensyn til overlevelse, og viste en bedre overlevelsesrate for kvinder eller unge patienter. Årsagerne hertil vil sandsynligvis omfatte en kombination af bedre generelle sundhed og mere effektiv immun tilstand [31] – [32]. Der var dog begrænsninger med den nuværende undersøgelse, hvor sammenhængen mellem MDSCs% og de kliniske patologiske faktorer ECA patienterne ikke blev analyseret, bør det overvejes i vores fremtidige arbejde.

Konklusion

vi afslørede en interessant forbindelse mellem Th2-celler associerede cytokiner og MDSCs eller M2 makrofager i ECA. De påviste i IL-4 ændringer, IL-6, IL-13 og GATA3 niveauer korrelerede positivt med MDSCs og M2 makrofager aktivering, men IFN-γ spillede den modsatte virkning. Det nære forhold mellem cirkulerende MDSCs og væv infiltration af M2 makrofager indikerede, at infiltration af M2 makrofager i ECA væv kan være relateret til MDSCs polarisering involverer Th2 fordel. Disse resultater giver en bedre forståelse af systemisk immunundertrykkelse såsom interaktionen mellem T-celler og MDSCs eller M2 makrofager, systemiske cytokiner og deres signaleringsveje, og kan bidrage til at udløse nye strategier for anticancerterapi, som er baseret på modulation af de immunosuppressive virkninger af tumor associeret MDSCs, M2 makrofager og Th2 celler.

Tak

forfatterne er taknemmelige for Zhijian Zhang, Sheng Xia, Qixiang Shao og Peifang Yang for fremragende teknisk hjælp. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (31270947, 31170849 og 30972748), Natural Science Foundation i Jiangsu-provinsen (BK2011472) og Postdoc Foundation of China (2012M511705).