PLoS ONE: CD4 + CD25 + Foxp3 + Regulatory T Cells Undertryk Anti-tumor immunrespons i patienter med kolorektal cancer

Abstrakt

Baggrund

Et væld af beviser opnået ved hjælp af musemodeller indikerer, at CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ regulatoriske T-celler (Treg) opretholde perifere tolerance over for selv-antigener og inhiberer også anti-tumor immunrespons. Til dato er der begrænset information om CD4

+ T-celle responser i patienter med colorectal cancer (CRC). Vi satte os for at måle T-celle responser til en tumor-associeret antigen og undersøge, om treg rammer disse anti-tumor immunrespons i CRC patienter.

Metode og vigtigste resultater

treg blev identificeret og karakteriseret som CD4

+ CD25

+ foxp3

+ anvendelse af flowcytometri. En øget frekvens af Treg blev påvist både perifert blod og mesenteriske lymfeknuder fra patienter med colorectal cancer (CRC) i forhold til enten raske kontroller eller patienter med inflammatorisk tarmsygdom (IBD). Udtømning af Treg fra perifere mononukleære blodceller (PBMC) i CRC patienter afsløret CD4

+ T-celle responser, som observeret af IFNy udgivelse, til tumor-associeret antigen 5T4, mens der blev observeret nogen effekt i en sund alder-matchede kontrolgruppe .

konklusioner /Signifikans

Tilsammen viser disse data, at treg stand til at inhibere tumor-associerede antigen-specifikke immunresponser er beriget i patienter med CRC. Disse resultater understøtter en begrundelse for at manipulere treg at forbedre kræft immunterapi

Henvisning:. Clarke SL, Betts GJ, Plant A, Wright KL, El-Shanawany TM, Harrop R, et al. (2006) CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ Regulatory T Cells Undertryk Anti-tumor immunrespons i patienter med kolorektal cancer. PLoS ONE 1 (1): E129. doi: 10,1371 /journal.pone.0000129

Academic Redaktør: Christopher Arendt, Sanofi-Aventis, USA

Modtaget: September 8, 2006; Accepteret: November 14, 2006; Udgivet: December 27, 2006

Copyright: © 2006 Clarke et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af midler fra Tenovus Cancer Charity, Cardiff, og en lille tildeling af tilskud fra Cardiff og Vale NHS Trust. KLW blev finansieret af en Wellcome Trust projekttilskud og Sammenslutningen af ​​International Cancer Research. AMG er en MRC seniorforsker

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er den fjerde mest almindeligt. diagnosticeret malign sygdom med en anslået 1 million nye tilfælde og over 500 000 dødsfald hvert år på verdensplan [1]. Den nuværende behandling af patienter med CRC kredser om excision af den primære tumor og de lokale lymfeknuder og den selektive brug af 5-fluorouracil (5FU; hæmmer thymidylatsyntase) baseret kemoterapi [2]. Nylige fremskridt i præoperativ billedbehandling, kirurgisk teknik og brug af neo-adjuverende kemoterapi har forbedret udfald, men kolorektal cancer stadig den næststørste årsag til kræftdødsfald i de vestlige lande med 40-50% af patienter, der gennemgår en potentielt helbredende operation, gennemgår tilbagefald eller død fra metastatisk sygdom.

klinisk-patologisk iscenesættelse af sygdommen stærkt korreleret med prognose. Interessant er forbedret klinisk resultat også forbundet med tilstedeværelsen af ​​tumor-infiltrerende lymfocytter (TIL’er), især hvis lymfocytterne invadere glandulær elementer i tumoren [3], [4]. Dette antyder, at anti-tumor immunrespons kan indvirke på væksten af ​​den primære tumor, og kan have en vigtig rolle i at kontrollere metastatisk sygdom. Indirekte bevis for betydningen af ​​immunresponset hos cancerpatienter er den epidemiologiske forening i nogle populationer mellem en øget forekomst af tumorer og immunosuppression efter organtransplantation [5].

Much interesse har for nylig opstået i rollen som en naturligt forekommende population af CD4

+ CD25

+ regulatoriske T-celler (Treg), kendetegnet ved ekspression af den gaffelformede-head transkriptionsfaktor foxp3, og forhøjede niveauer af de overflademarkører CD45RO, CTLA-4, og GITR [6 ], [7], [8]. Treg er blevet vist at styre selv-antigenspecifikke responser i periferien, og dermed kan spille en rolle i kontrollen anti-tumor immunrespons. Adskillige grupper, herunder vores egen, har vist, at udtømning af Treg fremmer dannelsen af ​​anti-tumor immunrespons og tumorafstødning i murine modeller (gennemgået i [9]). Der er tegn på, at disse beskyttende reaktioner målrette både tumor antigener samt delte tumorantigener [10], [11].

På det seneste har flere undersøgelser observeret en øget hyppighed af CD4

+ CD25

+ T-celler i det perifere blod hos patienter med forskellige typer cancer, selv om størstedelen af ​​disse undersøgelser ikke bekræftede, at disse var treg ved farvning for foxp3 (gennemgået i [9]). Tilstedeværelsen af ​​foxp3

+ Treg i TIL’er af ovariecancer er imidlertid blevet identificeret som en uafhængig risikofaktor for dårligere prognose. Desuden efter rensning fra tumor ascites, blev disse treg vist at undertrykke Her2-specifikke T-celle responser

in vitro

[12].

Den menneskelige kræftpsykologisk føtal antigen, 5T4, er et 72 kDa leucin-rige membran glycoprotein, som udtrykkes ved høje niveauer på moderkagen og også på en lang række humane carcinomer, herunder kolorektal, gastrisk, nyre- og æggestokkene, men sjældent på normale væv [13], [14], [15], [16 ], [17], [18]. I denne undersøgelse testede vi den hypotese, at Treg udvikle CRC patienter, der undertrykker 5T4-specifikke immunresponser. Prøver fra patienter med CRC eller IBD, og ​​raske kontroller blev undersøgt for at løse tre spørgsmål: er frekvensen af ​​treg (CD25

hiCD4

+ Foxp3

+ T-celler) steg i blod eller lymfeknuder fra patienter med CRC; kan anti-tumor T-celle responser på 5T4 identificeres i CRC patienter; og gør treg rammer disse anti-tumor immunrespons?

Metoder

Sample grupper

CRC patienter blev identificeret fra teammøder multidisciplinære med den første præsentation af et adenocarcinom og ikke rapporteret fjernmetastaser på tværsnit imaging (TNM stadie I-III, Duke scene A-C). IBD patienter (colitis ulcerosa eller Crohns sygdom) deltage klinik eller undergår elektiv kirurgisk resektion blev rekrutteret til undersøgelsen. Lokale etisk godkendelse komité blev givet for den undersøgelse, som den Bro Taf Local Research etiske komité.

Antigener

Renset protein derivat (PPD) (Statens Serum Institut, Danmark), hæmaglutinin (HA) var en slags gave fra Dr. John Skehel (Nimr, Mill Hill), blev 5T4 produceret som tidligere beskrevet [19] (Oxford Biomedica). Alle antigener blev anvendt ved en slutkoncentration på 1 ug /ml.

Oprensning af lymfocytter

30-50 ml blod blev udtaget fra patienter eller kontroller og hepariniseret (10 U /ml). PBMC’er blev udvundet ved centrifugering i Lymphoprep (Axis-Shield, Oslo, Norge). Cellerne blev vasket to gange i RPMI før yderligere anvendelse. Lymfeknuder blev dissekeret fra friske prøver inden for 30 minutter kirurgi, vasket i RPMI, mosede gennem et sterilt celle si og opsamles ved centrifugering.

Flowcytometrisk analyse af lymfocytter fra blod og lymfeknuder

prøver blev farvet med fluorescensmærkede antistoffer mod CD4 (klon RPA-T4), CD25 (klon M-A251), CD45RO (klon UCHL1) og CTLA4 (klon BNI3) (BD Pharmingen), CD4 (klon S3.5) (Caltag ) og CD25 (klon 4E3) (Miltenyi Biotec). Alle farvning blev udført i phosphatpufret saltvand (PBS), 2,5% FCS, 5 mM EDTA og intracellulær farvning blev udført under anvendelse af Cytofix, cytoperm kit (BD Pharmingen). Foxp3 farvning blev udført under anvendelse af FITC-anti-human Foxp3 farvning kit (klon PCH101) (71-5776 eBioscience). Lymfocytter blev gated på forward og sidespredning profiler. Alle flowcytometri blev udført på en BD FACSCalibur og analyseret ved hjælp af topmødet v3.1 analyseprogram (bygge 839 DakoCytomation, Fort Collins, Colorado).

CD4

+ CD25

hi add-back eksperimenter

Renset PBMC blev beriget for CD4

+ celler og derefter adskilt i CD4

+ CD25

hi og CD4

+ CD25

– fraktioner ved hjælp af magnetiske perler (Miltenyi CD4

+ CD25

+ regulatorisk isolation kit). Flowcytometri af hver fraktion viste, at strengheden af ​​CD25

+ celle udvælgelse af Miltenyi CD4

+ CD25

+ regulatoriske isolation kit og Miltenyi anti-CD25-perler var sammenlignelige. En spredning assay blev oprettet ved hjælp af 2×10

4 CD4

+ CD25

– celler, aktiveret med 0,5 ug /m plade-bundet anti-CD3 (klon OKT3) (eBioscience) og 1 mg /ml opløselig anti -CD28 (klon 28.2) (BD Pharmingen) antistoffer i RPMI 1640 suppleret med 10% varmebehandlet FCS, 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, 2 mM L-glutamin og 1 mM natriumpyruvat. CD4

+ CD25

– celler blev aktiveret alene eller i nærværelse af CD4

+ CD25

hej på celler varierende forhold mellem 1:01, 1:0.1, 1:0.01 og 1:0.001 CD4

+ CD25

-:CD4

+ CD25

hi celler. Proliferation blev målt på dag 3 ved tilsætning af 0,037 MBq /brønd (1 uCi) af [

methyl

-3H] -thymidin (Amersham Biosciences) i de sidste 18 timers dyrkning. Celler blev høstet på trykte filtermåtte A filtre (Wallac, Turku, Finland leverandør Perkin Elmer) under anvendelse af en Tomtek cellehøster. Når filtrene var tørre, MeltiLex en smelte-on scintillator sheets (Wallac) blev tilsat, og filtre blev aflæst under anvendelse af en Trilux 1450 Microbeta væskescintillationstæller og luminescens-tæller (Wallac).

IFN-γ ELISPOT-analyser

Antistoffer blev opnået fra Mabtech (Natka, Sverige) og ELISPOT blev udviklet ved anvendelse af alkalisk phosphatase-substrat kit fra Bio-Rad (Hercules, Californien). Virkningen af ​​Treg depletion på antigenspecifik IFN-γ-produktion blev vurderet i parallelle assays. CD25

hi celler blev tømt ved hjælp magnetisk separation med MLA CD25 mikroperler (Miltenyi Biotec, Tyskland). Kort fortalt, 1,5 × 10

7 PBMC blev inkuberet med 15 pi anti-CD25-overtrukne perler i totalt reaktionsvolumen på 150 pi puffer (1 x PBS, 0,5% BSA, 5 mM EDTA) ved 4 ° C i 15 minutter . Overskydende perler blev vasket fra, og PBMC blev kørt en MS-søjle. Søjlen blev vasket med 3 x 1 ml vaske i buffer. Effektiviteten af ​​depletering blev bekræftet ved flowcytometri. Assays blev sat op under anvendelse af enten 3,5 × 10

5 undepleted eller CD25

hi-depleterede celler i RPMI 1640 suppleret med 5% varmebehandlet FCS, 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, 2 mM L -glutamine og 1 mM natriumpyruvat pr brønd af en polymer-backed 96 brønde filtrering plade (MAIP-S-4510) (Millipore, Moslheim, Frankrig) i et totalt reaktionsvolumen på 100 pl /brønd. Koncentrationerne af anvendte antistoffer og vasketrin blev ifølge producentens anvisninger, alle antistofinkubationer var med 50 pl /brønd. Metoden er tidligere blevet beskrevet [20]. PPD, HA og 5T4 blev testet i to fordybninger, der er blevet tilsat til en slutkoncentration på 1 ug /ml, og sammenlignet med kontrolbrønde uden protein. Pladen blev inkuberet ved 37 ° C, 5% CO

2 i 18 timer. Aktiverede T-celler blev optalt ved enkeltcelle-niveau ved at tælle antallet af pletter per brønd anvendelse af en automatiseret ELISPOT-læser (Cadama). Respondere blev identificeret som har mindst 5 spot-dannende celler (SFC) pr 10

6 PBMC, efter fratrækning af baggrunden, og en stigning på mindst 50% over baggrunden.

Statistisk analyse

Flowcytometrisk data blev analyseret under anvendelse af uparrede studerendes

t

-test (GraphPad Prism version 2.0 (GraphPad-software). andelen af ​​kræftpatienter og raske kontroller montering af en reaktion på 5T4 blev sammenlignet ved anvendelse af en lukket formular metode til at sammenligne forskelle og beregne konfidensintervaller [21].

Resultater

Definition af menneskelige treg befolkning

Brug de strenge gating parametre rapporteret for nylig [8], treg var identificeret som CD4 positive celler med lysere CD25-farvning end CD4-negative population (figur 1a). hyppigheden af ​​Treg blev beregnet som procentdelen af ​​CD4

+ CD25

hi celler i CD4

+ befolkning, og var i intervallet 0,09-1,44% af CD4

+ celler i PBMC af sunde aldersmatchede kontroller. i overensstemmelse med tidligere rapporter, at langt størstedelen af ​​CD4

+ CD25

hi celler CTLA4-positive og udtrykte CD45RO ( 97%) [6], [7], [8]. Den CD25

hi befolkning blev yderligere analyseret ved ekspression af foxp3. Som vist i figur 1b, over 95% af CD4

+ CD25

hi celler udtrykte foxp3, sammenlignet med ca. 30% af CD4

+ CD25

int celler. Dette mønster af farvning var den samme for både raske kontroller og CRC patienter. Foxp3 udtryk var ubetydelig i CD4

+ CD25

– celler (figur 1b)

(A) CD4

+ CD25

-., CD4

+ CD25

int og CD4

+ CD25

hi celler blev identificeret som vist. CD4

+ CD25

hi celler er dem, hvor CD25-ekspression var højere end på CD4

– befolkning. (B) Foxp3 ekspression i hver population blev bedømt ved intracellulær farvning. (C) Frisk isolerede CD4

+ CD25

– T-celler (2 x 10

4 celler /brønd) blev dyrket alene (CD25- /lav) eller med CD4

+ CD25

hi T-celler i forskellige forhold, og stimuleret med plade-bundet anti-CD3 og opløseligt anti-CD28. Proliferation blev vurderet ved (

3H) -thymidininkorporering. Resultaterne repræsenterer gennemsnittet af tre brønde med standardafvigelse, fra et repræsentativt assay.

For at bekræfte de lovgivningsmæssige fænotype af denne population af CD4

+ CD25

hi celler, deres evne til at undertrykke aktivering af CD4

+ CD25

– celler blev vurderet ved hjælp af en co-kultur

in vitro

proliferation assay. CD4

+ CD25

– og CD4

+ CD25

høj celler blev separeret fra PBMC, som beskrevet i metoder. Tilsætningen af ​​CD4

+ CD25

hi celler til polyklonalt stimuleret CD4

+ T-celler tydeligt undertrykte proliferationen af ​​CD4

+ CD25

– T-celler og, som rapporteret af andre, denne undertrykkelse blev dosisafhængig [8], [22], [23] (figur 1c).

CRC patienter har øget antallet af Treg i perifert blod

Treg blev fænotypisk defineret som skitseret ovenfor . Figur 2a viser hyppigheden af ​​Treg i PBMCer fra CRC patienter (n = 12; aldersgruppe 58-80 år) sammenlignet med aldersmatchede raske kontroller (n = 11; aldersgruppe 48-93 år) og patienter med inflammatorisk tarmsygdom (n = 22, alder range 19-80 år). I alle grupper, hyppigheden af ​​Treg var mindre end 2% af CD4

+ T-celler. Imidlertid blev den gennemsnitlige frekvens i CRC patienter (1,13%) signifikant forøget sammenlignet med kontrolgrupperne (IBD patienter 0,56%, raske kontroller 0,46%). Der var ingen signifikant forskel i hyppigheden af ​​Treg i raske kontroller og IBD-patienter.

(A) Frisk isolerede PBMC fra 12 CRC patienter, 11 raske alders-matchede kontroller og 22 IBD patienter blev farvet med antistoffer mod CD4 og CD25. Brug af gating er skitseret i figur 1, blev treg optalt. (B) Mesenteriske lymfeknude prøver (LN) blev opsamlet fra kirurgiske prøver af 8 CRC og 7 IBD patienter og farvet og gated som ovenfor. Dataene viser procentdelen af ​​CD4

+ celler, der var CD25

hi i hver prøve. Hvert symbol repræsenterer en patient. P-værdier blev beregnet ved hjælp af en uparret studerendes

t

-test.

CRC patienter har øget antallet af treg i mesenteriallymfeknuder

Indhentning kontrol lymfeknuder fra individer med ingen abdominal sygdom ikke var muligt. IBD patienter tilbyder en colon sygdomsbekæmpelse gruppe CRC patienter, sidstnævnte også ofte demonstrerer områder af betændelse omkring tumoren. Endvidere har resultaterne fra PBMC’er ikke demonstrere en signifikant ændring i frekvenserne af treg hos patienter med IBD sammenlignet med raske kontrolpersoner. Derfor har vi fundet det rimeligt at anvende mesenteriallymfeknuder opnået fra IBD patienter, der gennemgår kirurgi som en kontrolgruppe, til at gennemgå treg i sekundær lymfoide væv.

Friske lymfeknuder blev indhentet fra de kirurgisk resektion prøver og forberedt som skitseret i fremgangsmåder. Hyppigheden af ​​Treg i mesenteriske lymfekirtler opnået fra CRC patienter (n = 8), og IBD-patienter (n = 7) blev sammenlignet (figur 2b). CRC patienter igen viste en betydelig stigning i hyppigheden af ​​Treg, hvilket afspejler den stigning, som allerede beskrevet i perifert blod. Lymfeknuden-afledte CD25

hi Treg havde samme fænotype med de fundet i blod (data ikke vist). Ingen forskel blev observeret i den samlede andel af CD4

+ eller CD8

+ T-celler (data ikke vist).

Patienter med ikke-metastaserende CRC demonstrere energisk CD4

+ T celle responser at minde antigener Salg

PBMC’er blev oprenset fra CRC patienter (n = 14) før indgrebet og den specifikke CD4

+ T-celle respons til kontrolgruppen tilbagekaldelse antigener PPD og HA målt ved IFN-γ frigivelse. Disse resultater blev sammenlignet med raske aldersmatchede kontroller (n = 11) (figur 3). CD4 og CD8 depletion eksperimenter bekræftede, at disse var CD4

+ T celle responser (data ikke vist). Der var ingen tegn på, at patienterne blev immunsupprimerede; Alle individer reagerede mindst et antigen. Celleproliferation blev også vurderet i parallelle eksperimenter som et mål for T-celle-aktivering, og igen blev der ikke fundet tegn på immunsuppression præoperativt (data ikke vist).

Hele PBMC fra 11 aldersmatchede kontroller og 14 CRC patienter blev vurderet for reaktioner på antigenerne PPD og HA, målt ved IFN-γ-ELISpot. Oprenset PBMC blev tilsat ved 3,5 × 10

5 celler /brønd og inkuberet i 18 timer i nærvær af enten 1 ug /ml PPD, 1 ug /ml HA eller uden antigen. Brønde blev sat op i to eksemplarer. Færre end 5 spot dannende celler /10

6 PBMC blev betragtet negativt.

treg har en markant effekt på anti-tumor immunrespons i blodet hos patienter med CRC

En række assays blev udført på CRC patienter (n = 14) og aldersmatchede kontroller (n = 11) for at bestemme, om fjernelse af CD25

høj celler ændret immunresponset på genkalde antigener og tumor-associerede antigen 5T4. Vi optimeret en isolation system designet specielt til at udtømme kun CD25

høj celler fra vores prøver som beskrevet i fremgangsmåder (figur 4a). Frisk-isolerede PBMC’er blev anvendt i

ex vivo Salg IFN-y ELISPOT-analyser som beskrevet ovenfor for at bestemme reaktioner på recall-antigener og tumorantigenet 5T4, før og efter udtømning af Treg. I det hele taget, udtømning af treg afsløret nogle svar til at huske antigener i CRC patienter og kontroller (figur 4B). Men i tilfælde af tumorassocieret antigen 5T4, var der en slående forskel mellem kontrol og CRC patienter. En 5T4-specifikke

ex vivo

respons blev fundet i 1/11 af de raske kontrolpersoner og udtømning af treg forbedret dette svar. Mens udtømning af treg augmented den 5T4-specifikke respons i 1/14 af CRC patienter, udtømning af denne population førte til

afsløringen

af en 5T4 respons i 5/14 af de testede patienter (95% konfidensinterval for parrede forskelle er -0,83 til -0,22 afslører en betydelig forskel i 5T4 responser mellem CRC patienter og raske kontroller). Disse data antyder, at Treg undertrykker anti-5T4 immunresponser specifikt i patienter med colorectal cancer. Disse seks patienter, der demonstrerede forbedrede 5T4 reaktioner havde lignende Treg frekvenser i perifert blod (interval 0,82-2,35% gennemsnitlig 1,14%) til de frekvenser, målt på hele CRC populationen (gennemsnit 1,13%). Mens IFN-γ-release, måles direkte

ex vivo

, aktiverede anti-5T4 reaktioner, der skal påvises, vi fandt ikke kraftige proliferative reaktioner på 5T4 i enten CRC patienter eller kontroller. Men med flere runder af re-stimulation og tilsætning af IL-2, er vi vokset ud HLA-DR-begrænsede 5T4-specifikke linjer (data ikke vist).

(A) PBMC blev oprenset og to prøver fremstillet: hele PBMC og PBMC udtømt af CD25

hi celler. (B) Hele PBMC og CD25

hi-udtømte PBMC fra 11 aldersmatchede kontroller (åbne søjler) og 14 CRC patienter (massive søjler) blev oprettet parallelt i en IFN-y ELISPOT assay (3,5 × 10

5 celler /brønd) med PPD (øverste graf), HA (midterste graf) eller 5T4 (nederste graf). Antallet af respondenter er vist for hvert antigen. I hvert tilfælde procentdelen til venstre er frekvensen af ​​respondenter, at øget efter treg udtømning (Stigning), den procentdel i midten er frekvensen af ​​ikke-respondenter, der havde en reaktion efter udtømning (New svar) og til højre den hyppigheden af ​​responders, der viste et fald eller ingen ændring i respons efter Treg depletion (fald /NC). De 95% konfidensinterval for parrede forskelle proportioner mellem patienter og kontroller er -0,83 til -0,22 afslører en betydelig forskel for 5T4 svar. (C) De 6 CRC patienter med respons på 5T4 er vist mere detaljeret. Søjlerne repræsenterer spot-dannende celler /10

6 PBMC efter fradrag af baggrunden pletter, hel PBMC (lysegrå) og CD25

hi-udtømte PBMC (mørkegrå). Respons blev kun observeret i CD25

hi-udtømte PBMC patienter 1-5, mens en respons blev observeret i begge PBMC populationer fra patient 6. I alle analyser blev brønde oprettet i to eksemplarer.

diskussion

Vi sammenlignede frekvensen af ​​nøje definerede CD4

+ CD25

+ foxp3

+ regulatoriske T-celler (treg) i CRC patienter med raske alders-matchede kontroller og IBD patienter. CRC patienter har en øget hyppighed af treg og der er beviser for, at disse treg target anti-tumor immunrespons.

Vi vurderede, om forbedrede antal treg i CRC patienter korreleret med generelle immunosuppression. En kombination af IFN-γ ELISPOT-analyser og proliferationsassays at overvåge reaktionerne til tilbagekaldelsen antigener PPD og HA, demonstrerede lige så robuste responser i CRC-patienter og raske kontroller, hvilket indikerer, at immunresponser på ikke-tumor-antigener er usvækket i CRC patienter.

mønster af immun reaktivitet var markant anderledes mellem CRC patienter og raske kontrolpersoner, når immunreaktioner til tumorassocierede kræftpsykologisk føtal antigen, 5T4, blev sammenlignet. 5T4-specifikke reaktioner blev observeret i en andel af raske kontrolpersoner, men disse reaktioner var stort set uændret ved treg udtynding. I modsætning hertil blev et 5T4-specifik respons påvist i mere end en tredjedel af de CRC patienter efter fjernelse af Treg, hvilket antyder, at de Treg i CRC patienter undertrykke tumor-specifikt immunrespons. Denne gruppe af CRC patienter, der påviste anti-5T4 reaktioner efter treg udtømning syntes at have lignende Treg frekvenser sammenlignet med den samlede CRC gruppe, men vil blive krævet større undersøgelser for at bekræfte dette. Siden 5T4-responser ikke blev afsløret ved Treg depletion i raske kontroller, indikerer disse data, at Treg celler kan undertrykke 5T4-specifikke responser udvikle sig i respons til tumoren. Den præcise mekanisme, gennem hvilken dette sker er uklart på nuværende tidspunkt, men det er muligt at cytokinet miljø i tumoren fremmer frembringelsen af ​​Treg anerkender tumorassocierede antigener. De seneste rapporter viser en rolle for TGF i udvidelsen af ​​treg [24], [25]. I en gnaver tumormodel er det blevet vist, at kun dendritiske celler (DC’er) fra tumorbærende men ikke tumor-free Dyr fremmer proliferation af Treg. Interessant DC’er fra tumor-frie dyr kunne udvide Treg, men kun hvis præ-inkuberet med tumor cellesupernatanter. Disse virkninger kan hæmmes

in vitro

bruger anti-TGFp antistoffer [26]. Kollektivt antyder disse data, at Treg kræver både et tumorantigen-specifik stimulering og cytokiner, såsom TGFp for at proliferere og undertrykke anti-tumor immunrespons.

5T4 er en attraktiv kandidat til tumorvacciner som det er udtrykt i mange epiteliale tumorer. denne undersøgelse tyder på, at Treg genkende antigenet og muligvis spiller en rolle i at undertrykke antitumorresponser, formentlig på bekostning af den enkelte. To andre undersøgelser har vist, at Treg genkende tumorantigener (LAGE-1 og ARTC-1) i patienter med melanom [27], [28]. Det er vigtigt at sikre, at vaccine-strategier via tumorassocierede antigener ikke øge den regulerende arm af immunsystemet og hæmmer derved potentielle anti-tumor-immunitet. En metode kan være at nedbryder treg før vaccination, som for nylig demonstreret for renalcellecarcinom [29]. Det vil være af stor interesse derfor at bestemme i fremtidige undersøgelser, om en sådan strategi vil resultere i målbare klinisk respons i CRC patienter.

Tak

Forfatterne vil gerne takke professor Robert Newcombe, Epidemiologisk afdeling, Statistik og folkesundhed, Cardiff University for statistisk rådgivning.