PLoS ONE: human papillomavirus og Cystisk Node Metastase i Oropharyngeal Kræft og kræft med ukendt primærtumor Origin

Abstrakt

Den kliniske betydning af human papillomavirus (HPV) i nakken node metastase af kræft med ukendt primærtumor (CUP) er ikke veletableret. Vi havde til formål at tage fat på forholdet mellem HPV-status mellem node metastase og den primære tumor, og også relevansen af ​​HPV-status med hensyn til radiografisk opdaget cystisk node metastaser i hoved og hals pladecellekræft (HNSCC) og CUP. HPV-DNA blev undersøgt i 68 matchede par af node metastase og primær tumor, og i node metastase fra 27 kopper. I kirurgisk behandlede kopper, blev p16 undersøgt immunhistokemisk. Når tonsillektomi viste sig okkult tonsillær kræft i CUP, blev HPV-DNA og P16 også undersøgt i det okkulte primære. Cystisk node metastase på kontrast-forstærket computertomografi scanninger var korreleret med det primære sted og HPV-status i en anden serie af 255 HNSCCs og kopper med kendt HPV-status. Node metastaser var HPV-positiv i 19/37 (51%) svælg SCC’er (OPSCCs) og 10/27 (37%) kopper, men ikke i ikke-OPSCCs. Fluid blev indsamlet fra cystisk node metastaser med fin nål aspiration i to OPSCCs og en CUP, og alle væskeansamlinger var HPV-positive. HPV-status, herunder tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA, genotype, og fysiske status, samt ekspressionsmønsteret for p16 var ensartede mellem node metastase og primær eller okkult primær tumor. Okkult tonsillær kræft blev fundet oftere i p16-positive CUP end i p16-negative CUP (odds ratio (OR), 39,0; 95% konfidensinterval (CI), 1,4 til 377,8; P = 0,02). Radiografisk cystisk node metastase var specifik for OPSCC og CUP, og var forbundet med HPV positivitet forhold til nekrotisk eller fast node metastase (OR, 6,2; 95% CI, 1,2 til 45,7, P = 0,03). Afslutningsvis HPV status forbliver uændret efter metastase. Det okkulte primære af HPV-positive CUP er sandsynligvis lokaliseret i oropharynx. HPV-status bestemmes ud fra fine nåle aspirater letter diagnosen cystisk node metastase

Henvisning:. Yasui T, Morii E, Yamamoto Y, Yoshii T, Takenaka Y, Nakahara S, et al. (2014) human papillomavirus og Cystisk Node Metastase i Oropharyngeal Kræft og kræft med ukendt primærtumor Origin. PLoS ONE 9 (4): e95364. doi: 10,1371 /journal.pone.0095364

Redaktør: Craig Meyers, Penn State University School of Medicine, USA

Modtaget: 11. december 2013; Accepteret: 25 marts 2014; Udgivet: 21 April, 2014

Copyright: © 2014 Yasui et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering til at rapportere

konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Cervikal lymfeknude metastaser fra kræft med ukendt primærtumor ( CUP) er en sjælden klinisk enhed og i øjeblikket tegner sig for mere end 3% af hoved og hals pladecellekræft (HNSCC) [1]. I mange tilfælde efter dets første præsentation som CUP, er det primære sted afsløret, overvejende oropharynx, især i palatine tonsil og bunden af ​​tungen [2]. Oropharyngeal planocellulært karcinom (OPSCC) er ætiologisk klassificeres i to adskilte undertyper; den ene er tobak relaterede, mens den anden er forårsaget af human papillomavirus (HPV) -infektion [3], [4]. Overekspression af p16 fungerer som en surrogatmarkør for HPV-infektion, selv om en delmængde af p16-positive tumorer er HPV-negative [4]. HPV-positive og /eller p16-positiv OPSCC fortrinsvis opstår i Palatine tonsil og bunden af ​​tungen [4], hvilket tyder på relevansen af ​​HPV til CUP.

HPV prævalens i node metastase fra HNSCC har været godt studerede; det er blevet vist, at HPV-positive node metastase er specifik for OPSCC [5], [6], og at forholdet af HPV status mellem den primære tumor og dens tilsvarende node metastase ikke er veletableret. Selv om en række undersøgelser har vist god overensstemmelse af HPV-status mellem den primære tumor og knude metastase, prøvens størrelse hver undersøgelse var lille, og HPV fysisk status blev ikke behandlet [7] – [9]. HPV prævalens i node metastase fra CUP er blevet rapporteret at variere fra 28 til 92%, afhængigt af definitionen af ​​CUP [8] – [11], mens forholdet mellem HPV-status mellem knudepunktet metastaser og dens tilsvarende okkulte primær tumor har ikke blevet etableret.

foreningen af ​​OPSCC med histologisk identificeret cystisk node metastase er velkendt [12], mens størstedelen af ​​okkulte primærvalg i CUP med histologisk identificeret cystisk node metastaser er lokaliseret i Palatine tonsiller eller understellet tungen [13]; dette tyder inddragelse af HPV-infektion i dannelsen af ​​cystisk node metastase. Goldenberg et al. analyserede HPV status i dissekerede væv fra halsen af ​​OPSCC og CUP patienter, og fandt, at 87% (13/15) af cystiske metastatiske knuder var HPV-positive [14]. I en anden undersøgelse, er det blevet rapporteret, at en branchial kløft cyste ofte viser sig at være cystisk node metastase efter kirurgisk indgreb efterfulgt af histopatologisk undersøgelse [15]. Grunden til dette er, at både cystisk node metastase og en branchial kløft cyste stede radiografisk som laterale cervikale cyster, og at følsomheden med hensyn til påvisning af SCC-celler i cystisk væske ved hjælp af cytopatologiske undersøgelse er dårlig. Derfor et kirurgisk differentialdiagnose mellem disse to enheder i form af HPV status er af klinisk interesse. Den differentialdiagnose kræver ikke blot oprettelse af en associering mellem HPV-status og radiografisk identificeret cystisk node metastase, men også indsamlet af fin nål aspiration (FNA) udvikling af HPV-analyse af cystisk væske.

Vi har designet denne undersøgelse til bedre at forstå den kliniske betydning af HPV-status med hensyn til node metastase fra CUP. Til dette formål undersøgte vi HPV status, herunder tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA, genotype og fysiske tilstand, i matchede par af primær tumor og node metastase i en stor serie af HNSCC, og vurderet forholdet mellem den primære tumor og dens knudepunkt metastase hensyn HPV-status. Vi yderligere undersøgt ikke kun HPV prævalens i node metastase fra CUP, men også forholdet mellem node metastase og dens tilsvarende okkulte tonsillær kræft (bevist efter tonsillektomi) med hensyn til HPV-status og p16 udtryk mønster. Desuden har vi studeret sammenhængen mellem radiografisk opdaget cystisk node metastase og det primære sted og HPV-status, med vægt på HPV detektering i cystisk væske.

Materialer og metoder

Etik Statement

protokollen af ​​den foreliggende undersøgelse blev godkendt af Institutional Review Board of Osaka University i december 2004. Alle patienter forudsat skriftligt informeret samtykke.

patienter

HPV-status af den primære tumor og dens tilsvarende node metastase samt HPV status node metastase fra CUP, blev behandlet i både retrospektive og prospektive indstillinger. I den retrospektive indstilling, formalin-fikseret paraffin-indstøbt (FFPE) prøver fra 28 matchede par af primær og knude metastaser og fra 17 kopper var tilmeldt. Alle tumorer blev kirurgisk fjernet fra januar 2005 og marts 2010, uden at nogen forudgående behandling, og blev histopatologisk diagnosticeret som pladecellekræft. I den kommende indstilling, blev i alt 53 mistænkelige lymfeknude-positiv HNSCCs og kopper tilmeldt. Biopsi eksemplarer af mistænkelige primære tumorer og FNA eksemplarer af mistænkelig knude metastaser blev opnået fra ambulante patienter fra april 2010 og september 2012. biopsiprøver og FNA prøver blev opbevaret i RNAlater RNA stabilisering reagens (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA) og buffer ATL (QIAamp Mini Kit: QIAGEN Inc.), hhv. Når væskeansamling blev foretaget ved hjælp af FNA, var dens centrifugat opbevaret som beskrevet ovenfor. Kun en enkelt cyklus af FNA blev udført for HPV-analyse, hvorimod FNA gentages som nødvendigt for cytopatologiske analyser. Når tonsillektomi afslørede en okkult primær tumor i CUP patienter var de FFPE eksemplar af det okkulte primære analyseret for HPV-DNA og p16. Ekspression af p16 blev også undersøgt i kirurgisk fjernet node metastase fra CUP, uanset indstillingerne. For radiografisk analyse, i alt 255 HNSCC og CUP-patienter, som havde fået foretaget en forbehandling kontrast-forstærket CT-scanning og var blevet bevist patologisk at være knude positiv, blev indrulleret. Denne population omfattede retrospektive serie af 45 HNSCCs /kopper, den kommende serie af 50 HNSCCs /kopper, og den ekstra serie af 160 HNSCCs. HPV status yderligere serier var blevet vurderet ved anvendelse af FFPE biopsiprøver fra den primære tumor [16]. Diagnose af CUP blev foretaget efter grundig oparbejdning undladt at registrere en primær tumor trods patologisk bevist node metastaser. Oparbejdning omfattede følgende: sygehistorie; fysisk undersøgelse; hals CT-scanning og /eller MR; faryngolaryngeale endoskopi; øvre gastrointestinal endoskopi; mucosal biopsi af oropharynx og nasopharynx; og

18F-fluordeoxyglucose positronemissionstomografi (FDG-PET) eller FDG-PET /CT. Tonsillektomi blev ikke medtaget i kriterierne, fordi i princippet tonsillektomi blev udført samtidig med hals dissektion, når tumoren var resektabel.

Detection og typning af højrisiko-HPV-DNA og vurdering af HPV 16 fysiske tilstand

DNA blev ekstraheret fra FFPE prøver vha den DNeasy tissue kit (QIAGEN Inc.) og fra friske prøver vha QIAamp Mini kit (QIAGEN Inc.). Tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA blev screenet for ved hjælp af en indlejret polymerasekædereaktion (PCR) under anvendelse af PGMY09 /11 primersæt (for primær PCR) og GP5 + /6 + primersæt (for sekundær PCR) som tidligere rapporteret [17] . De sekundære PCR-produkter blev oprenset og sekventeret direkte under anvendelse af en 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Typing blev opnået ved at sammenligne sekvensen med dem for kendte HPV-typer ved hjælp af NCBI BLAST-programmet (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Den fysiske tilstand af HPV 16 blev rettet i overensstemmelse med forholdet mellem

E2

til

E6

kopiere numrene, som blev bestemt ved hjælp af real-time PCR-amplifikation af

E2

og

E6

åbne læserammer som tidligere rapporteret [18]. Den cervikale cancercellelinie Caski blev anvendt som en positiv kontrol [19].

Immunhistokemi af p16

Immunohistokemisk analyse af p16 blev udført under anvendelse af 4-um FFPE vævssnit med en passende positiv kontrol . Efter antigen-genvinding under anvendelse af en Pascal tryksat varmekammer (DAKO, Glostrup, Danmark) blev sektionerne inkuberet med anti-p16-antistof i en fortynding på 1:500 (klon LC8: Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TA, USA) . Efter inkubering blev anti-p16-antistof påvist ved anvendelse af ChemMate EnVision kit (DAKO) og visualiseret ved hjælp af diaminobenzidin som et chromogen. Negativ kontrol-farvning blev udført i fravær af primært antistof. Sager blev klassificeret som positive for p16, når 50% eller mere af celler viste nukleare og cytoplasmatisk farvning.

Definition af cystisk node på kontrast-forstærket CT-scanning

Definitionen af ​​cystisk noder på kontrastkontrol forbedrede CT-scanninger var i overensstemmelse med de kriterier rapporteret af Goldenberg et al. [14]. Noder med en runde eller ægformede, en tynd ( 2 mm) forbedring kapsel, homogen vand dæmpning og ingen intern kompleks, der var heterogene, eller havde fast område blev klassificeret som cystisk (Fig 1a.). Noder med tykkere massive vægge og /eller heterogene, centralvarme lav dæmpning blev klassificeret som nekrotisk (Fig 1b.); mens noder med et homogent fast indhold blev klassificeret som fast (Fig. 1c).

Bemærk en kontrast-fremmende tynd væg og homogen indhold lav densitet i cystisk node metastaser.

Statistisk analyse

symmetrien af ​​HPV status og /eller p16-ekspression mellem den primære tumor og dens tilsvarende node metastase blev undersøgt under anvendelse af kappa-testen. Forskellen i fænotypen af ​​HPV /p16 mellem node metastase fra CUP (med og uden okkult tonsillar kræft) blev undersøgt under anvendelse af Fisher-Freeman-Halton eksakte test. Det indbyrdes forhold mellem okkult tonsillær cancer og HPV tilstand og mellem okkult tonsillær cancer og p16-ekspression blev undersøgt ved hjælp af univariat analyse ved anvendelse af logistisk regressionsmodel og Clopper-Pearson eksakte test, hhv. Forskelle i forekomsten af ​​cystisk node metastase ifølge det primære sted blev vurderet ved hjælp af univariat analyse ved anvendelse af logistisk regressionsmodel eller Clopper-Pearson eksakte test, alt efter omstændighederne. Forholdet mellem HPV status og cystisk node metastase blev bedømt ved hjælp af univariat analyse ved anvendelse af logistisk regressionsmodel. Alle statistiske tests var tosidet. P-værdier for 0,05 blev anset som værende statistisk signifikant. Alle data blev analyseret ved hjælp af JMP Version 10.02 software (SAS Institute, Cary, NC, USA).

Resultater

Forholdet af HPV-status mellem primær og knude metastaser i OPSCC

i den retrospektive indstilling, 40% (6/15) af OPSCCs var HPV-positive og 60% (9/15) var HPV-negative, både med hensyn til den primære tumor og dens tilsvarende node metastase (tabel 1). Tilstedeværelsen eller fraværet af HPV-infektion var konsistent mellem den primære tumor og dens tilsvarende node metastase, der angiver ligheden i HPV-status mellem de to (P 0,0001). At bemærke er det faktum, at 17% (1/6) af HPV-positive OPSCCs havde flere metastatiske knuder, som alle var HPV-positive. Omvendt 33% (3/9) af HPV-negative OPSCCs havde flere metastatiske knuder, som alle var HPV-negative. Ingen af ​​de 13 ikke-OPSCCs (5 hypopharyngeal, 4 larynx, og 4 mundtlige kræft) var HPV-positive.

Som for den kommende indstilling, PCR-analyse lykkedes i 6% (3/53 ) af tilfældene på grund af dårlig DNA-forberedelse fra FNAs. Men gentagne FNAs dokumenteret malignitet i alle tre af disse sager. Derfor blev den fremtidsanalyse begrænset til 50 sager, som endelig blev diagnosticeret ved grundig klinisk oparbejdning at være følgende kræftformer: 22 svælg; 2 nasopharyngeal; 7 hypopharyngeal; 7 larynx; 2 mundtlig; og 10 kopper. I både den primære tumor og dens node metastase, 59% (13/22) af OPSCCs var HPV-positive, mens 41% (9/22) af OPSCCs og 100% (18/18) af de ikke-OPSCCs var HPV negativ i både den primære tumor og dens knudepunkt metastase; igen, angives dette ligheden i HPV-status mellem den primære tumor og dens knudepunkt metastase (P 0,0001; tabel 1). Kollektivt, 51% (19/37) af OPSCCs var HPV-positive, som alle stammer fra enten palatine tonsiller eller tungens basis. Som vist i tabel 2 og 3, både HPV-genotype og fysiske status var konsistente mellem den primære tumor og dens knudepunkt metastase (P 0,0001). HPV16 tegnede sig for 95% (18/19) af HPV-positive tilfælde, og HPV33 blev påvist i den resterende tilfælde. Komplet viral integration blev fundet i 56% (10/18) af HPV16-positive tilfælde, mens de resterende 44% (8/18) af HPV16-positive tilfælde udviste en blanding af episomalt og integreret virale former.

HPV prævalens i CUP og forhold af HPV-status mellem det okkulte primær og knude metastaser

i de retrospektive og prospektive indstillinger, 35% (6/17) og 40% (4/10 ) af kopper var HPV-positive, hvilket viser, at i alt 37% (10/27) af kopper var HPV-positive (tabel 1). Detaljerede karakteristika for kopper med hensyn til HPV er vist i tabel S1 for den retrospektive indstilling og i tabel S2 for den potentielle indstilling. HPV16 og HPV18 tegnede sig for 80% (8/10) og 20% ​​(2/10) af de 10 HPV-positive tilfælde, hhv. Komplet viral integration blev fundet i 63% (5/8) af HPV16-positive tilfælde, mens de resterende 38% (3/8) af HPV16-positive tilfælde udviste blandede virale former. Det skal bemærkes, at væske blev opsamlet ved FNA i tre tilfælde (2 OPSCCs og 1 kop) i den potentielle indstilling. Alle de tre væskeansamlinger blev fundet at være HPV-positiv, selv om gentagne FNA cytologi ikke har kunnet påvise maligne celler i en af ​​dem.

Af 27 patienter med CUP, 19 undergik tonsillektomi sammen med hals dissektion, som afslørede okkult tonsillær kræft i 32% (6/19). Forholdet mellem node metastase og dens tilsvarende okkulte tonsillar kræft vedrørende HPV status og p16-ekspression er opsummeret i tabel 4. Fænotypen af ​​HPV status og p16-ekspression var konsistent mellem node metastase og dens tilsvarende okkulte tonsillar cancer (P = 0,01). Som vist i tabel 2 og 3, HPV-genotype og fysiske status var konsistente mellem node metastase og dens tilsvarende okkulte tonsillar kræft. Fig. 2 afbilder hematoxylin og eosin-farvning og p16 immunohistokemi af okkult tonsillær cancer med cystisk node metastase. Den overfladiske mucosale lag af tonsil viste sig at være intakt, mens cancerceller, der udtrykker p16 var fremtrædende i en krypt lag med invasion i det submukøse lag (fig. 2a og 2b). Kræft væv, der afgrænset en tynd cystisk mur diffust udtrykt p16 (fig. 2c og 2d).

Målestokken svarer til 1 mm.

Af note, 100% (6/6) af de kopper med afsløret okkult tonsillær kræft udtrykte p16, mens 50% (3/6) var HPV-positive. I skarp kontrast, kun 23% (3/13) og 15% (2/13) af CUPS uden afsløret okkult tonsillær kræft var P16-positive og HPV-positive, hhv. Forskellen i fordelingen af ​​HPV /P16 fænotyper var statistisk signifikant mellem skålene, med og uden afsløret okkulte tonsillær kræft (P = 0,004); dette fund fik os til at undersøge forholdet mellem okkulte tonsillær kræft og HPV status eller p16-ekspression i node metastase fra CUP. Som vist i tabel 5, kan den mulighed, at okkult tonsillar kræft opdages efter tonsillektomi var signifikant højere, når node metastase fra CUP var p16-positive, end når det var p16-negative (odds ratio (OR), 39,0; 95% konfidensinterval (Cl), 1,4 til 377,8; P = 0,02). Selvom okkult tonsillær kræft blev bevist oftere i HPV-positive CUP end i HPV-negative CUP, har forskellen ikke statistisk signifikans (P = 0,17)

Foreningen af ​​radiografisk identificeret cystisk node metastase med primær tumorsted og HPV-status

Kontrast-forstærket CT-scanninger fra i alt 255 patienter med lymfeknude-positiv HNSCC eller CUP blev gennemgået (tabel 6). Ingen af ​​146 ikke-OPSCCs (18 Nasopharynxtumorers, 91 hypopharyngeal, 25 larynx, og 12 mundtlige kræftformer) viste radiografisk opdaget cystisk node metastase, mens 6% (5/82) af OPSCCs og 11% (3/27) af CUPS gjorde. Alle de fem OPSCCs med radiografisk opdaget cystisk node metastaser opstod i enten palatine tonsil eller bunden af ​​tungen. Forekomsten af ​​cystisk node metastase var signifikant lavere i ikke-OPSCC end i OPSCC (OR, 0,05; 95% CI, 0,004-0,8; P = 0,03). Af tilfældene med cystisk node metastase, 38% (3/8) viste multipel nodal metastase, som alle involverede nekrotisk node metastase. Alle de resterende fem tilfælde viste ensomme nodal metastase, som var cystisk. Fordi både HPV-infektion og cystisk node metastaser var specifikke for OPSCC og CUP, vi undersøgt sammenhængen mellem HPV-status med radiografisk fund af node metastaser i OPSCC og CUP (tabel 7). Sammenlignet med nekrotisk og /eller fast node metastase, cystisk node metastase var mere sandsynligt, at HPV-positive (33 versus 75%, eller, 6,2; 95% CI, 1,2 til 45,7, P = 0,03). Til gengæld frekvensen af ​​radiografisk påviselig cystisk node metastase var højere i HPV-positive tumorer end i HPV-negativ tumor (15 versus 3%, eller, 6,2; 95% CI, 1,3 til 43,8, P = 0,02).

Discussion

i den foreliggende undersøgelse har vi vist, at HPV-positive node metastase er specifik for OPSCC, især når OPSCC opstår i palatine tonsil og bunden af ​​tungen. Vi påviste også, at HPV status, herunder tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA, genotype og fysiske tilstand, var konsistent mellem den primære tumor og dens tilsvarende node metastase. Disse resultater antyder, at det okkulte primære tumor af CUP med HPV-positive node metastase er sandsynligvis lokaliseret i oropharynx, især i palatine tonsiller eller tungens basis. Resultater vedrørende vores serie af kopper var i overensstemmelse med dette forslag. Tonsillektomi afslørede okkult tonsillær kræft i 60% (3/5) af de kopper med HPV-positive node metastase og 67% (6/9) af de kopper med p16-positiv node metastase, men i ingen af ​​10 kopper med HPV-negative /p16-negative node metastase. Desuden har vi vist for første gang, at HPV-status, herunder tilstedeværelsen af ​​HPV-DNA, genotype, og fysiske status, samt ekspressionsmønsteret af p16 er konsistente mellem node metastase og dens tilsvarende okkulte tonsillar kræft. Kollektivt, har vi etableret ikke blot, at HPV-status tumoren forbliver uændret efter metastaser, men også, at den okkulte primære sted for CUP med HPV-relaterede node metastaser findes i oropharynx.

På baggrund af disse resultater, er det er mest sandsynligt i tilfælde af CUP med HPV-relaterede node metastase, at den okkulte primære tumor er lokaliseret i bunden af ​​tungen, medmindre okkult tonsillar kræft er bevist efter tonsillektomi. Weiss et al. rapporterede, at tonsillektomi og blind biopsi af tungens basis afslørede det okkulte primær tumor i alle de 12 kopper med HPV-positive node metastase, og i hver af de 11 kopper med p16-positive node metastase [8]. I vores serie, tonsillektomi undladt at afsløre okkult tonsillar kræft i 40% (2/5) af kopper med HPV-positive node metastase, og i 33% (3/9) af kopper med p16-positive node metastase, hvori det okkulte primære tumor var forventet at være lokaliseret i bunden af ​​tungen. Desuden fandt vi, at tonsillektomi mislykkedes med at afsløre det okkulte primær tumor i alle de 10 kopper med HPV-negative /P16-negative node metastaser. Ligeledes Park et al. rapporterede, at tonsillektomi og slimhinde biopsi var en succes i identifikationen af ​​okkult OPSCC i kun 7% (2/27) af kopper med HPV-negative node metastaser og i 14% (4/29) af kopper med p16-negative node metastaser [10 ]. Det ser ud til, at det er vanskeligt at identificere det okkulte primære tumor ved hjælp tonsillektomi når node metastase fra CUP er HPV-negativ /p16-negative.

Ifølge en systematisk gennemgang af HPV-typer i HNSCC, forekomsten af ​​HPV18 i OPSCC var lav; HPV18 udgjorde kun 9 af 909 (1,0%) HPV-positive OPSCC sager [20]. Desuden er langt de fleste ( 95%) af HPV18-positive HNSCCs var ikke OPSCCs. I modsætning hertil HPV 18 tegnede sig for to af 10 (20%) HPV-positive kopper i vores serie; desværre, begge patienter med HPV18-positive kopper ikke undergår tonsillektomi (tabel S1 og S2). Det er fortsat uklart, om eller ikke det okkulte primære sted i disse to kopper var tonsil. I betragtning af den ovennævnte opdagelse, at ikke-svælg SCC danner langt størstedelen af ​​HPV18-positive HNSCC tilfælde, er det sandsynligt, at den okkulte primære af HPV18-positive CUP eksisterer på andre end oropharynx sites. Dette er et interessant spørgsmål, som vil skal løses i fremtiden.

OPSCC og CUP ofte danner histologisk identificerbare cystisk node metastaser [12], [13]. Omvendt er cystisk node metastase ofte fejldiagnosticeret som værende en branchial kløft cyste [15]. Til gengæld er det ikke før kirurgisk indgreb efterfulgt af histopatologiske undersøgelse, at den branchial kløft cyste kan bevises at være cystisk node metastaser. Dette skyldes, at både cystisk node metastase og branchial kløft cyste stede radiografisk som laterale cervikale cyster, og fordi følsomheden af ​​cytopatologiske undersøgelse er dårlig i påvisningen af ​​maligne celler i cystisk væske. I cystisk node metastase, har følsomheden af ​​cytopatologiske diagnose blevet rapporteret at være i området fra 33-50% [15], [21]. For at finde en løsning vedrørende differentialdiagnose af disse to enheder, vi først behandlet forholdet mellem det primære site og radiografisk identificerbare cystisk node metastase på kontrast-forstærket CT-scanning. Vi fandt, at radiografisk påviselig cystisk node metastase var specifik for OPSCC og CUP, og at det underordnede websted af OPSCC med radiografisk påviselig cystisk node metastase var enten palatine tonsiller eller tungens basis. Fordi det primære sted specifikt for cystisk node metastase var identisk med det primære site specifik for HPV-infektion, vi næste undersøgt sammenhængen mellem HPV status og cystisk node metastase. Vi fandt, at radiografisk påviselig cystisk node metastase er mere sandsynligt, at HPV-positive sammenlignet med fast eller nekrotisk node metastase i OPSCC og CUP. Disse fund indikerer, at HPV positivitet af cystisk væske opsamlet ved FNA vil hjælpe med at gøre en endelig diagnose, nemlig at cyste af interesse er malign. In situ-hybridisering, som kan anvendes til påvisning af HPV-DNA i celle blokke fremstillet ud fra cystisk væskeansamling forekommer utilstrækkelige til dette formål på grund af lav cellularitet. PCR, som er overlegen i forhold til in situ-hybridisering i følsomhed, vil sandsynligvis tjene mere effektivt til påvisning af HPV-DNA i cystisk væskeansamling. I den foreliggende undersøgelse har vi vist for første gang muligheden for at detektere HPV DNA ved anvendelse nested PCR i væskeansamlinger aspireret fra cystisk node metastaser. Kollektivt, har vi vist, at radiografisk påviselig cystisk node metastase er sandsynligvis HPV-positive, og at PCR muliggør detektion af HPV-DNA i væskeansamling hjælp FNA. Disse resultater viser, at en lateral cervikal cyste hvis FNA væske er HPV-positive er cystisk node metastase, men ikke en branchial kløft cyste.

På kontrast-forstærket CT-scanning, 6% af node-positive OPSCC og 11% af node-positive CUP viste cystisk node metastaser. Denne forekomst af radiografisk påviselig cystisk node metastase i OPSCC og CUP er forholdsvis lav, sammenlignet med den for histologisk identificeret cystisk node metastase. Så meget som 56 og 73% af lymfeknude-positiv kræft i palatine tonsil og bunden af ​​tungen henholdsvis er blevet rapporteret at danne histologisk identificerbare cystisk node metastase [12]. Denne forskel sandsynligvis afspejler den begrænsede evne kontrast-forstærket CT-scanning til at visualisere en cystisk læsion. Det er vanskeligt at skelne en cystisk læsion fra et nekrotisk læsion, navnlig når læsionen af ​​interesse er lille. Selv når en stor knude metastase vises nekrotisk på kontrast-forstærket CT billeddannelse, FNA undertiden giver en væskeansamling, hvilket indikerer, at radiografisk knudepunktet synes at være nekrotisk men histologisk synes det at være cystisk.

Det kan konkluderes, vi har konstateret, at HPV-status af tumoren forbliver uændret efter metastase. I HPV-positive CUP, er det okkulte primære tumor sandsynligvis lokaliseret i oropharynx, især enten i palatine tonsiller eller i bunden af ​​tungen. HPV-positive OPSCC og CUP tendens til at danne cystisk node metastaser. PCR-analyse af FNA væske muliggør kirurgisk detektion af HPV-DNA, som kan gøre det lettere at differentialdiagnose af cystisk node metastase og brachialis kløft cyste.

Støtte oplysninger

tabel S1. .

Karakteristik af kræft med ukendt primærtumor i retrospektiv indstilling

doi: 10,1371 /journal.pone.0095364.s001

(XLSX)

tabel S2. Salg Karakteristik af kræft med ukendt primærtumor i Prospektiv Setting

doi:. 10,1371 /journal.pone.0095364.s002

(XLSX)