PLoS ONE: alloimmune Aktivering Fremmer Anti-Cancer cytotoksicitet efter Rat Liver Transplantation

Abstrakt

Liver transplantation for hepatocellulært carcinom (HCC) resulterer i en bestemt tilstand, hvor immunresponset er potentielt rettet mod både allogene og cancer-antigener. Vi har undersøgt niveauet af immunitet mod kræft i løbet af allogen immunrespons. Mørk Agouti-til-Lewis og Lewis-til-Lewis rottelever transplantationer blev udført, og modtagerne anti-cancer immunitet blev analyseret ved alloimmun aktivering. Forekomsten af afvisning i de allogene modtagere blev bekræftet af en kortere overlevelse (

0,01), øget leverfunktionsprøver (

0,01), tilstedeværelsen af tegn på afstødning på histologi, og en donor-specifikke

ex vivo

blandet lymfocyt reaktion. På tidspunktet for alloimmun aktivering, blod-mononukleære celler fra allogene gruppe vist øget anti-cancer cytotoksicitet (

s Restaurant 0,005), som var forbundet med en forøget naturlig dræber (NK) celle frekvens (

0,05) og en højere monocyt /makrofag aktivering niveau (

0,01). Tilsvarende lever NK-celle anti-cancer cytotoksicitet (

0,005), og lever monocyt /makrofag aktivering niveauer (

0,01) blev også forøget. Den alloimmun-associerede cytotoksicitet blev formidlet gennem NKG2D-receptoren, hvis udtryk blev øget i den afviste graft (

0,05) og NK-celler og monocyt /makrofager. NKG2D ligander blev udtrykt på rotte HCC celler, og dets hæmning forhindrede alloimmun-associerede cytotoksicitet. Selv venter

in vivo

validering, vises alloimmun-associeret cytotoksicitet efter rotte levertransplantation at være knyttet til øgede frekvenser og niveauer for aktivering af NK-celler og monocytter /makrofager, og er i det mindste delvist medieres gennem NKG2D receptor

Henvisning:. Lacotte S, Oldani G, slidser F, Orci LA, Rubbia-Brandt L, Morel P, et al. (2014) alloimmune Aktivering Fremmer Anti-Cancer cytotoksicitet efter Rat Liver Transplantation. PLoS ONE 9 (3): e91515. doi: 10,1371 /journal.pone.0091515

Redaktør: Jacques Zimmer, Centre de Recherche Public de la Santé (CRP-Santé), Luxembourg

Modtaget: December 6, 2013; Accepteret: 11 Februar 2014; Udgivet: 20 Mar 2014

Copyright: © 2014 Lacotte et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra den schweiziske National Science Foundation (PP00P3_139021), den Artères Fonden, Astellas Europæiske Institut, og Boninchi Foundation, Elsie og Carlos de Reuter, og Marie-France og Francis Minkoff Foundation. Christian Toso blev understøttet af en professorat fra den schweiziske National Science Foundation (PP00P3_139021). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Liver transplantation er den mest effektive behandling af patienter med tidlig inoperabel hepatocellulært carcinom (HCC) [1], [2]. Men 15% af modtagerne oplever efter transplantationen HCC tilbagefald, som hurtigt fører til døden i næsten alle patienter [3]. Forskellige strategier er blevet foreslået at mindske denne risiko, herunder en forbedret kriterier transplantation udvælgelseskriterier, målretning af cirkulerende HCC celler, brug af adjuvans anti-cancer medicin og et fremmet anti-cancer immunitet [4].

Transplantationscentre for HCC er en unik tilstand, med immun aktivering rettet mod både allogene donorer og cancer-antigener. Denne dobbelte aktivering er sjældent blevet udforsket. En alloimmun aktivering kan kun være rettet mod specifikke allogene antigener eller være knyttet til en bredere aktivering også fremme en ikke-specifik anti-cancer immunreaktion. Sidstnævnte hypotese er blevet foreslået af en række undersøgelser, der viser en højere risiko for post-transplantation HCC tilbagefald hos patienter med mere dybtgående immun hæmning; for eksempel efter anvendelse af anti-lymfocyt-antistoffer eller ved overeksponering for calcineurinhæmmere [5] – [8]. Desuden har en nedsat ekspression af et NKG2D ligand på HCC tumorer, lav neutrofil-lymfocyt blod-forhold og tumor-associerede makrofag tæller også været forbundet med HCC recidiv [9] – [12].

Ideelt allogen immuniteten bør forhindres, og den anti-cancer immunitet fremmes. En bedre forståelse af den krydstale mellem de to er derfor ønskeligt, for bedre at kunne definere mæglere og de er involveret i hver type immunitet mekanismer. I sidste ende vil disse oplysninger til at definere den ideelle immunosuppression kombination efter levertransplantation for HCC.

Den foreliggende undersøgelse vurderer niveauet af anti-cancer cytotoksicitet i lever, milt og blod efter allogen rotte levertransplantation. Det definerer rollen af specifikke immune celletyper, herunder naturlige dræberceller (NK) celler og monocyt /makrofager, og virkningen af de vigtigste NK celle receptorer.

Materiale og metoder

Dyr, Liver Transplantation og etiske retningslinjer

Eksperimenter blev udført på mandlige Lewis og mørke Agouti (DA) rotter med en vægt 200-250 g (7 til 8 uger gamle, Janvier). De undergik ortotopisk levertransplantation ifølge en protokol tidligere beskrevet [13]. DA-til-Lewis transplantationer (allogen model) blev anset som studiegruppen, og Lewis-til-Lewis transplantationer blev brugt som syngene kontroller (seks dyr i hver gruppe for vurderingen overlevelse). Alle dyr blev passet efter de internationale retningslinjer for Animal Care og etisk godkendelse blev opnået fra den etiske komité ved universitetet i Genève og fra Geneve veterinærmyndighederne (N ° 1052/3653 /3).

rotte HCC-cellelinier

JM-1-celler blev venligst leveret af George Michalopoulos (University of Pittsburg) [14]. MCA-RH7777-celler blev indkøbt fra ATCC (Molsheim, Frankrig). Begge cellelinier blev dyrket i DMEM-medium ved høj glucose niveau (Gibco).

leverfunktionstestning Assessment, Lever Histologi og immunomærkning

For at opdage tegn på lever afvisning, serum leverfunktionsprøver, herunder aspartat aminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALT) og bilirubin blev vurderet på dag ét, tre og ti efter transplantation. Serum niveauer blev målt i samarbejde med den centrale kliniske hospital laboratorium (Synchron LX20). Prøver fra ni dyr i hver gruppe blev analyseret.

Tilstedeværelsen af afvisning blev også vurderet på histologi efter hematoxin /eosin farvning af leverprøver hentes på dag ti efter transplantation. Niveauet for afvisning blev blindt sorteres efter en ekspert lever patolog henhold til Banff klassifikationen [15]. NK-celler blev mærket på kryosektioner med anti-NKRP1 (CD161, 10/78, Biolegend) efterfulgt af Alexa Fluor®555 æsel-anti-muse-IgG (Invitrogen). Makrofager blev mærket på paraffinindlejrede sektioner med polyklonale kanin anti-Iba1 (Wako) efterfulgt af Alexa Fluor®555 æsel anti-kanin IgG (Invitrogen).

perifert blod, milt og lever mononukleære Cell Isolation

halevenen blodprøver (500 pi) blev opsamlet i 150 pi syrecitratdextrose. Lever og milt blev hentet gennem en midtlinie abdominal incision efter 10 U IV heparin injektion. Leveren blev perfusioneret med HBSS indeholdende 0,5 mg /ml collagenase D (Sigma). Det blev skåret i små stykker, resuspenderet i HBSS /collagenaseopløsning, fordøjet ved 37 ° C i 20 min. Cellesuspensionen blev vasket og filtreret gennem en nylonnet. Milten blev skåret i stykker, knust og filtreret gennem en nylonnet. Perifert blod, lever og milt celler blev renset i en Ficoll Paque (GE Healthcare) densitetsgradient. Isolerede mononukleære celler blev vasket og talt.

Blandet lymfocytreaktion og ELISA

Perifere og milt allogene immune aktiveringer blev testet ved hjælp af blandede lymfocyt reaktioner. Celleinkubationer blev udført i plader med 96 brønde i 200 pi RPMI 1640 (Gibco), 10% FCS (Invitrogen), 1 M HEPES (Invitrogen) og 1 U /ml /1 pg /ml penicillin-streptomycin og 0,29 mg /ml L -glutamine (Gibco). Responder Lewis-celler (2,5 x 10

5) fra fire allogen og fire syngene recipienter blev inkuberet med 2,5 x 10

5 bestrålet stimulator DA (eller tredje del) splenocytter (5000 rad) ved 37 ° C /5% CO

2 i 24 timer.

niveauet af interferon gamma (IFNy) blev kvantificeret ved ELISA. Polystyrenplader (Costar) blev overtrukket natten over ved 4 ° C med oprenset anti-rotte yIFN (1:500, klon DB-1, Biolegend) i carbonatpuffer. Plader blev vasket og mættet i 30 minutter med suppleret RPMI 1640-medium. Cellekultursupernatanter blev tilsat i to timer, efterfulgt af biotin anti-rotte IFNy (1:1000, Poly5109, Biolegend), streptavidin-peberrodsperoxidase (1:1000, Biolegend) og substratopløsning (TMB reagens, R 0,05

Resultater

Vurdering af Alloimmunity og afvisning

Tilstedeværelsen af et alloreactivity specifikt set på, fordi nogle allogene rotte-til-rotte liver transplantationsmodeller inducerer kun lave niveauer af alloimmunity uden akut celle afstødning [16]. Som beskrevet i litteraturen, blev de undersøgte DA-til-Lewis ortotopisk rottelever transplantationer knyttet til kortere overlevelse sammenlignet med de syngene transplantationer (median overlevelse: 13 vs. 60 dage, p = 0,0037, data ikke vist). Serum leverfunktionstest (AST og ALT) blev forøget efter dag tre i de allogene modtagere (alle p 0,01 vs. syngene kontroller, figur 1A.). Bilirubin niveau blev forøget efter 10 dage i de allogene modtagere (p = 0,026 vs. syngene kontrol, fig. 1B).

(A) Serum aspartataminotransferase (AST) og alaninaminotransferase (ALT) niveauer efter allogen Mørke agouti-til-Lewis (sort) og syngene Lewis-til-Lewis (hvid) rottelever transplantationer. (B) bilirubin-niveauer efter allogen (sort) og syngeniske (hvid) transplantation. (C) repræsentant hematoxilin-eosinfarvede biopsier på dag 10 efter allogen (højre) og syngeniske (venstre) rotte levertransplantation. (D) efter transplantation blod CD4 /CD8-forhold på dag 7 (D7) og 11 (D11). (E) IFNy sekretion efter mononukleære blodceller (PBMC) fra perifert blandet lymfocytreaktion på dag ti efter transplantation med donor (DA) og tredje del stimulation. * P 0,05, **. 0,01

Tilstedeværelsen af celle afvisning blev bekræftet på dagen 10 histologi og blev gradueret Banff 8 i alle undersøgte allogene modtagere. modtagere syngene kontrol blev gradueret Banff 0 (fig. 1C). Derudover perifere CD4 /CD8-forhold på dag 11 var signifikant lavere i de allogene recipienter sammenlignet med syngene modtagere (2.9

. 3.6, p = 0,0051, fig. 1D). Endelig blev alloimmunity specifikt rettet mod donor-antigener som påvist af dagen 10 blandede lymfocyt reaktioner mod DA splenocytter (supernatant IFNy koncentration: 410 pg /ml

målbart.), Og fraværet af respons mod tredjemand Fisher rotte-antigener (fig. 1E).

Alloimmunity-Associated Perifer Cytotoksicitet

i et forsøg på at vurdere virkningen af afvisning på immunitet anti-cancer, den cytotoksiske aktivitet af perifere immunceller blev testet

ex vivo

mod kræft Yac-1 celler. På tidspunktet for alloimmun aktivering (dag 10), var niveauet af perifere cytotoksicitet steget i de allogene modtagere i forhold til de syngene kontroller og naive rotter (effektor /målrette 40/1: 25,2%

14,7%. og 9,4%, p = 0,0025, fig. 2A). blev observeret Dette mønster på alle testede fortyndinger (4/1, 10/1, 40/1).

(A)

Ex vivo

PBMC anti-cancer cytotoksicitet på dag ti efter allogen og syngene transplantationer og hos naive kontrolrotter ved forskellige effektor /mål-forhold (E /T). (B) Hyppigheden af NKRP1

høje celler (NK-celler) blandt PBMC’er på dag 7 (D7) og 10 (D10) efter transplantation. Flowcytometri dot-plot vurderede gating strategi. (C) Flowcytometri dot-plot og histogram vurdere gating-strategi for monocytter /makrofager (CD172 +) og NKRP1 udtryk niveau på CD172 + celler. (D) Hyppigheden af monocyt /makrofag (CD172 + celler) blandt PBMC’er. (E) Aktivering niveau af monocyt /makrofager (NKRP1 ekspressionsniveau (gennemsnitlig fluorescensintensitet (MFI)) blandt CD172a + celler). * P 0,05, **. 0,01

For at vurdere, om det ændrede cytotoksicitet var relateret til en variation i cellen delmængder, flowcytometri analyser blev udført på PBMCer. NKRP1 (CD161), en C-type lectin membranglycoprotein, er overudtrykt på NK-celler og blev anvendt som en markør for rotte NK-celler [17]. På dag syv, NK-celle frekvens. – Blev (CD3

NKRP1

høj) faldt betydeligt i de allogene recipienter sammenlignet med de syngene kontroller (2,1%

3,4%, p = 0,028, fig. 2B). Denne nedsatte hyppighed af perifere NK-celler er i overensstemmelse med den tidligere observerede migration af NK-celler i leveren tidligt efter allogen transplantation [18]. På dag 10 blev den observerede øgede perifere cytotoksicitet relateret til en forhøjet NK celle frekvens (10,79% i allogen

. 4,9% i syngen, p = 0,048).

monocytter /makrofager kan også være involveret i de cytotoksiske begivenheder mod kræftceller. Dagen 10 monocyt befolkning (CD172a

+) blev øget i både allogene og syngene modtagere i forhold til de naive ikke-transplanterede kontroller, sandsynligvis afspejler en vis grad af ikke-specifik peri-operative immun aktivering (16,6%

10,7%

5,58%, henholdsvis; p = 0,1 til allogen

naive;.. p = 0,023 for syngene

naive, fig. 2D). Dette sagt, den højeste frekvens blev observeret i de allogene modtagere (endnu ikke nå statistisk signifikans, p = 0,455 for allogen

. Syngen). Hertil kommer, at hyppigheden af aktiverede monocytter udtrykker NKRP1 (CD161) var højere i de allogene modtagere i forhold til de syngene kontrol og de naive ikke-transplanterede dyr (gennemsnitlig fluorescensintensitet 1282

. 568

. 438, p = 0,0004, fig. 2E) [19].

Fravær af Alloimmunity-Associated Spleen cytotoksicitet

for bedre at karakterisere den observerede perifere cytotoksicitet, vi vurderede allogene og anti-cancer immune begivenheder i milten. Dagen 10 splenocytter fra allogene rotter stimuleret med donorceller (OB) secerneres flere IFNy end splenocytter fra syngeniske rotter, hvilket bekræfter tilstedeværelsen af en donor-specifikt allogene respons i milten (684

. 99 pg /ml, p = 0,028, fig. 3A). Omvendt sorteret milt NK-celler viste ingen forskel på cytotoksicitet mellem allogene og syngene modtagere (effektor /mål-forhold 10/1: 42.2 vs. 48,3%, p = 0,30, Fig 3B.). Tilsvarende kunne påvises nogen ændring i antallet og fænotype miltceller (data ikke vist).

(A) IFNy sekretion efter splenocyt blandet lymfocyt reaktion på dag ti efter transplantationen med donor og tredje del stimulation . (B)

Ex vivo

milt NK celle anti-cancer cytotoksicitet på dag ti efter allogen og syngen transplantation.

Alloimmunity-Associated Lever mononukleære Cell Aktivering

immunrespons af lever mononukleære celler blev testet på dag 10 efter transplantation. Efter isolation, blev antallet af lever-mononukleære celler steget i de allogene rotter i forhold til deres syngene modstykker (16 × 10

. 5,35 × 10

6 celler /lever, p = 0,004 ).

Denne stigning af antallet af mononukleære celler var relateret til et forøget antal af NK-celler i allogene transplantat (19,5

. 3 i det syngene transplantat, p = 0,006, fig. 4A) og et øget antal af makrofager (131

. 34.5 i syngene transplantat, p = 0,0034, fig. 4B). Disse to celler delmængder blev fundet både i leverens parenkym og i celle- infiltrater af allogene graft. Den observerede ændring i celleantal var forbundet til en forøget aktivering. Sorteret lever NK-celler demonstrerede en forøget anti-cancer cytotoksicitet i allogene recipienter (effektor /mål-forhold 10/1:.. 58.8%

32%, p = 0,030, figur 4C). Notatet viste allogene rotte levertransplanterede en tendens til en højere cytotoksicitet i lever-sorteres NK sammenlignet med milt-sorteres NK-celler (effektor /mål-forholdet 10/1: 58,8% vs. 42,2%, p = 0,101). Denne højere liver NK celle aktivitet er sandsynligvis relateret til allogen afvisning primært placeret i leveren graft [20].

(A) Repræsentative billeder af dele af allogene (til venstre) og syngeniske (højre) lever transplantat mærket med anti-NKRP1 antistoffer (rød). Kerner blev farvet med Hoechst (blå). Antallet af mærkede-NK-celler pr billede tælles på flere leversnit. (B) Repræsentative billeder af dele af allogene (til venstre) og syngeniske (højre) lever transplantat mærket med anti-Iba1 antistoffer (rød). Antallet af mærkede makrofager pr billede tælles på flere leversnit. (C)

Ex vivo

liver NK celle anti-cancer cytotoksicitet på dag ti efter allogen og syngeniske transplantation. To effektor /mål-forhold (E /T) blev testet. (D) Varslingsniveau af lever monocyt /makrofager (NKRP1 udtryk niveau (MFI) blandt CD172a + celler). * P 0,05, ** 0,01

Niveauet af lever monocytaktivering blev øget i de allogene modtagere (MFI:.. 1232

590, p = 0,005, fig. 4D).

Alloimmunity-associeret cytotoksicitet gennem NKG2D receptor

for at definere potentielle receptor /ligand involverede veje i den fundne cytotoksicitet, blev qPCR udført på dag ni leverbiopsier. Svarende til en tidligere rapport, ekspressionen af

NKG2D

, en af de bedst karakteriserede tumor-relaterede NK receptor, var 6,9 gange højere i de allogene leveren transplantater sammenlignet med de syngene kontroller (p = 0,028, Fig. 5A ) [21]. Som NKG2D receptor konstitutivt udtrykkes på NK-celler, kunne dette resultat har været relateret til det højere antal NK-celler i allogene leveren. Men niveauet af ekspression af NKG2D i blodet NK-celler (median MFI:. 7694 vs. 4636, Fig 5B, venstre) og monocytter (median MFI:. 1180 vs. 666, fig 4B, højre) var også højere i allogene modtagere.

(A) lever udtryk for

NKG2D

på dag ti efter levertransplantation. (B) Repræsentative NKG2D ekspressionsniveauer i blodet NK-celler (venstre) og monocytter (højre) af allogene (sort) og syngene (grå) modtagere. Isotype blev brugt som kontrol (stiplede linjer). (C) Sorted blod NK-cellers cytotoksicitet inhibering med anti-NKG2D antistof eller med anti-NKp30 antistof. (D) Niveauer af NKG2D-ligand (

rae1l, rrlt

irp94

) udtryk i leveren på dag ti efter transplantation. (E) Niveauer af NKG2D-ligand (

rae1l

rrlt

irp94

) udtryk i rotte HCC cellelinjer. (F) repræsentativ rekombinant NKG2D-Fc-binding til rotte HCC cellelinjer. * P 0,05, **. 0,01

Følgerne af NKG2D receptor i cytotoksicitet blev testet ved brug af anti-NKG2D antistof. Sorterede blod NK-celler demonstrerede højere cytotoksiske niveauer i allogene dyr, og denne virkning blev forhindret ved tilsætning af anti-NKG2D antistof (30,1

. 10.1, fig. 5C). Denne inhibering var receptor-specifik som noget fald kunne observeres ved anvendelse af anti-NKp30 antistof.

Ekspressionen af NKG2D ligander blev yderligere vurderet ved qPCR på dag ni leverbiopsier. I rotter blev tre NKG2D ligander beskrives: Rae1l, Rrlt (retinsyre tidligt transskript familie) og Irp94 (iskæmi responsiv 94 kDa-protein, varmeshockprotein familie) [21], [22].

rrlt

genekspression blev øget markant i de allogene leveren transplantater forhold til syngene lever transplantater (2,93 gange stigning, p = 0,028, Fig. 5D).

I et forsøg på at bestemme, hvordan øget NKG2D cytotoksicitet bidrog til HCC celle clearance blev ekspressionen af NKG2D ligander også vurderet på to rotte HCC cellelinjer, JM-1 og MCA.

Rrlt

blev udtrykt i JM-1-cellelinien (21,4 gange stigning i forhold til de primære splenocytter), men ikke i MCA-celler.

Rae1l

blev ikke udtrykt i HCC celler og

irp94

blev udtrykt på forskellige niveauer i de to cellelinier (JM-1: 2,63, MCA:. 3,68 fold stigning, figur 5E). Endelig tilstedeværelsen af NKG2D ligander ved overfladen af HCC-cellelinier blev bekræftet ved anvendelse af et kimært rekombinant NKG2D-Fc. Både JM-1 og MCA udtrykte høje niveauer af kendte og potentielt endnu ukendte NKG2D ligander (MFI, JM1:. 3.53.10

1.02.10

4, MCA: 9.4.10

1.83.10

4, fig. 5F).

Samlet set NKG2D-ligander blev udtrykt i alle HCC cellelinjer der støtter tanken om, at aktiverede NKG2D-udtrykkende NK-celler og monocytter bidrager til HCC celle clearance.

diskussion

Denne undersøgelse giver nye indsigter til spørgsmålet om afbalancerede immun aktivering efter allogen levertransplantation i overværelse af HCC, ved at påvise tilstedeværelsen af en alloimmun-afhængig anti-cancer cytotoksiske aktivitet efter rotte levertransplantation. Denne cytotoksicitet er forbundet med forhøjede frekvenser og niveauer for aktivering af NK-celler og monocytter /makrofager, og er i det mindste delvis medieres via NKG2D receptor.

undersøgt Mørk Agouti-til-Lewis rotte levertransplantation model induceret en stærk alloimmun aktivering specifikt rettet mod donorantigener [23]. Denne immune profil blev forbundet med en øget fænotype og niveau aktivering af NK-celler og monocytter /makrofager. Dette er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser, der påviser de skadelige virkninger af makrofager i løbet af en rotte nyre afstødelse og den beskyttende effekt af NK-celle depletion efter allogen rotte levertransplantation [18], [24].

krydstale mellem allogene og anti-cancer immunitet har været dårligt undersøgt indtil videre, og de foreliggende data viser en forbedret lever og perifere (men ikke milt) anti-cancer cytotoksicitet på tidspunktet for leveren transplantatafstødning. I human organtransplantation, NK-celler var til stede i endomyokardiel celle infiltrater men disse celler d, men o ikke vises som store aktører i leveren afstødning [25], [26]. Faktisk har en øget alloreactivity af NK-celler efter levertransplantation er rapporteret, og denne aktivitet blev ikke korreleret med afstødningsepisoder [26]. Imidlertid har human lever og sekundære lymfoide væv NK-celler vist stærke niveauer af cytotoksicitet efter stimulation med IL-2 eller i nærværelse af aktiverede APC [27], [28].

Mens vi venter på

i vivo

og /eller kliniske data, den foreliggende observation støtter anvendelsen af mildere grad af immunsuppression hos patienter transplanteret til HCC, for at bevare den anti-cancer cytotoksicitet. Notatet mange allogene rotte-til-rotte levertransplanterede modeller fremkalde nogen akut celle afstødning, og den perfekte model med syngene -recipient type- HCC celler og akut allogen immunitet i øjeblikket mangler (ingen Lewis HCC cellelinje tilgængelig), hvilket forhindrer den

in vivo

validering af de fremlagte data. Også den beskrevne anti-cancer-aktivitet blev observeret efter avancerede afvisning begivenheder, som ses sjældent klinisk. vi hypotese imidlertid, at mildere grad af afvisning også fremme kræftcelle clearance.

Snarere end faldende immunosuppression som helhed, kan en omhyggelig lægemiddelselektion også forsøgt at skåne NK-celler og monocytter /makrofager med henblik på en bedre HCC celle clearance. Anvendelsen af depletterende anti-lymfocyt-antistof er blevet associeret med en øget risiko for post-transplantation HCC tilbagefald [8]. Ikke-nedbrydende anti-IL2-R-antistoffer kan også have en effekt, da de ændrer fænotype og funktion af nyproducerede NK-celler [29] – [31]. Sirolimus og mycophenolatmofetil har vist sig at ændre NK-celle fænotype og funktion

in vitro

, mens cyclosporin ikke synes at have en virkning [32].

In vivo

, alle vedligeholdelse stoffer har en indvirkning på forskellige immuncelleundergrupper og den ideelle immunosuppression kombinationen fortsat skal defineres i fastsættelsen af levertransplantation for HCC [33], [34].

den NKG2D receptor /NKG2D ligander vej optrådte som en central aktør i alloimmun-associerede cytotoksicitet. Det blev allerede offentliggjort, at NKG2D udtryk niveau hæves i leveren allogen graft [21]. Her har vi vist, at ekspressionen af NKG2D specifikt forøges i perifere NK-celler og makrofager på tidspunktet for afstødning, og

ex vivo

cytotoksicitet af lever NK-celler forhindres ved at blokere NKG2D receptor (men ikke den NKp30 receptor). Desuden kunne NKG2D ligander findes på rotte HCC-celler, hvilket bekræfter humane data med ekspressionen af UL16-bindende protein (ULBP) 1, en human NKG2D ligand, på HCC tumorer [10]. Denne vej er tidligere blevet udforsket i andre onkologiske miljøer såsom colorektal carcinom, og niveauet af tumor NKG2D ligand ekspression er blevet associeret med HCC respons og patientoverlevelse [10], [35]. NKG2D udtryk om blod NK-celler øges efter radiofrekvens HCC ablation, og er knyttet til højere sygdomsfri overlevelse [36]. Denne stigning i NKG2D ekspression observeres også efter transarterial chemoembolization og korreleres med et fald i NKG2D-ligand afskalning (opløseligt MICA) [37]. NKG2D udtryk efter levertransplantation kan hjælpe i HCC celler clearance. Endelig NKG2D er for nylig blevet inddraget i makrofag-NK-celle krydstale fører til højere niveauer af NK-celleaktivering og anti-tumorcellecytotoksisitet [38]. Den observerede forøgede ekspression af NKG2D på makrofager ved allogen liver transplantatafstødning kan bidrage indirekte til cytotoksicitet ved at fremme NK-celleaktivering og cytotoksicitet.

Beyond NKG2D, et bredt panel af aktiverende og inhibitoriske receptorer udtrykkes på NK celler, som ekspressionsmønster kan modulere niveauet af aktivering af NK-celler [39]. For at illustrere, kan inhibitoriske receptorer genkende klasse I større histokompatibilitetskompleks, og inhiberer NK-cellecytotoksicitet [40]. Den receptorprofil forskellig organspecifikke NK-celler, som gør deres funktion [41], og ændringer i balancen mellem aktiverende og inhibitoriske receptorer kunne forklare det mindste nogle af de heri beskrevne fænotypiske og funktionelle NK-celle forskelle mellem steder i syngene og allogene modtagere. Yderligere efterforskning er fortjent.

De foreliggende data viser, at forekomsten af en rotte lever afstødelse fremmer anti-cancer cytotoksicitet gennem NKG2D-receptoren.

Kronisk sygdom

PLoS ONE: alloimmune Aktivering Fremmer Anti-Cancer cytotoksicitet efter Rat Liver Transplantation

Be the first to comment

Leave a Reply Annuller svar