PLoS ONE: HURP Expression-Assisted Risk Scores Identificer Prognose adskiller undergrupper i Early Stage Liver Cancer

Abstrakt

Baggrund

Hepatom opreguleret protein (HURP) er en komponent af chromatin- afhængige vej for spindelenhed. Vi undersøgte prognostiske prædiktive værdi HURP i human hepatocellulært carcinom (HCC).

Metoder

HURP udtryk blev evalueret ved immunocytokemi af fine nåle indsugning hepatomaceller i 97 HCC patienter med Barcelona Clinic leverkræft (BCLC) fase A. Efterfølgende disse patienter gennemgik partiel hepatektomi (n = 18) eller radiofrekvens ablation (n = 79) og blev fulgt i 2 til 35 måneder. De klinisk-patologiske parametre blev indsendt for overlevelse analyse.

Resultater

HURP udtryk i aspirerede HCC celler blev påvist i 19,6% af patienterne. Kaplan-Meier overlevelse analyse viste, at positive HURP udtryk (

P

= 0,023), cytologisk grading ≥3 (

P

= 0,008), AFP ≥35 ng /mL (

P

= 0,039), bilirubin ≥1.3 mg /dl (

P

= 0,010), AST ≥50 U /L (

P

= 0,003) og ALT ≥35 U /L (

P

= 0,005) blev alle forbundet med en kortere sygdomsfri overlevelse. En trinvis multivariat Cox proportional hazard model viste, at positive HURP udtryk (HR, 2,334; 95% CI, 1,165-4,679,

P

= 0,017), AST ≥50 U /L (HR, 3,697; 95% CI , 1,868-7,319,

s

0,001), cytologisk kvalitet ≥3 (HR, 4,249; 95% CI, 2,061-8,759,

P

0,001) og tumor nummer 1 (HR, 2,633; 95% CI, 1,212-5,722,

P

= 0,014) var uafhængige prædiktorer for sygdomsfri overlevelse. Ved at kombinere de 4 uafhængige prædiktorer, patienter med forskellige risiko score (RS) viste skelnes sygdomsfri overlevelse (RS≤1 vs RS = 2,

P

= 0,001; RS = 2 vs RS = 3, P 0,001). I modsætning hertil kan patienterne ikke adskilles i prognose skelnelige undergrupper ved hjælp AJCC /UICC TNM.

Konklusion

HCC patienter med BCLC trin A kan adskilles i tre prognose-skelnes grupper ved brug af en risikoscore, der er baseret på HURP udtryk i aspirerede HCC celler, ALT, cytologisk kvalitet og tumor nummer

Citation:. Chang ML, Lin SM, Yeh CT (2011) HURP Expression-Assisted Risk Scores Identificer prognose adskiller Undergrupper i Early Stage leverkræft. PLoS ONE 6 (10): e26323. doi: 10,1371 /journal.pone.0026323

Redaktør: Bernard W. Futscher, The University of Arizona, USA

Modtaget: Juli 22, 2011; Accepteret: September 23, 2011; Udgivet: 17 oktober 2011

Copyright: © 2011 Chang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette projekt blev støttet af tilskud fra Chang Gung Medical Research Program (CMRP-370.693). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Brug en integrativ bioinformatik tilgang med at analysere sekvensmærker udtrykt i human lever, blev en hidtil ukendt cellecyklus reguleres gen navngivet hepatom opreguleret protein (HURP) identificeret 10 år siden [1]. HURP udtrykt rigeligt i human hepatocellulært carcinom (HCC, dvs.. Hepatom), er en mitotisk phosphoprotein substrat for Aurora-A [2]. Aurora-A er en cellecyklusreguleret serin /threonin-kinase, der viser topniveauer af ekspression under G2 /M-fase [3], [4]. Det faktum, at niveauerne af HURP svinger under cellecyklussen og nå en top ved G2 /M tyder på, at det spiller en rolle i cellecyklusregulering [5]. Yderligere undersøgelser har indikeret, at HURP er en komponent af kromatin-afhængige vej for spindel samling. Den har en afgørende rolle i kromatin-induceret mikrotubulussamling, stabiliserer og bundter K-fibre, og er afgørende for de novo mikrotubulus produktion fra kromosomer [6]. Derudover er dens aktivitet nødvendig for korrekt kinetochore opsamling, effektiv kromosom kongression, og rettidig mitotisk progression. Fejl i disse processer kan udløse upassende anafase initiering og genomisk instabilitet [7], [8]. Bortset fra transkriptionel regulering, er intracellulær overflod af HURP også reguleret af Cdk1 /cyklin B ved posttranslationelle niveau [9], [10]. Dog kan der være nogle overflødige veje kompenserer for funktionen af ​​HURP i cellecyklussen som HURP (- /-) mus udvikler sig normalt og kan ikke skelnes fra deres vildtype-kuld. Den eneste dokumenterede fænotype for HURP (- /-) mus er, at hunmus ikke er i stand til at danne implantationssteder grund af en manglende evne til at undergå den decidua reaktion [11]

Trods de eksperimentelle data indikerer en forbindelse mellem celle. cyklus dysregulering og HURP-afvigelse, der ikke er etableret overbevisende dokumentation til dato tyder en direkte onkogen rolle HURP i HCC. Der blev dog sporadisk rapporteret beviser implicerer en onkogent potentiale HURP. Positiv HURP udtryk var forbundet med fremkomsten og gentagelse af overgangsordning celle karcinom [12], [13]; genekspression analyse viste, at HURP repræsenterede en prognose markør stand til at skelne mellem godartede og ondartede adrenocorticale tumorer [14], [15]; og i 293T-cellelinier (American Type Culture Collection (ATCC) Manassas, VA, USA), overekspression af HURP i differentierede celler forøget cellevækst og blokeret apoptose, der normalt induceres af serum sult [16]. På den anden side er HURP genet er i stand til at forøge kemosensitivitet af deoxycytosin analoger i NIH3T3-celler [17], og det virale protein HBx aktiverer ekspressionen af ​​HURP at forhindre apoptose under cancer progression og etablering af kemoresistens i Hep3B celler [18] .

HCC tegner sig for 90% af den primære lever neoplasmer, repræsenterer den femte mest almindelige kræftform i verden, og er den tredje hyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan [19], [20]. En præcis stadieinddeling af sygdommen kan hjælpe klinikere til at forstå prognosen og træffe det rigtige valg af terapeutiske modaliteter til gavn for patienter. I øjeblikket er der adskillige prognostiske pointsystemer, der er blevet etableret under anvendelse af forskellige klinisk-patologiske variabler [21]. Men selv mellem patienter på samme trin af HCC og kategoriseret efter samme pointsystem, post-terapeutisk prognosen er stadig forskelligartet. Dette er mest sandsynligt på grund af det faktum, at HCC er en multi-ætiologisk sygdom med komplekse underliggende patogene mekanismer forårsaget af en række forskellige risikofaktorer. Formentlig kan inddragelse af gode molekylære markører i et prognostisk forudsigelse systemet afhjælpe disse mangler og forbedre de nuværende mellemstationer metoder [22]. På grund af tilgængeligheden af ​​ultralydsundersøgelse samt andre avancerede billeddannende metoder, detekteres et stigende antal HCCs på et tidligt stadium. Endvidere at minimere invasiv af procedurerne, er patologisk diagnose gradvist erstattet af cytologi gennem fin nål aspiration. Desuden er kirurgisk resektion erstattet i høj grad af radiofrekvens ablation (RFA) på grund af den sammenlignelige terapeutiske effektivitet mellem de to behandlinger. Cytologiske karakteristika HCC-celler, herunder differentiering indplacering og immunfarvning af specifikke antigener, der let opnås fra fin nål aspiration. Disse parametre er i øjeblikket ikke omfattet af nogen af ​​de pointsystemer, men de kan give vigtige oplysninger om effektiv prognose forudsigelse. Selvom HURP først blev udvundet fra databasen af ​​menneskelige HCC up-regulerede gener, dens rolle i human HCC

in vivo

har været undvigende. For at løse dette, har vi etableret en immunhistokemisk farvning metode til at påvise HURP udtryk i aspirerede HCC celler fra patienter. De clinicopathologic funktioner, cytologisk sortering og HURP udtryk i HCC-celler blev alle taget i betragtning at beregne prognostiske prædiktorer i disse HCC-patienter.

Materialer og metoder

Patienter

Dette var et enkelt center, prospektivt prognostisk undersøgelse, der blev gennemført efter godkendelse af Institutional Review Board på Chang Gung Medical center. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle deltagere før inklusion. Fra november 2007 til december 2009, til 97 på hinanden følgende patienter (62 mænd og 35 kvinder), der var diagnosticeret har HCC ved aspiration cytologi og mindst to dynamiske billeddiagnostiske undersøgelser (dynamisk computertomografi og angiografi), blev inkluderet i undersøgelsen. Disse patienter enten opfylder kriterierne for RFA behandling [23], eller havde lokaliseret HCCs og var egnet til kirurgisk fjernelse af tumorer. Blod biokemien for følgende parametre blev analyseret: aspartat aminotransaminase (AST, 34 U /l), alanin aminotransaminase (ALT, 36 U /l), total bilirubin (Bil, 1,3 mg /dl), alfa- fetoprotein (AFP, 15 ng /ml), albumin (3,5-5,5 g /dl), protrombintid (10-13 sekunder), kreatinin (F: 0,44-1,03, M: 0,64-1,27 mg /dl). Hepatitis B virus overfladeantigener (HBsAg) blev analyseret ved et kommercielt tilgængeligt radioimmunoassay-kit (Ausria-II, HBsAg-RIA, Abbott Laboratories, North Chicago, IL). Antistoffer mod hepatitis C-virus (HCV Ab) blev analyseret ved hjælp af en tredje generation enzym immunoassay (Ax SYM HCV III, Abbott Laboratories, North Chicago, IL)

Derudover blev også registreret følgende klinisk-patologiske data:. Køn , alder, tilstedeværelse af skrumpelever, forbrug af alkohol, Edmondson er cytologisk kvalitet, antal tumorer, største tumorstørrelse, tilstedeværelse af ascites ved terapi, dato for terapi (RFA eller kirurgi), dato for tumor tilbagefald, og dato for sidste opfølgning eller HCC relaterede dødsfald. I vores medicinsk center, blev patienter med vigtigste portal venetrombose udelukkes fra kirurgisk eller ablation terapi.

Lever aspiration at diagnosticere HCC

Under ultrasonografi vejledning, en 21- eller 22-gauge perkutan transhepatisk cholangiogram nål blev anvendt til aspiration cytologi. De lufttørrede udstrygninger blev straks farves med Riu metode [24]. Klassificering af HCC blev lavet af Edmondson og Steiners klassifikation [25]. Hvis prøven var utilstrækkelig eller svært for cytologisk diagnose, blev en øjeblikkelig leverbiopsi for patologisk undersøgelse foretaget [26].

HURP immuncytokemi

Mouse anti-HURP antistoffer blev venligst stillet til rådighed af Prof. Chou CK (Yang-Ming University, Taiwan). Specificiteten og følsomheden af ​​disse antistoffer er blevet karakteriseret i tidligere publikationer [1], [11], [16], [27]. HURP-positive og negative HCC væv (ifølge Western blot-analyse) blev anvendt som kontroller for hver batch af farvning. Normale makrofager, lymfocytter og granulocytter i celleudstrygningspræparater blev anvendt som interne negative kontroller. Aspireret HCC celler blev fikseret i ren methanol. Hepatocyt ekspression af HURP blev vurderet ved avidin-biotin immunoperoxidase metode. Objektglassene blev inkuberet i phosphatpufret saltvand (PBS) indeholdende 3% hydrogenperoxid i 20 minutter og blev efterfølgende vasket to gange (5 minutter hver) i PBS indeholdende 0,025% Triton X-100 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) . Objektglassene blev derefter inkuberet med 10% normalt hesteserum i 30 minutter, efterfulgt af en inkubation med et 1:500 fortynding af muse anti-HURP antistof ved 37 ° C i 1 time. Efter at være blevet vasket med phosphatbufret saltvand (PBS; 0,1 M, pH 7,4), blev sektionerne efterfølgende inkuberet med biotin-konjugeret heste-anti-muse immunglobuliner (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, PA.) Ved en 1:400 fortynding for 40 minutter. Efter at være blevet skyllet med PBS blev snit behandlet med avidin-biotin-kompleks (Vectastain Elite ABC Kit, Vector Labs, CA) i 30 minutter og derefter inkuberet i en diaminobenzidin opløsning (DAB, Vector Labs, CA) i 1 minut. Nuklear kontrastfarvning udførtes med hematoxylin.

Tumor Ablation

Patienterne blev behandlet med det internt afkølede RF ablation-system (Valleylab ™, Boulder, Colorado, USA). Alle RF ablationer blev udført af tre gastroenterologer med rigelig erfaring med ablative teknikker. Detaljerne i tumor ablation blev beskrevet tidligere [28].

Kirurgisk fjernelse af tumor

Tumorer blev fuldstændig resektion, med en sikkerhed-margin på over 1 cm.

Følg -Up undersøgelser

for de patienter, der fik RFA, blev computertomografi eller magnetisk resonans udført 3 uger senere at vurdere, om ablation var fuldstændig [28], [29]. Efter fuldstændig ablation eller kirurgisk resektion blev opfølgning udføres af ultralydsscanning, røntgen af ​​thorax, AFP, og blod biokemi hver 1 til 3 måneder i det første år, og hver 3 til 6 måneder derefter. Unormale resultater blev verificeret ved computertomografi eller magnetisk resonans. Intrahepatisk gentagelse blev etableret ved brug af de kriterier, der er beskrevet andetsteds [30]. Afhængigt af placeringen af ​​læsionerne samt patientens tilstand, blev ekstrahepatisk gentagelse bekræftet ved biopsi, aspiration cytologi, computertomografi eller magnetisk resonans [30].

Statistik Salg

Sygdomme -fri overlevelse blev målt fra tidspunktet for diagnosen til datoen for tilbagefald, metastaser, død eller sidste opfølgning. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at estimere overlevelsessandsynligheden, og log-rank testen blev anvendt til at sammenligne overlevelseskurverne mellem grupper. Til bestemmelse af cutoffs af en faktor med parameterdataene, blev eksperimentel univariat analyse udført for at evaluere associationen mellem faktor og sygdomsfri overlevelse ved anvendelse af en serie af stigende værdier som cutoffs. Denne metode blev med held anvendt til at identificere kliniske og virologiske prognostiske faktorer i HCC patienter [30]. De eksperimentelle afskæringer blev beregnet ved hjælp af følgende formel: den mindste værdi + n /15 × (den største værdi – den mindste værdi) (n = 1 til 14). Som sådan blev en serie af cutoffværdier genereret for hver parametrisk faktor. De eksperimentelle dikotome grupper blev således adskilt af en cutoff mindst 1/15 eller højst 14/15 af faktoren interval. Denne måde at gruppering var lettere at blive brugt til fremstilling behandling anbefalinger i fremtiden. Den cutoff, der fører til den mindste P-værdi blev derefter udvalgt til efterfølgende Cox proportional risikoanalyse. Begrundelsen samt begrænsning af denne minimale P-værdi tilgang i kliniske studier var også blevet diskuteret i en bedømmelse [31]. Trinvis Cox proportional hazard modeller blev anvendt til at forudsige uafhængige prædiktorer forbundet med sygdomsfri overlevelse. Resultaterne er udtrykt som fare forrentede nøgletal (timer) med 95% Konfidensinterval (CI). I denne undersøgelse blev Bonferroni korrektion for multiple sammenligning ikke anvendt på grund af to grunde. Første er mange af de faktorer inkluderet var kendt prognostiske faktorer, men ikke tilfældigt valgt ukendte faktorer. Vores formål var at forstå, hvor stor en HUPR udtryk var i sammenligning med disse kendte faktorer. For det andet, vores endelige mål var at etablere en kombination pointsystem. Derfor, for at kandidatlande faktorer, der var muligvis betydelig nødvendige medtages.

Statistisk analyse blev udført ved hjælp af SPSS software (version 18.0).

Resultater

Kliniske parametre

baseline karakteristika for de 97 patienter er angivet i tabel 1. Alle af dem tilhørte Barcelona Clinic leverkræft (BCLC) fase A. HBV og HCV-infektion tegnede sig for hovedparten af ​​vores sager. Næsten 90% af patienterne var cirrose. De fleste af patienterne havde unormal leverfunktion med de gennemsnitlige AST og ALT-niveauer højere end normale grænser. Men kun et mindretal af patienterne havde alvorlige komplikationer (fx ascites: 11,3%), mens de gennemsnitlige niveauer af albumin, bilirubin og protrombintid var inden for de normale grænser. 75,3% af patienterne havde ensomme HCC og kun 5,2% af patienterne havde mikrovaskulære invasion. Tumorstørrelsen varierede fra 1,3 til 5,0 cm i diameter. 81,4% af patienterne fik RFA, mens de resterende patienter havde tumorer fjernes kirurgisk. Ifølge den 6

th udgave af AJCC /UICC TNM klassifikation, der var 69 og 28 patienter tilhører fase I og fase II.

Angivelse af HURP i HCCs

Blandt omfattede de 97 patienter blev positivt udtryk for HURP findes i de aspirerede HCC-celler af 19 patienter (19,6%). Otte repræsentative tilfælde, hvor de aspirerede celler positivt farvet med anti-HURP er vist i figur 1. HURP ekspression blev detekteret i over 80% af de aspirerede celler hos 15 patienter og ekspression blev placeret i cytoplasmaet af HCC-celler (figur 1, nedre panel). Men i de resterende 4 patienter, 50% af HCC-celler blev positivt farvet (figur 1, øvre panel). I 2 af disse 4 patienter, fandtes kun nogle få spredte HURP positive HCC celler.

HURP blev farvet i brun farve.

For at forstå, om HURP udtryk var forbundet med nogen af de klinisk-patologiske parametre, blev udført logistisk regressionsanalyse. Det blev konstateret, at HURP udtryk ikke var signifikant forbundet med nogen klinisk-patologisk parameter (P 0,05 for alle klinisk-patologiske faktorer).

associering mellem kliniske parametre og sygdomsfri overlevelse

Sammenhængen mellem kliniske parametre og sygdomsfri overlevelse er vist i tabel 2. Blandt de parametre, positive HURP udtryk, cytologisk sortering ≥3, AFP ≥35 ng /ml, bilirubin ≥1.3 mg /dl, AST ≥50 U /l, og ALT ≥35 U /l viste sig at være forbundet med en kortere sygdomsfri overlevelse (Figur 2).

n, antal HCC patienter i fare.

Uafhængige prædiktorer for sygdom -fri overlevelse i den trinvise multivariat Cox proportional hazard model

Brug den trinvise multivariat Cox proportional hazard model, 4 faktorer forblev som selvstændige prædiktorer for sygdomsfri overlevelse: positiv HURP udtryk i HCC celler, AST ≥50 U /L, cytologisk grad ≥3, og tumor nummer 1. Deres uafhængighed blev også bekræftet af bivariate korrelation tests. Det er værd at bemærke, at efter justering for andre forstyrrende faktorer, tumor nummer (som ikke er en væsentlig parameter for sygdomsfri overlevelse i univariat analyse) blev en væsentlig faktor i Cox proportional hazard model. Hazard ratio (HR), 95% konfidensinterval (CI), og P-værdier for de 4 uafhængige prædiktorer er anført i tabel 3. Endelig tildelt vi en risiko score for hver af patienterne ved at beregne antallet af uafhængige prædiktorer båret af hver patient. De risikoscorer varierede fra 0 til 3, med ingen patient bærer alle 4 faktorer (figur 3). Fordi ingen signifikant forskel blev fundet i sygdomsfrie overlevelse mellem patienter med risiko score = 0 og dem med risiko score = 1 (figur 3A,

s

= 0,421), blev disse to grupper slået sammen (figur 3B) . Sygdomsfri overlevelse var signifikant forskellige blandt patienter med risiko score ≤1, patienter med risiko score = 2, og de patienter, der har risiko score = 3 (figur 3B). I modsætning hertil ingen forskel (

s

= 0,91) blev bemærket mellem tilbagefald-fri overlevelse i 69 TNM fase I og 28 fase II-patienter.

(A) Sammenligning af sygdoms- gratis overlevelse blandt patienter med forskellige risiko score varierede fra 0 til 3. (B) De patienter med risiko score = 0 og dem med risikoscore = 1 blev lagt sammen.

diskussion

generelt hepatisk resektion var overlegen i forhold til RFA i HCCs berettiget til kirurgisk fjernelse, især for tumorer 3 cm [32]. Ved behandling af patienter med ensomme HCC ≤3 cm, RFA har en sammenlignelig gentagelse overlevelse til kirurgisk resektion og samtidig være mindre invasiv [33]. Men hepatisk resektion fortsat behandling af valg for HCC i noncirrhotic patienter på grund af den velbevarede leverfunktion i den resterende leveren. På den anden side, RFA er sikker og effektiv i forvaltningen HCC patienter med levercirrose, og den høje gentagelsesnøjagtighed gør den særlig værdifuld til kontrol intrahepatiske gentagelser [34]. I to prospektive randomiserede kontrollerede studier, der sammenlignede RFA med kirurgisk resektion, blev ingen signifikant forskel i den samlede overlevelse eller fornyet overlevelse. Endvidere lavere komplikation satser var forventeligt hos patienter behandlet med RFA [35], [36]. Derfor bør valget af behandling hos meget tidligt stadium HCC afhænge af patientens egnethed til kirurgi, udførelsen status, sværhedsgraden af ​​levercirrhose, og gennemførligheden af ​​RFA givet placeringen af ​​tumoren [37]. I vores serie, blev patienterne uegnede til hepatektomi udsat for RFA. I overensstemmelse med tidligere rapporter, den sygdomsfri overlevelse mellem disse to metoder var ikke signifikant forskellig (tabel 2). Således bør bias af de forskellige behandlingsmetoder være ubetydelig.

Den heterogene karakter af HCC har i høj grad hindret søgen efter effektive molekylære prognostiske indikatorer. I en case-kontrol undersøgelse af 39 hepatitis C-virus-relaterede HCC tilfælde (24 tidlige fase) og 77 matchede kontroller, hverken des-gamma-carboxy protrombin heller AFP var i stand til at forudsige optimalt fremkomsten af ​​HCC [38]. Således, selv for HCC, der har en homogen underliggende sygdom, en pålidelig biomarkør har endnu ikke fundet. Ifølge den 6

th udgave af AJCC /UICC TNM klassifikation, 69 og 28 BCLC fase A patienter i den aktuelle undersøgelse blev klassificeret som fase I, og II, hhv. Imidlertid kan de patienter ikke adskilles i prognose skelnelige undergrupper ved hjælp AJCC /UICC TNM. I den foreliggende undersøgelse, viste vi den uafhængige forudsigelse af sygdomsfri overlevelse i HCC af HURP ekspression i indsugning HCC celler. HURP betragtes som en stamcelle markør og er målbart i fuldt differentierede celler [39]. Svarende til denne observation, en anden stamcelle markør, epitelial celleadhæsionsmolekyle (EpCAM), viste sig at blive udtrykt overvejende i sammenflydende multinodøs typen HCC og EpCAM ekspressionsniveauerne forudsagde en gentagelse af HCC [40]. Derudover overekspression af Aurora B, en kromosomal passager protein involveret i kromosom adskillelse, spindel-checkpoint, og cytokinese [41], uafhængigt forudsagt tumorinvasion og dårlig prognose af HCC [42]. Den funktionelle lighed mellem HURP og Aurora B støtter yderligere forprogrammeret rolle HURP i sygdomsfri overlevelse for HCC.

I de seneste år, tumor celle såning langs nålen tarmkanalen har vist sig at være en risiko forbundet med leveren biopsi [43]. Fin nål aspiration cytologi har vist sig at være et sikkert og nøjagtigt alternativ til leverbiopsi at identificere størstedelen af ​​HCC [44]. Derfor kan HURP farvning i aspirerede HCC-celler potentielt udvikle sig til en bekvem metode til forudsigelse af sygdomsfri overlevelse for HCC. Der er dog nogle begrænsninger forbundet med denne teknik. Mens HURP er opkaldt efter sin gen bliver opreguleret i human HCC, kun 19,5% (19/97) af vores HCC aspireret prøver viste positiv HURP udtryk. Det er muligt, at der i de resterende prøver, ekspressionsniveauerne af HURP var for lav til immunhistokemi detektion. Sandsynligvis i disse prøver, at størstedelen af ​​HCC celler i nonproliferating ‘out-of-cycle’ stater. Dette forårsagede tumorerne vokser langsomt, hvilket resulterede i en længere sygdomsfri overlevelse. Alternativt i betragtning af den antagelse, at HURP kunne være en stamcelle markering, den lave forekomst af HURP-positive celler i denne undersøgelse kan afspejle det faktum, at de fleste af vores HCCs opstået inflammation relateret mutation induceret af virale fornærmelser til hepatocytter (HBV eller HCV-infektion i vores serie var over 90%), mens HCCs der udvikler fra

de novo

mutation af de naive hepatisk stamceller kun tegnede sig for et mindre antal tilfælde. I denne undersøgelse viste vi, at høj AST, ALT, og bilirubin niveauer korrelerer med en kortere sygdomsfri overlevelse. Dette antyder, at virus relateret hepatisk necroinflammation spiller en vigtig rolle i HCC gentagelse. På dette tidspunkt, er det ikke klart, om der er en vej for de HCC celler, der udvikler fra virus relateret hepatocyt skader at udvikle sig til HCCs med undertegnelsen af ​​cancer stamceller. Endelig, som nævnt i indledningen, redundante veje, der kan kompensere for HURP funktion er blevet foreslået. Som sådan for HCCs der mangler HURP ekspression, alternative onkogene veje ikke er relateret til HURP overekspression er yderst sandsynlig.

Et andet forvirrende aspekt af den foreliggende data er, at næsten alle HURP ekspression lokaliseret i cytoplasmaet af HCC-celler . Importin-α1 viste sig at være en uafhængig prædiktor for tidlig tilbagefald efter HCC resektion [45]. HURP er en af ​​de spindel forsamling faktorer, hvis aktivitet er reguleret af importins, og steady-state distribution af HURP er bestemt af den kontinuerlige shuttling af HURP mellem cytoplasmaet og kernen via importin [46]. De fleste HURP undersøgelser har fokuseret på dens spindel samling rolle i kernen under mitose, mens lidt er kendt om sin funktion i cytoplasmaet under interfasen. Både HURP og Importin-α1 er over-udtrykt i HCCs med dårlig prognose, hvilket tyder på vigtige roller for disse molekyler i onkogenese. Den afvigende cytoplasmatiske overekspression af HURP i HCC kan implicere en uudforsket funktion i celle cyklus regulering, der kræver yderligere afklaring.

Udover HURP positivitet, AST ≥50 U /l, cytologisk klasse ≥3, og tumor nummer 1 blev også fundet at være uafhængige prædiktorer for sygdomsfri overlevelse i vores HCC patienter. Cytologisk sortering repræsenterer differentiering af HCC celler og tumor nummer kan indikere en uni- eller multi-fokale tumor oprindelse eller alternativt iscenesættelsen af ​​HCC. Disse faktorer er alle tyder på dårlig prognose og er blevet dokumenteret af flere undersøgelser [47], [48]. AST, ALT, bilirubin og AFP-niveauer, der blev identificeret til at være betydelige prognose prædiktorer i univariat analyse, afspejlede enten graden af ​​inflammation (AST, ALT og bilirubin), eller tumor byrde (AFP). AFP afspejles også graden af ​​hepatisk inflammation i nogle tilfælde [49]. I litteraturen adskillige rækker af beviser indikerer, at hepatisk inflammation er en prognostisk indikator for HCC. Den præoperative CRP niveau viste sig at være forbundet med den aggressive tidlig tilbagevendende HCC i en undersøgelse af 124 patienter, som gennemgik hepatektomi [50]. Desuden har undersøgelser vedrørende HCV-relateret HCC vist, at HCC næsten altid udvikler sig i en histologisk unormal lever og at den blotte eksistens af kronisk leversygdom udgør en potentiel risiko for udvikling af HCC [51]. Faktisk kan kronisk hepatisk necroinflammation med dens efterfølgende generation af reaktive ilt arter påfører kromosom mutationer og i sidste ende malign transformation af prolifererende hepatocytter. Ligeledes dårlig leverfunktion reserve, foreslået af hyperbilirubinæmi, blev noteret for at være signifikant associeret med HCC forekomst i andre undersøgelser [52]. En undersøgelse tilmelding 150 patienter med en enkelt HCC mindre end 5 cm i diameter behandles ved partikel strålebehandling fandt, at Child-Pugh klassifikation var en uafhængig risikofaktor for lokalt recidiv [53]. Endelig i en retrospektiv undersøgelse består af 413 cirrose HCC patienter, der fik RFA og 648 cirrose HCC patienter, der fik kirurgisk resektion, blev serum AFP fundet at være den eneste væsentlige prædiktiv faktor for alle overlevelse analyser [54]. Ved kæmning de 4 uafhængige prædiktorer, som var blevet direkte eller indirekte er forbundet med prognosen for HCC i litteraturen, risiko- snesevis af patienterne med HCC adskilt patienterne i tre forskellige grupper med meget forskellige post-terapi prognoser. Derfor, i patienter med BLCL stadium A, risiko score, der inkorporerer HURP farvning er i stand til at levere yderligere sondringer mellem forskellige post-terapeutiske prognose grupper. Den lille stikprøve af den foreliggende undersøgelse imidlertid begrænset sin kliniske værdi. For at validere den prognostiske betydning af HURP udtryk i en større HCC kohorte, ville et multicenter studie være yderst informativ og bør gennemføres i fremtiden.

Så vidt vi ved, er dette den første undersøgelse vedrørende den kliniske anvendelse af HURP udtryk forudsige sygdomsfri overlevelse for HCC patienter. En ny risikoscore, der består af 4 uafhængige prædiktorer herunder HURP positivitet i HCC celler, AST ≥50 U /l, cytologisk klasse ≥3, og tumor nummer 1, adskilt HCC patienter med BCLC trin A i tre prognose-skelnes grupper. Disse resultater kan være værdifulde i at vurdere virkningerne af terapeutiske interventioner for HCC patienter med BCLC stadium A, som er den mest almindelige fase opdaget på grund af tidlig påvisning af HCC via velordnet tumor undersøgelse. Endelig kan personlig terapi og opfølgning for patienter med tidlig fase HCC forfølges i den nærmeste fremtid.