PLoS ONE: Tumor infiltrerer CD8 + og Foxp3 + Lymfocytter Correlate til Klinisk Outcome og human papillomavirus (HPV) status i Tonsillær Cancer

Abstrakt

Baggrund

humant papillomvirus (HPV) er en forårsagende faktor for tonsillær planocellulært karcinom (TSCC) og patienter med HPV-positive (HPV

+) TSCC har en bedre klinisk resultat end dem med HPV negative (HPV

-) TSCC. Men da ikke alle patienter med HPV

+ TSCC reagerer på behandling, er der behov for yderligere biomarkører sammen med HPV status til bedre at forudsige respons på terapi og at individualisere behandlingen. Til dette formål, vi undersøgt, om antallet af tumor infiltrerende cytotoksiske og regulatoriske T-celler i TSCC korreleret til HPV-status og kliniske resultat.

Metoder

Formalin fast paraffin indlejret TSCC, tidligere analyseret for HPV-DNA, der stammer fra 83 patienter, blev inddelt i fire grupper afhængigt af HPV-status af tumoren og det kliniske udfald. Tumorer blev farvet ved immunhistokemi og evalueret for antallet af infiltrerende cytotoksiske (CD8

+) og lovgivningsmæssige (Foxp3

+) T-celler.

Resultater

En høj CD8

+ T-celle infiltration var signifikant positivt korreleret til en god klinisk resultat i både patienter med HPV

+ og HPV

– TSCC patienter. Ligeledes en høj CD8

+ /Foxp3

+ TIL forholdet var korreleret til en 3-års sygdomsfri overlevelse. Desuden HPV

+ TSCC havde i forhold til HPV

-TSCC, højere antal infiltrerende CD8

+ og Foxp3

+ T-celler.

Konklusioner

Afslutningsvis en positiv sammenhæng mellem et stort antal infiltrerende CD8

+ celler og kliniske resultater viser, at CD8

+ celler kan bidrage til en gavnlig klinisk resultat i TSCC patienter, og kan potentielt tjene som en biomarkør. Ligeledes CD8

+ /Foxp3

+ celle forholdet potentielt kan bruges til samme formål

Henvisning:. Näsman A, Romanitan M, Nordfors C, Grün N, Johansson H, Hammarstedt L et al. (2012) Tumor infiltrerer CD8

+ og Foxp3

+ Lymfocytter Correlate til Klinisk Outcome og human papillomavirus (HPV) status i Tonsillær Cancer. PLoS ONE 7 (6): e38711. doi: 10,1371 /journal.pone.0038711

Redaktør: Joseph Califano, John Hopkins Medical School, USA

Modtaget: Februar 7, 2012; Accepteret: 11 maj 2012; Udgivet: 12 juni, 2012 |

Copyright: © 2012 Näsman et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af den svenske Cancer Society (TD, 100.258), det svenske Medical Research Council (TD, TR, K2011-56X-15282-07-6), Stockholm Cancer Society (TD, 101.081), Henning og Ida Perssons Foundation (TD), Karolinska Institutet (TD, TR) og Stockholms byråd (TD, TR, EMW, 2.010.067). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Medforfatter Torbjörn Ramqvist er en PLoS ONE Editorial Board medlem. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle de PLoS ONE politikker på datadeling og materialer.

Introduktion

Nylige undersøgelser fra Europa og USA har rapporteret en stigning i forekomsten af ​​svælg skællede cellecarcinom (OSCC), især for tonsillar pladecellecarcinom (TSCC). Denne stigning er blevet tilskrevet en øget forekomst af human papillomavirus (HPV) infektion [1], [2], [3], [4]. Derfor en 7-gange stigning i HPV-positive (HPV

+) TSCC, parallelt til et fald i HPV-negative (HPV

-) TSCC er blevet påvist for patienter i Stockholm, Sverige, de sidste tre årtier [3] og en lignende tendens er blevet påvist i USA [2]. Vigtigere også, HPV har vist sig at være en gunstig prognostisk faktor for patienter med OSCC herunder TSCC [5], [6], [7], [8]. Men ikke alle patienter med HPV

+ TSCC klare sig godt og dermed, selvom HPV i sig selv er en vigtig prognostisk markør, er der behov for yderligere biomarkører i TSCC til bedre at forudsige behandlingsrespons før individualiseret behandling kan implementeres i klinisk praksis.

Det er blevet foreslået, at HPV

+ og HPV

-TSCC er to forskellige tumor sygdom enheder med forskellige tumor og patientkarakteristika. Betragtninger HPV associerede tumorer, herunder HPV

+ TSCC er drevet af virale onkogener, f.eks E6 og E7, og har færre cellulære mutationer, HPV

-TSCC udvikle ved ophobning af genetiske ændringer hovedsageligt skyldes miljøfaktorer såsom rygning [9]. Som fremmede antigener, kan E6 og E7 fungere som potentielle mål for et immunrespons mod HPV inducerede tumorer og

in vitro Salg undersøgelser har vist, at T-celler isoleret fra HPV

+ livmoderhalskræft kan genkende og dræbe E6 og E7 udtrykkende tumorceller [10]. Desuden er tumorspecifikke T-celler påvist i de fleste cervikale kræftpatienter, selv ved lave og utilstrækkelige [11], [12] og tilstedeværelsen af ​​tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL’er) er blevet forbundet med en bedre prognose [13], [ ,,,0],14]. Dette er også blevet observeret for andre tumortyper med nogen kendt viral forening [15], [16]. Dog kan TIL’er virke som et tveægget sværd. Mens en udtalt infiltration af CD8

+ lymfocytter har været forbundet med en positiv prognose i mange maligniteter, rolle infiltrerende T regulerende celler (tregs) (ofte defineret som Foxp3

+ lymfocytter) er ofte omvendt [17] . Tregs kan fremme tumor progression, og øget niveauer af tregs er blevet observeret i patienter med en række tumorer og knyttet til en dårligere prognose [18], [19], selv om der er undtagelser, hvor Treg infiltration er blevet knyttet til en gunstig prognose [ ,,,0],20], [21]. Ikke desto mindre rolle infiltrerende CD8

+ og Foxp3

+ lymfocytter har, så vidt vi ved, ikke blevet undersøgt i TSCC i korrelation til patient resultat og HPV-status.

formålet med denne undersøgelse var at undersøge forekomsten af ​​tumor infiltrerer CD8

+ og Foxp3

+ T-celler i TSCC i relation til det kliniske resultat og tumor HPV-status, og at fastslå, om disse TIL’er kan potentielt anvendes i klinikken som biomarkører enten alene eller sammen med HPV-status af tumoren til at forudsige det kliniske resultat.

TSCC med (A) lav og (B) høj CD8

+ infiltration og (C) lav og (D) høj Foxp3

+ infiltration.

Materialer og metoder

Etik Statement

undersøgelsen blev godkendt af Etisk Komité ved Karolinska Institutet, Stockholm, Sverige, i overensstemmelse med de etiske tilladelser 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 og 2009 /1278-1231 /4. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle deltagere i undersøgelsen.

A) antal CD8

+ TIL’er, B) nummer Foxp3

+ TIL’er og C) CD8

+ /Foxp3

+ celle-forhold. “God” og “fattige” betegner kliniske resultat. Ud over de fire TSCC grupperne defineret i metodeafsnittet, er forskellige kombinationer af grupper også sammenlignet. Således er “HPV

+ godt” svarer til gruppe A; “HPV

+ fattige” til gruppe B; “HPV

– god” til gruppe C; “HPV

– dårlig” til gruppen D; HPV

+ til grupper A + B, HPV

– til grupper C + D; “God” til gruppe A + C; og “ringe” til grupper B + D. For bedre at visualisere detaljerne i den nederste del af figur 1C den øverste del af diagrammet herunder den øvre knurhår (i forholdet 80) blev udeladt.

A) HPV

+ TSCC og B) HPV

-TSCC patienterne stratificeret med antallet af CD8

+ TIL’er. Høj og lav betegner CD8

+ TIL tæller over og under de medianværdier af 33 for HPV

+ TSCC og 4.4 HPV

-TSCC. C) HPV

+ TSCC og D) HPV

-TSCC patienterne stratificeret ved forholdet mellem CD8

+ /foxp3

+ celle-forholdet. Høj og lav betegner CD8

+ /foxp3

+ celle-forholdet over og under 1.

Patienter og materiale

kohorte bestod af alle patienter, diagnosticeret 2000- 2006 med TSCC (ICD-10 C09.0-9), der blev behandlet med den hensigt at helbrede på Karolinska Universitetshospital, Stockholm, Sverige, og havde til rådighed forbehandling paraffin indlejret tumor biopsier. Behandlingen bestod af accelereret strålebehandling (RT) (1,1 + 2,0 Gy /dag i 4,5 uger, total dosis: 68 Gy) eller konventionel RT (2,0 Gy /dag, for 6.5-7 uger, total dosis: 68 Gy), eller i fire tilfælde, induktion kemoterapi efterfulgt af samtidig RT (CRT). Efter behandling blev patienterne fulgt op af klinisk undersøgelse hver 3. måned i de første 2 år og hver 6. måned 3. år.

Data om forekomsten af ​​HPV-typer højrisiko (tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA ved PCR) og p16

INK4a status (ved immunhistokemi) blev opnået fra tidligere undersøgelser [3], [7], [22] og patienter blev inddelt i 4 grupper (AD) ved baseline (for yderligere oplysninger se tabel 1 og 2); (A) en tilfældig stikprøve (n = 31) af alle patienter (n = 109) med HPV

+, p16

INK4a-positive ( 75% p16

INK4a-positive tumorceller) (P16

+) tumorer med en god klinisk resultat (defineret som ingen tilbagefald og levende 3 år efter diagnosen); (B) alle patienter (n = 21) med HPV

+, p16

+ tumorer med et dårligt klinisk resultat (defineret som tilbagefald i sygdom og /eller død af sygdom inden for 3 år efter diagnosen); (C) alle patienter (n = 11) med HPV

-, p16

INK4a negativ (P16

-) tumorer med en god klinisk resultat; (D) alle patienter (n = 20) med HPV

-, P16

– tumorer med et dårligt klinisk resultat (tabel 1). En prøve af 31 af de 109 oprindelige tumorer i gruppe A blev valgt for at opnå en mere ens antal patienter fra hver gruppe for yderligere undersøgelser af TIL’er, da denne gruppe dominerede med 68% af det samlede antal tumorer. Patienter med HPV

+, p16

– (n = 17) og HPV

-, P16

+ tumorer (n = 4), blev udelukket fra yderligere analyse for at opnå homogene grupper og til kun at omfatte HPV

+ TSCC udtrykker HPV E6 /E7, da p16

INK4a udtryk i HPV

+ tumorer betragtes som en indikation af E7 udtryk [23]. Patienter dør af andre årsager end TSCC blev også udelukket. Alle HPV

+ TSCC var HPV16

+ med undtagelse af én tumor med HPV33 og en med HPV56.

Immunhistokemi

En standard streptavidin-biotin peroxidase metode blev ansat på 4 um fikseret i formalin, indlejret i paraffin, snit under anvendelse af de monoklonale museantistoffer anti-CD8 (fortynding 1:40; klon 4B11; Novocastra Laboratories) og anti-Foxp3 (fortynding 1:100, klon 236A /E7; eBioscience). Alle snit blev efterfølgende inkuberet med biotinyleret sekundært anti-muse-antistof (1:200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) efterfulgt af inkubering med avidin-biotin-kompleks-PO ved hjælp af VECTASTATIN® Elite® ABC kit (Vector Laboratories) og udviklet i DAB.

CD8

+ og Foxp3

+ tumor lymfocytinfiltration blev evalueret ved to forskere, blindet for kliniske resultat, hver tælle cellerne i 10 tilfældigt udvalgte high-power felter ( 40 ×) per prøve. Middelværdien blev rapporteret for hver tumor. Forholdet mellem tumor infiltrerer CD8

+ og Foxp3

+ celler blev beregnet for hver enkelt tumor, blev gennemsnittet af disse nøgletal derefter beregnes pr undergruppe.

Statistisk analyse

Tests for sammenligninger af kontinuerte data blev udført ved hjælp af lineære regressionsmodeller. Resultaterne blev præsenteret som gennemsnitlige forskelle eller odds-ratio sammen med 95% konfidensinterval. Sammenligningerne for patient- og tumor egenskaber mellem de forskellige grupper i tabel 1 og 2 blev udført under anvendelse af Fishers eksakte test (to-halet). Alle disse analyser blev udført i STATA11 (StataCorp). En p-value≤0.05 blev betragtet som signifikant.

sygdomsfri overlevelse (DFS) blev defineret som tiden fra datoen for diagnosen til datoen for den sidste kendte lejlighed, at patienten var sygdomsfri eller dato for tilbagefald (lokalt, regionalt eller fjern recidiv). Død uden dokumenteret tilbagefald blev censureret på datoen for dødsfaldet. Kaplan-Meier-kurver blev anvendt til at præsentere overlevelsesdata og log-rank testen blev anvendt til at sammenligne overlevelseskurver. I den multivariate analysere blev en Cox proportional hazards model, der anvendes til at justere for kovariater. To-sidet p-værdier blev rapporteret. Disse analyser blev udført i SPSS (IBM SPSS Statistics, v20).

Resultater

klinisk og patologisk Parametre for patienter og Tumorer

Nærmere oplysninger om alle patienter og deres tumorer vises i tabel 1 og 2. Som det er beskrevet ovenfor, blev patienterne opdelt i 4 studiegrupper afhængig tumor HPV status og kliniske resultater inden for 3 år. Den eneste betydelige forskel mellem de forskellige studiekredse var, at patienter med HPV

-tumors og god klinisk udfald havde en lavere klinisk stadie end patienter med dårlig klinisk resultat (p = 0,005).

Der var ingen forskelle med hensyn til enhver af de undersøgte kliniske parametre mellem stikprøven af ​​31 patienter, og den samlede befolkning på 109 patienter med HPV

+ TSCC og god klinisk resultat (tabel 2).

The Number af CD8

+ TIL’er korrelerer med HPV status og klinisk resultat for patienter med TSCC

TSCC patienter med en god klinisk resultat havde en signifikant højere antal CD8

+ TIL’er i deres tumorer (figur 1), end dem med dårlig klinisk resultat, uafhængigt af tumor HPV-status (gennemsnit 50,4 og 12,8 hhv, p. 0,001), (tabel 3 og figur 2A). Endvidere, når stratificering for HPV-status, HPV

+ TSCC, fra patienter med en god klinisk resultat, havde flere CD8

+ TIL’er end dem fra patienter med dårlig klinisk resultat (betyder 61,4 og 21,0 hhv., P = 0,002 ), (tabel 3). Det gennemsnitlige antal CD8

+ TIL’er var også signifikant højere i HPV

-TSCC fra patienter med god klinisk resultat, når der sammenlignes med HPV

-TSCC fra patienter med dårlig klinisk resultat (gennemsnit 19,4 og 4,7 hhv. , p = 0,001).

Desuden HPV

+ TSCC havde en signifikant højere gennemsnitlig antal tumorinfiltrerende CD8

+ lymfocytter sammenlignet med HPV

-TSCC (gennemsnit 45,6 og 9,9 hhv. , p 0,001) (figur 2A). Denne forskel var stadig signifikant, når der korrigeres for prognose (p = 0,001).

For at undersøge sammenhængen mellem CD8

+ TIL’er og DFS i HPV

+ TSCC patienter blev udført en Kaplan-Meier analyse . HPV

+ og HPV

-TSCC patienter blev dikotomiseret baseret på medianværdien (33 og 4.4 henholdsvis) af CD8

+ TIL’er. Som vist i figur 3A patienter med HPV

+ tumorer og et højt antal CD8

+ TIL havde en kumulativ overlevelse på 84% sammenlignet med 55% for patienter med lave antal CD8

+ (p = 0,02 ). Lignende kumulative overlevelse tendenser (64% og 36%, respecitvely) blev også observeret for HPV

– patienter, selv om disse forskelle ikke var statistisk signifikant (figur 3B). Især for patienter med HPV

+ TSCC Kaplan-Meier kurver blev beregnet på prøve af tekstilklausulen tilhører gruppe A og alle TSCC fra gruppe B (figur 3A).

The Number of Foxp3

+ TIL’er korrelerer med HPV status i TSCC

En signifikant højere antal Foxp3

+ TIL’er (figur 1) blev observeret i HPV

+ TSCC i forhold til, at der i HPV

-TSCC (gennemsnit 33,2 og 14,7, hhv, s. 0,001) (Figur 2B). Når der korrigeres for prognose, denne forskel var stadig signifikant (p = 0,001). Men ingen forskelle i niveauerne af Foxp3

+ TIL’er blev observeret i tumorer fra patienter med en god eller dårlig klinisk resultat (gennemsnit 27,9 og 24,6, hhv.), (Tabel 3).

A High CD8

+ /Foxp3

+ Ratio er knyttet til en god klinisk Outcome i patienter med TSCC

Som en måling af det relative antal af cytotoksiske og regulatoriske T-celler i tumorerne, forholdet mellem tumor infiltrerende CD8

+ og Foxp3

+ -celler blev beregnet for hver tumor. En høj CD8

+ /Foxp3

+ celle-forholdet er en indikation af, at de regulatoriske T-celler er i mindretal og dermed mindre tilbøjelige til at overskygge den funktion af cytotoksiske T-celler. For patienter med TSCC en høj CD8

+ /Foxp3

+ forholdet var positivt korreleret til en god klinisk resultat når der korrigeres for prognose (p = 0,04) (tabel 3). Men forskellen relateret til prognose i CD8

+ /Foxp3

+ TIL forholdet var ikke signifikant, når patienter med HPV

+ TSCC eller HPV

-TSCC blev analyseret separat, selvom tendensen var magen til der observeret for TSCC patienter generelt.

for at undersøge sammenhængen mellem en høj /lav CD8

+ /Foxp3

+ tIL forholdet og DFS for TSCC, blev udført en Kaplan-Meier analyse. HPV

– og HPV

+ TSCC patienter blev dikotomiseret baseret på en CD8

+ /Foxp3

+ TIL forhold over eller under 1. Som vist i figur 3D patienter med HPV

-TSCC og en høj CD8

+ /Foxp3

+ tIL forholdet havde en kumulativ overlevelse på 73% sammenlignet med 28% for patienter med en lav CD8

+ /Foxp3

+ tIL ratio (p = 0,03) . Tilsvarende HPV

+ TSCC patienter med en høj CD8

+ /Foxp3

+ TIL forholdet havde en højere kumulativ overlevelse (82%) end dem med en lav CD8

+ /Foxp3

+ tIL-forholdet (54%, p = 0,04) (Figur 3C).

Sammenhæng mellem kliniske parametre, CD8

+ og Foxp3

+ Celler og 3-års DFS i patienter med TSCC

Når CD8

+ og Foxp3

+ TIL’er værdier for alle TSCC, stratificeret for HPV-status, blev analyseret for alder, køn eller klinisk stadie, ingen sammenhæng blev fundet (data ikke vist).

Hazard ratio (HR) blev beregnet separat for HPV

+ og HPV

-TSCC, ved hjælp af både univariate og multivariate tests (tabel 4). For HPV

+ TSCC hazard ratio for et højt antal CD8

+ celler var 0,27 (p = 0,029), mens der for HPV

-TSCC hazard ratio for en høj CD8

+ /Foxp3

+ forhold var 0,27 (p = 0,048). For at bestemme om CD8

+ celler og CD8

+ /Foxp3

+ forholdet var uafhængige prognostiske faktorer blev en multivariat Cox-analyse udført med klinisk fase, alder og køn som kovariater (tabel 4). For HPV

+ TSCC, både antallet af CD8

+ celler og alder blev uafhængigt signifikant korreleret til 3-års DFS (p = 0,034 og p = 0,009, hhv.). For HPV

-TSCC både CD8

+ /Foxp3

+ ratio og scene var signifikant uafhængigt korreleret til 3-års DFS (p = 0,023 og p = 0,039, hhv.). Tilsvarende vil en høj CD8

+ /Foxp3

+ forhold korreleret til en 3-årig DFS både i univariate og multivariate analyser også for HPV

+ TSCC (HR 0,33, p = 0,048 og HR 0,23, p = 0,015 henholdsvis) (data ikke vist).

diskussion

I denne undersøgelse fandt vi en signifikant sammenhæng mellem en høj CD8

+ T-celle infiltration og klinisk resultat for både patienter med HPV

+ og HPV

-TSCC, samt mellem en høj CD8

+ /Foxp3

+ tIL ratio og sygdomsfri overlevelse for både patienter med HPV

+ og HPV

-TSCC. Desuden viste vi en sammenhæng både mellem tumor infiltrerer CD8

+ og Foxp3

+ T-celler til HPV status i TSCC.

Det faktum, at CD8

+ infiltration var mere udtalt og påvirket prognose positivt i denne undersøgelse for HPV

+ TSCC, kan være en vigtig grund til, hvorfor de fleste af HPV

+ TSCC har en god klinisk resultat i forhold til HPV

-TSCC [6], [7 ]. Dette ville være i overensstemmelse med eksperimentelle undersøgelser, der viser betydningen af ​​immunsystemet til at bekæmpe HPV

+ hoved og hals pladecellekræft (HNSCC) [24]. Resultatet er også i konkordans med mange undersøgelser af tumorer fra andre sites f.eks for kolon og livmoderhalskræft [13], [14], [15], [18]. Især i livmoderhalskræft, hvor det store flertal af tumorer er HPV

+, både et højt antal CD8

+ TIL og en høj CD8

+ /regulatoriske T-celle-forhold blev korreleret til fraværet af lymfeknudemetastase [14]. Et lignende resultat er også blevet offentliggjort for HNSCC, hvor Ogino og kolleger demonstrere en positiv sammenhæng mellem en høj CD8

+ T-celle infiltration og forårsage specifik overlevelse [25]. Desuden er tilstedeværelsen af ​​HPV16 specifikke T-celler i HPV

+ HNSCC blev for nylig påvist, selvom korrelation til prognose ikke blev undersøgt [26]. Den stærke positiv korrelation mellem CD8

+ TIL’er og god klinisk udfald for patienter med TSCC viser, at vurderingen af ​​CD8

+ TIL’er kunne bruges som en ekstra prognostisk biomarkør i kombination med tumor HPV-status.

Vi viste også, at en høj CD8

+ /Foxp3

+ T-celle-forholdet signifikant korreleret til en sygdomsfri overlevelse i både patienter med HPV

+ og HPV

-TSCC. Tidligere udgivelser har knyttet Foxp3

+ TIL’er til en dårligere prognose i f.eks æggestokkene og brystkræft [16], [18]. Endvidere har en høj procentdel af tregs blevet korreleret med en dårlig 5-års overlevelse i livmoderhalskræft [27]. Men der er også tilfælde, hvor Foxp3

+ TIL’er er blevet knyttet til en gunstig prognose, såsom f.eks i tyktarmskræft, Hodgkins lymfom og HNSCC [20], [21], [28]. Opnået i den foreliggende undersøgelse resultat indikerer, at infiltrerende T-celler også er af betydning for det kliniske resultat for patienter med HPV

-TSCC, om end muligvis i mindre grad. Vurderingen af ​​CD8

+ /Foxp3

+ T-celle-forhold kunne således også anvendes som et klinisk prognostisk markør for patienter med HPV

+ eller HPV

-TSCC.

Vigtigt er, at estimere CD8

+ og Foxp3

+ TIL’er ved IHC kan udføres ved patologiske enheder på hospitaler. HPV status TSCC allerede vurderes rutinemæssigt i nogle klinikker, fx ved Karolinska Universitetshospital i Stockholm, og hvis de anvendes i forbindelse med evaluering af CD8

+ og Foxp3

+ TIL’er i patologi enheder, der kan opnås en bedre forudsigelse af det kliniske resultat. Men størrelsen af ​​feltet evalueres og cut-off værdier skal defineres præcist.

Derudover har vi observeret, at HPV

+ TSCC havde en signifikant højere infiltration af både CD8

+ og foxp3

+ celler end HPV

-TSCC. Dette var ikke uventet, da HPV

+ TSCC udtrykker fremmede virale antigener. Faktisk viser dataene, at selvom immunforsvaret ikke har hæmme udviklingen af ​​HPV

+ TSCC, er der stadig et immunologisk forskel mellem HPV

+ og HPV

-TSCC.

det er vigtigt at bemærke, at tilstedeværelsen af ​​TIL’er i TSCC er ikke nok for tumor afvisning. Imidlertid er det blevet vist i en musemodel som et intakt immunforsvar er vigtigt for en fuldstændig tumor clearance ved strålingsbehandling [24]. Endvidere er det muligt, at bestråling kan aktivere immunresponset mod både tilbageværende levedygtige celler af den oprindelige tumor og imod lymfeknudemetastaser.

nylig har mange tumor biomarkører blevet udforsket med hensyn til prognose for patienter med HNSCC [ ,,,0],29], [30], [31], [32]. Men i de fleste af disse undersøgelser HPV status tumorer ikke blev taget i betragtning, og ofte tumorer fra forskellige HNSCC underordnede blev grupperet sammen, når biomarkører blev korreleret til prognosen. Resultaterne af den foreliggende undersøgelse viser, hvor vigtigt adskille tumorer afhængig af HPV-status. Desuden i undersøgelser af denne art, tumorerne bør også stratificeret afhængigt tumor subsite, idet f.eks den samlede overlevelse for patienter med HNSCC varierer afhængigt af både HPV status og tumor subsite.

Der er nogle begrænsninger i den foreliggende undersøgelse. For det første er det en retrospektiv undersøgelse med alle patienter diagnosticeret med TSCC i Stockholm i løbet af 2000-2006 og behandlet med hensigt at helbrede. Det er imidlertid vigtigt at bemærke, at behandlingen i denne periode blev standardiseret med konventionelle /accelereret RT. Desuden tidligere udgivelser, analysere det kliniske resultat af patienterne indgår i nærværende undersøgelse, har ikke kunnet påvise forskelle i kliniske resultater for patienter med svælg kræft afhængig af behandling [33], [34].

For det andet fleste TSCC dag er HPV

+ med en gunstig klinisk resultat for patienterne. Derfor blev denne gruppe reduceret i den foreliggende undersøgelse ved randomisering. På den anden side, var vi ikke i stand til at påvise eventuelle væsentlige forskelle mellem studiet prøven og det samlede materiale i denne gruppe. En anden begrænsning er de få antal patienter i HPV

– grupper, selv om alle patienter blev inkluderet med denne funktion. For bedre at studere HPV

-TSCC befolkning bør andre medicinske centre være inkluderet.

Endelig har vi ikke vurderet, om svulsten infiltrerende CD8

+ og Foxp3

+ celler er målrettet mod specifik tumor-associerede antigener eller analyseret for funktionel CD8

+ med f.eks Granzyme B. Eftersom Foxp3, selv ved lave niveauer, kan forbigående induceres i CD4

+ og CD8

+ T-celler efter stimulering, alle Foxp3

+ TIL’er kan ikke være tregs [35]. Men i forbindelse med denne undersøgelse, dvs. at finde klinisk relevante og let identificerbare markører, var dette ikke af betydning, selv om det ville være af interesse at behandle disse spørgsmål i andre undersøgelser.

Det kan konkluderes, tumorinfiltrerende CD8

+ og Foxp3

+ celler i TSCC vise forskellige profiler afhængigt tumor HPV status og kliniske resultat. Således kombinerer tilstedeværelsen af ​​CD8

+ T-celler og /eller CD8

+ /Foxp3

+ celle-forhold med HPV-status, kan være af additiv prognostisk værdi og for bedre individualisere patientbehandling.