PLoS ONE: Høj Myeloperoxidase Positiv Cell Infiltration i kolorektal cancer er en uafhængig Gunstige Prognostisk Factor

Abstrakt

Baggrund

Kolorektal cancer (CRC) infiltration af adaptive immunsystemets celler korrelerer med gunstig prognose. Rolle det medfødte immunsystem er stadig diskuteres. Her behandles vi den prognostiske betydning af CRC infiltration af neutrofile granulocytter (NG).

Metoder

En TMA herunder sund slimhinde og klinisk kommenterede CRC prøver (n = 1491) blev farvet med MPO og CD15 specifikke antistoffer. MPO + og CD15 + positive immune celler blev talt af tre uafhængige observatører. Fænotypiske profiler af CRC infiltrerer MPO + og CD15 + celler blev valideret ved flowcytometri på cellesuspensioner afledt enzymatisk fordøjet kirurgiske prøver. Overlevelse analyse blev udført ved spaltning randomiserede data i uddannelse og validering delmængder

Resultater

MPO + og CD15 + celler infiltration var signifikant korreleret (p 0,0001; r = 0,76).. Imidlertid blev kun høj tæthed af MPO + celle infiltration forbundet med væsentlig forbedret overlevelse i uddannelse (

P

= 0,038) og validering (

P

= 0.002) sæt. I multivariat analyse, herunder T og N scenen, vaskulær invasion, tumor grænsen konfiguration og mikrosatellit ustabilitet status, MPO + celle infiltration bevist en uafhængig prognostisk markør generelt (

P

= 0,004; HR = 0,65, CI: ± 0,15) og i både uddannelse (

P

= 0,048) og validering (

P

= 0,036) sæt. Flow-cytometri analyse af CRC-suspensioner stammer fra kliniske prøver viste, at mens MPO + celler var stort set CD15 + /CD66b +, betydelige procentdele af CD15 + og CD66b + celler var MPO-.

Konklusioner

High density MPO + celle infiltration er en roman uafhængig gunstig prognostisk faktor i CRC

Henvisning:. Droeser RA, Hirt C, Eppenberger-Castori S, Zlobec i, Viehl CT, Frey DM, et al. (2013) Høj Myeloperoxidase Positiv Cell Infiltration i kolorektal cancer er en uafhængig Gunstige Prognostisk faktor. PLoS ONE 8 (5): e64814. doi: 10,1371 /journal.pone.0064814

Redaktør: Syed A. Aziz, Health Canada, Canada

Modtaget: Januar 18, 2013; Accepteret: 17. april, 2013; Udgivet: May 29, 2013 |

Copyright: © 2013 Droeser et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Økonomisk støtte til denne undersøgelse blev leveret af den schweiziske National Science Foundation (SNF) Grants Nr. PP00P3-133699, Nr. 31003A-122.235 og Nr. 320030-120320, den italienske sammenslutning for Cancer Research (AIRC) IG Grant Nr. 10555, Rainbow Foreningen for Forskning i Pediatric Oncology-Hematology /Den NANDO Peretti Foundation, og Lazio Regional agentur for transplantation og relaterede sygdomme. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Udvækst og progression af humane kolorektal kræft (CRC) er drevet af genmutationer og mikrosatellit instabilitet tumor iboende egenskaber [1], [2], og ved interaktion af kræftceller med microenvironmental stimuli fra ikke-transformerede celler [3], [4]. Navnlig cytokin og kemokin miljø og infiltration af immunkompetente celler signifikant indflydelse CRC udfald [5] – [8].

Infiltration af aktiverede CD8 + memory T-celler og ekspression af IFN-γ-genet i CRC blev overbevisende vist til være forbundet med gunstige prognose [5], [7]. Desuden har vi og andre vist, at Foxp3 + immun celle infiltration uafhængigt forudsiger forbedret overlevelse i CRC [9], [10].

rolle medfødte immunsystem celler er ikke undersøgt i sammenlignelig detaljer og kontroversielle data blev rapporteret vedrørende CRC infiltration af NK-celler [11] – [14] og makrofager [15] – [17]

Granulocytter har i vid udstrækning blevet tilsidesat af tumor immunologer [18].. De seneste undersøgelser, primært udført i eksperimentelle modeller tyder på, at neutrofile granulocytter kan forhindre metastatisk cancer progression [19]. Desuden blev de foreslog at gennemgå cytokin drevet differentiering i N1 og N2 celler udstyret med anti- og pro-tumor egenskaber henholdsvis [20], [21]. Disse resultater har ført til en genopstået interesse i granulocyt infiltration i kræft [22] – [24]

I tidligere arbejde, viste vi, at CRC infiltration af CD33 + /HLA-DR- /CD16 + myeloide celler er forbundet med. forbedret patient overlevelse [13]. Baseret på disse fænotypiske træk, vi hypotese, at CRC kunne infiltreret af granulocytter med en gunstig prognostisk betydning.

Myeloperoxidase (MPO) er en lysosomale enzym produceres i store mængder ved neutrofile granulocytter (NG) [25], især under deres tidlige modning fase. MPO katalyserer produktionen af ​​hypochlorsyrling fra hydrogenperoxid og chloridanion og oxiderer tyrosin at tyrosyl radikaler. Både hypochlorsyrling og tyrosyl radikaler er cytotoksisk over for en række forskellige mikroorganismer. Især er MPO også involveret i induktionen af ​​granulocyt apoptose efter aktiveringen [26], [27].

I en lille serie af CRC prøver (n = 67), er det blevet vist, at MPO + celleinfiltration er betydeligt højere i CRC end ved normal colon mucosa [28]. Imidlertid har prognostisk relevans af CRC infiltration af MPO + -celler ikke blevet behandlet hidtil.

CD15, også kendt som Lewis X og trinspecifik embryonisk antigen 1, er et kulhydrat adhæsionsmolekyle udtrykt på modne neutrofiler, der medierer fagocytose og kemotaksi [29]. Vigtigere, er blevet detekteret CD15-ekspression i tumorceller og fundet at korrelere med dårlig prognose i hoved og hals, gastriske og lungecancere [30] – [32]. I CRC blev ekspression af CD15 på tumorceller vist sig at forekomme under progression til metastatiske stadier [33] og at være forbundet med høj forekomst af tilbagefald og ringe overlevelse [34], [35]. Imidlertid har den prognostiske værdi af CRC infiltration af CD15 + immunceller ikke blevet undersøgt.

Her viser vi for første gang, at en undergruppe af CRC er kendetegnet ved en høj infiltration af MPO + og CD15 + positive celler. Vigtigst er høj MPO + celletæthed i CRC uafhængigt forbundet med gunstige prognose.

Materialer og metoder

Etik Statement

Skriftligt samtykke er givet fra patienterne til orientering skal lagres på hospitalet database og anvendes til forskning. Brugen af ​​dette klinisk kommenteret TMA for forskning blev godkendt af den tilsvarende etiske komité af Universitetshospitalet i Basel (Ethikkommission Beider Basel) og ex vivo analyser blev godkendt af Institutional Review Board (63/07). For frisk udtaget kliniske prøver, der indgår i denne undersøgelse skriftligt samtykke er givet fra patienter, der gennemgår kirurgisk behandling på Basel Universitetshospital.

Tissue Microarray Construction

TMA bruges i dette arbejde blev konstrueret ved hjælp af 1420 ikke-sammenhængende, primære CRC’er, som tidligere beskrevet [36]. Kort fortalt blev opnået formalinfikserede, paraffinindlejrede CRC vævsblokke. Vævscylinderne med en diameter på 0,6 mm blev udstanset fra morfologisk repræsentative områder af hver donorblokken og bringes i én modtager paraffin blok (30 × 25 mm), ved anvendelse af en halvautomatiseret væv arrayer. Hver dorn blev foretaget fra centrum af tumoren, således at hver TMA plet bestod af mindst 50% af tumorcellerne. En kerne per sag blev anvendt.

klinisk-patologisk funktioner

klinisk-patologisk data for 1420 CRC patienter inkluderet i TMA blev indsamlet retrospektivt i en ikke-lagdelt og ikke-matchede måde. Annotation inkluderet patientens alder, tumor diameter, placering, pT /pn stadium, klasse, histologisk subtype, vaskulær invasion, grænserne konfiguration, tilstedeværelse af peritumoral lymfatisk inflammation på den invasive tumor foran og sygdomsspecifikke overlevelse (tabel 1). Tumor grænserne konfiguration og peritumoral lymfocytisk inflammation blev vurderet ifølge Jass med den originale H 0,0001) korrelation mellem målingerne blev observeret. Evaluering af MLH1, MSH2, MSH6, CD16, CD68, CD8 og foxp3 specifikke farvninger i CRC TMA under efterforskning er tidligere blevet udgivet [9], [13], [39].

flowcytometri Analyser

Efter Institutional Review Board godkendelse (63/07), væv fra kirurgisk fjernet CRC og tilstødende normale slimhinde blev hakket, centrifugeret og resuspenderet i RPMI 1640 medium suppleret med 5% føtalt kalveserum, 2 mg /ml collagenase IV, 0,1 mg /ml hyaluronidase V og 0,2 mg /ml DNAse I (Sigma Aldrich, Basel, Schweiz). Efter 1 times fordøjelse, blev cellesuspensioner filtreret og centrifugeret. For fænotypisk analyse af overflademarkører blev celler farvet med mAb’er i 15 minutter på is i PBS, vasket en gang med PBS 0,5% FCS, 0,5 M EDTA buffer og fikseret i lysepuffer fra BD Bioscience (1:10). Prøver blev derefter permeabiliseret i BD fiksering /permeabilisering buffer. Til intracellulær farvning blev en anti-MPO reagens eller en isotype matchet negativ kontrol-antistof tilsat til en 15 minutters inkubation ved stuetemperatur. Efter en PBS vask blev cellerne suspenderet i vaskebuffer og analyseret ved flowcytometri under anvendelse af en 2-laser BD FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA). Resultaterne blev analyseret ved Cell Quest (Becton Dickinson, San Jose, CA) og Flow Jo (Tree stjerne, Ashland, OR) software.

Statistisk analyse

Cut-off scores bruges til at klassificere CRC med lav eller høj MPO + eller CD15 + infiltration blev opnået ved regression træ analyse, evaluering følsomhed og falsk positiv sats for diskrimination af overlevende og ikke-overlevende, på alle tumorprøver [40]. Specifikke scoringer blev sat til 60 celler /TMA-hulning for MPO + og 46 celler /TMA-hulning for CD15 + infiltration. Chi-square eller Fishers eksakte test blev anvendt til bestemmelse associeringen af ​​MPO + og CD15 + infiltration og klinisk-patologiske træk. Univariate overlevelse blev udført ved Kaplan-Meier-metoden og log rank test. Antagelsen af ​​proportionale farer blev verificeret for begge mærker ved at analysere korrelationen af ​​Schoenfeld residualer og rækken af ​​individuelle svigt gange. Enhver manglende klinisk-patologisk oplysninger blev antaget at mangle tilfældigt. Efterfølgende blev MPO + og CD15 + celle infiltration data indgået multivariate Cox regressionsanalyse og hazard ratio (HR) og intervaller 95% sikkerhedsgrænser (CI) blev anvendt til at bestemme foreninger med overlevelsestid. Den multivariate Cox regressionsanalyse blev udført med 975 tilfælde siden manglende værdier blev udelukket fra modellen.

Spearman rang korrelation blev brugt til at analysere sammenhængen mellem MPO +, CD15 +, CD16 +, CD68 +, CD8 + og Foxp3 + celle infiltration. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af R i386 Version 2.15.2 (https://www.R-project.org). Data rapportering blev udført i overensstemmelse med bemærkningen kriterier [41]

Resultater

CRC Infiltration af MPO + og CD15 + celler:. Detection og associeringsaftalen med klinisk-patologisk funktioner

MPO + og CD15 + -celler kunne med held identificeret i TMA under efterforskning af specifikke mAbs. Figur 1A-D viser repræsentative farvninger af CRC med lav og høj MPO + eller CD15 + celle infiltration.

CRC prøver blev farvet med MPO og CD15 specifikke monoklonale antistoffer (klon 59A5, Novocastra og klone Carb-1, Leica, henholdsvis ). Tumor slag er repræsentative for lav (panel A og C) og høj (panel B og D) densitet på CRC infiltrerende MPO + (panel A-B) og CD15 + (panel C-D) celler. Forstørrelse: 20x. Panel E rapporterer fordelingen af ​​MPO + celler i normal mucosa (E1), total CRC (E2), MMR-defekte CRC (E3) og MMR-dygtige CRC (E4). Den grønne linje angiver cut-off på 60 celler /dorn som defineret ved regression træ analyse. Panel F rapporterer fordelingen af ​​CD15 + -celler i normal mucosa (F1), total CRC (F2), MMR-defekte CRC (F3) og MMR-dygtige CRC (F4). Den grønne linje angiver cut-off på 46 celler /hulning som defineret ved regression træ analyse.

Ud af 1420 CRC individuelle prøver, kunne MPO udtryk evalueres i 1225 prøver, herunder 1031 MMR-dygtige og 194 MFR-manglende CRC. CD15-ekspression var evaluerbare i 1191 CRC prøver, herunder 817 MFR dygtige og 191 MFR deficiente prøver. Antallet af prøver, evalueret for hver funktion er angivet i absolutte tal og procenter i tabel 2. Udfald skyldtes tab af slag under TMA farvning forberedelse eller manglende oplysninger, og som regel tegnede sig for 15% af data (tabeller 1-2).

Normalt colon mucosa blev faktisk infiltreret af MPO + og CD15 + celler (gennemsnit: 6,4, median: 2, range 0-59 celler /hulning for MPO (n = 48) og betyder: 4.3, median: 1, range 0-35 celler /hulning for CD15 (n = 47), henholdsvis). Men en væsentlig højere (

P

0,001) infiltration af MPO + og CD15 + celler kunne påvises i CRC prøver (betyder: 26,7, median: 23, range 0-150 celler /hulning for MPO (n = 1225 ) og betyder: 16,4, median: 7, range 0-125 celler /hulning for CD15 (n = 1191), henholdsvis; figur 1E-F)

MPO + og CD15 + infiltration, som vurderet af absolutte celletal. , var signifikant højere i MMR mangelfuld end i MMR dygtige CRC (median: 30 celler /punch i mangelfuld vs. 21 celler /punch i dygtige CRC

P

= 0,007 og 9 celler /punch i mangelfuld vs 6 celler /punch i dygtige CRC

P

= 0,05, for MPO og CD15 henholdsvis;. tal 2E-F)

CRC kirurgiske prøver var enzymatisk fordøjet og straks farvet med fluorochrom mærkede mAbs anerkende MPO, HLA DR, CD66b, CD15 og CD16, som angivet i “materialer og metoder”. Panel A rapporterer en repræsentant farvning, mens felt B opsummerer resultater fra frisk udtaget prøver (n = 8) vedrørende ekspressionen af ​​de angivne markører i CRC infiltrerer MPO + celler.

Regression træ analyse defineret cut-off scorer for MPO + og CD15 + CRC infiltrerende celler detekteret i individuelle hudbiopsier (n = 60 og n = 46, henholdsvis) blev anvendt til at vurdere klinisk-patologiske korrelationer.

univariate Cox regressionsanalyse viste, at høj densitet MPO + celleinfiltration (≥ 60 celler /punch), påviselige i 14,5% af tumorer, var signifikant forbundet med højere alder af patienterne (

P

= 0,04). Vigtigst var det signifikant associeret med tidlig (pT1-2) tumor fase (

P

= 0,007), fravær af lokalt recidiv (

P

= 0,031) og højere 5-års overlevelse (

P

= 0,0009) (tabel 2).

høj tæthed af CD15 + infiltrerende celler (≥46 celler /punch), påviselige i 10,8% af tumorer, var signifikant associeret med venstre sidet placering (

P

= 0,018), tidligt (pT1-2) fase (

P

= 0,0004), fravær af lokalt recidiv (

P

= 0,03) og højere 5- års overlevelse (

P

= 0,033) (tabel 2).

Sammenhæng mellem MPO +, CD15 +, CD16 + og CD68 + tumorinfiltrerende myeloide celler

For at udforske relationer mellem tumor infiltration af celler, der udtrykker MPO og andre immune markører (CD15, CD16, CD68, CD8, foxp3) udtrykt af immunkompetente celler infiltrerer CRC, data fra yderligere immun-histokemiske farvninger af samme TMA fra tidligere undersøgelser blev anvendt [9], [13] , [39]. Den statistisk stærkeste korrelation kunne påvises mellem MPO + og CD15 + celler infiltration (r = 0,75,

P

0,0001), mens korrelationer af mindre betydning var påviselige med CD16 + (r = 0,32), CD68 + (r = 0,35) , CD8 + (r = 0,13) og foxp3 + (r = 0,21) celle infiltration.

Ex vivo Karakterisering af MPO + celler fra Frisk Fjernede CRC

for at vurdere i detaljer fænotypiske karakteristika væv infiltrerer MPO + celler , frisk udskåret CRC (n = 8) blev enzymatisk spaltet, og enkeltcellesuspensioner blev analyseret ved flowcytometri. Eksempler på dette fænotypisk analyse er rapporteret i figur 2a.

Det store flertal af CRC infiltrere, MPO + celler CD15 + (90,3% ± 5,6%), CD16 +, (77,6 ± 19,4%), og CD66b + (80,6 ± 19,9%; figur 2b). Interessant MPO + -celler detekterbare i autologt normal slimhinde vises en lignende (P 0,05) markør ekspressionsmønster (data ikke vist). Især dog over betydelige procentdele af MPO- /CD66b + -celler (47,3 ± 35,7%) og, mere forventeligt, af MPO- /CD15 + celler (78,0 ± 17,7%) af eventuelt kræft natur var også detekterbar i CRC afledte cellesuspensioner.

Prognostisk Betydningen af ​​MPO + og CD15 + Cell Infiltration i CRC mikromiljø

Median overlevelsestid var 50 og 46 måneder for patienter med høj eller lav MPO + celletæthed hhv. High MPO + celleinfiltration var signifikant (P = 0,0003) i forbindelse med bedre prognose (0,59 HR, 95% CI: 0,45-0,74), i sammenligning med tumorer med lav MPO + celleinfiltration i univariate Cox regressionsanalyse. Ved opdeling af kohorten i en test og en validering sæt, var høj score MPO + celle infiltration stadig forbundet med en markant forbedret overlevelse (

P

= 0,038 og

P

= 0,002, henholdsvis; figur 3A -B). Adskillige randomiseringer af den samlede kohorte blev forsøgt, og alle resultater blev fundet at være sammenlignelige.

Kaplan-Meier samlede overlevelse kurver blev udformet i henhold til MPO + og CD15 + tumor infiltration hos patienter, der bærer CRC. I panelerne A-C, stiplede linier refererer til høj tæthed og sorte linjer til lav densitet infiltration efter cut-off-værdier fastsat af regression træ analyse (60 celler /hulning for MPO + og 46 celler /hulning for CD15 + celle infiltration). Paneler A og B rapport virkningerne af høj MPO + celle infiltration, som påvist i uddannelse (n = 609; 255 dødsfald observeret i 519 patienter med lav CRC infiltration af MPO + celler og 28 dødsfald observeret i 90 patienter med tumorer med høj MPO + celle infiltration ,

P

= 0,038) og i valideringen sæt (n = 583; 234 dødsfald observeret i 498 patienter med lav CRC infiltration af MPO + -celler og 23 dødsfald observeret i 85 patienter med tumorer med høj MPO + celleinfiltration,

P

= 0,002). Panel C rapporterer virkningen af ​​høje CD15 + CRC infiltration i hele gruppen af ​​patienter, der undersøges (n = 1169; 458 dødsfald observeret i 1041 patienter med lav CRC infiltration af CD15 + -celler og 47 dødsfald observeret i 128 patienter med tumorer med høj CD15 + celleinfiltration ,

P

= 0,051). I panel D kumulative virkninger af tumor infiltration af MPO + og CD15 + celler blev undersøgt. Rosa linje (430/946) henviser til tumorer med lav MPO + /CD15 + celle infiltration. Lyseblå linje (18/34) henviser til tumorer med lav MPO + og høj CD15 + celle infiltration. Lila linje (29/91) henviser til tumorer med høj MPO + /CD15 + celle infiltration og grøn linje (18/76) henviser til CRC med høj MPO + og lav CD15 + celle infiltration (n = 1147; 430 dødsfald observeret i 946 patienter med lav CRC infiltration af MPO + og CD15 + celler, 18 dødsfald observeret i 34 patienter med tumorer med høj CD15 + og lav MPO + celle infiltration, 29 dødsfald observeret i 91 patienter med høj CRC infiltration af MPO + og CD15 + celler; 18 dødsfald observeret i 76 patienter med tumorer med høj MPO + og lav CD15 + celle infiltration,

P

= 0,002).

i univariat analyse overlevelse blev også øget i tilfælde af høj score CD15 + celle infiltration (

P

= 0,051, figur 3C). En kombination analyse viste imidlertid, at MPO er den dominerende markør forbundet med forbedret prognose, uden relevant additiv fordel leveres af CD15 positivitet (figur 3D).

Vigtigst i multivariat analyse, høj score MPO +, men ikke CD15 + blev celleinfiltration uafhængigt associeret med gunstig prognose efter justering for flere kendte prognostiske faktorer som alder, køn, T scenen, N fase, tumor kvalitet, vaskulær invasion, tumor grænsen konfiguration og mikrosatellit stabilitet (

P

= 0,004 ; tabel 3). Også i de to lagdelte kollektiver effekten af ​​MPO + celle infiltration på overlevelse af patienter med CRC forblev signifikant (

P

= 0,048 og

P

= 0,036 i afprøvning og validering sæt henholdsvis).

diskussion

så vidt vi ved, er dette den første undersøgelse identificerer MPO + neutrofil granulocyt tumor infiltration som en selvstændig positiv prognostisk faktor i CRC.

myeloid celleinfiltration er kendt for at fremme tumorvækst og at være forbundet med dårlig prognose i en række forskellige humane cancere [42]. Især har tumorassocierede makrofager blevet angivet som obligate partnere for tumorprogression og metastase-dannelse [43]. har også vist sig granulocytinfiltration at være forbundet med dårlig prognose i forskellige tumorer, herunder lungekræft og nyre- og hepatocellulært carcinom [44] – [47]. I den forbindelse kan CRC repræsenterer en interessant undtagelse [48], [49]. Faktisk er der rapporteret kontroversielle data på den prognostiske betydning af makrofag infiltration i CRC [50] – [54]

er fundet neutrofil infiltration øges i overgangen fra normal til dysplastiske og kræft slimhinde [55. ]. Endvidere er for nylig blevet foreslået, CRC infiltration af CD66b + celler til at være forbundet med negative prognose [56].

I tidligere arbejde viste vi, at CRC infiltration af CD16 + celler korrelerer med forbedret overlevelse [13]. Denne markør udtrykkes i neutrofiler, i en undergruppe af makrofager og i NK-celler [57], [58]. Faktisk NK-celle infiltration i CRC er ubetydelig [13], [14] og blottet for prognostisk betydning [59]. Da CRC infiltrerende CD16 + celler er også CD11b + /CD33 + /HLA-DR-, i denne undersøgelse fokuserede vi på analysen af ​​celler, der udtrykker MPO og CD15 granulocyt markører.

I univariat analyse høj tæthed CRC infiltration af celler, der udtrykker enten markør var associeret med forbedret overlevelse. Men efter justering for flere sammenligninger udført for at kompensere for den sonderende karakter af denne analyse denne gunstige prognostisk relevans blev opretholdt i MPO + men ikke for CD15 + celle infiltration.

Det er vigtigt, i overensstemmelse med en tidligere offentliggjorte rapport [55 ] vi observeret, at MPO + og CD15 + celler fortrinsvis koloniseret CRC væv, mens de dårligt infiltreret normal colon mucosa, hvilket tyder på, at de kunne være specielt rekrutteret til tumoren mikromiljø. Interessant, MPO + celle infiltration var højere i MMR-mangel end i MMR-dygtige CRC som tidligere foreslået af en undersøgelse foretaget med 67 prøver fra et begrænset antal kræfttilfælde (n = 35) [28].

flow- cytometri af fordøjet parrede normale og ondartede væv indikerer, at i både sundt slimhinde og CRC infiltrerende MPO + celler er CD15 + /CD16 + /CD66b + /HLA-DR-, i overensstemmelse med en granulocytisk afstamning. Vigtigst vi imidlertid observeret betydelige procentdele af CD66b + /MPO- celler infiltrerer CRC. Disse data kan forklare uoverensstemmelserne mellem vores resultater og en tidligere rapport med fokus på CD66b + CRC infiltrerende celler [56]. Navnlig er neutrofiler med lignende fænotypiske karakteristika også vist sig at infiltrere hoved og hals kræft [60].

Tilsvarende tilstedeværelsen af ​​CD15 + /MPO- celler i sundt mucosa og cancervæv kunne forklare forskellen prognostiske relevans af disse markører. Især dog MPO-genekspression var ikke påviselig i CRC eller normale mucosa prøver (data ikke vist) konsistente med en moden granulocyt karakter MPO + infiltrerende celler [61].

MPO aktivitet er blevet foreslået at bidrage til patogenesen af degenerative sygdomme, herunder åreforkalkning, multipel sklerose og Alzheimers sygdom [62]. Desuden høj MPO aktivitet eller MPO + celle infiltration er blevet påvist, i esophageal [63], og gynækologisk cancer [64], [65] og i CRC [28], [66], [67], men deres prognostiske effekt blev ikke analyseret .

på trods af tidlige rapporter dokumenterer deres evne til at mediere tumorcellecytotoksisitet [68] granulocytter er stort set blevet forsømt af tumor immunologer [18]. Men eksperimentelle modeller i fortiden har vist, at kolorektal cancer celler transficeret med G-CSF-genet kan afvises af tumor infiltrerer neutrofiler ved interaktion med IFN-γ producerende T-celler [69]. Granulocytter blev også påvist at udtrykke co-stimulerende molekyler og være i stand til at præsentere antigener [70], [71], hvilket antyder muligheden for en rolle i initieringen af ​​antigenspecifikke antitumor responser.

For nylig bevis for evnen hos granulocytter til at inhibere lunge metastase-dannelse i en eksperimentel brystkræft model blev leveret [19]. Endvidere kapaciteten af ​​granulocytter undergå TGF-β afhængige polarisering i N1 og N2 funktionelle profiler, kendetegnet ved anti- eller pro-tumorale egenskaber henholdsvis lighed med makrofager, er også blevet dokumenteret [20].

den molekylære baggrund underliggende CRC infiltration af MPO + -celler og dens prognostisk betydning er uklar. Disse fænomener kan afspejle chemokin produktion af aktiverede T-celler, og derfor indirekte skyldes igangværende antitumorale adaptive responser. Alternativt kan de være relateret til produktionen af ​​granulocyt tiltrække kemokiner ved tumorceller. Mindst CXCL8 (IL-8) er kendt for at blive produceret af CRC-celler. Imidlertid blev produktionen foreslået at være forbundet med øget angiogenese og tumor formidling [72]. På den anden side har vi og andre tidligere vist, at GM-CSF, fremme granulocyt modning og overlevelse, kan også fremstilles ved CRC celler [73], [74].

Vores resultater bidrager til karakterisering af de komplekse funktioner, der ligger i tarmen mikromiljø og med CRC-immunsystem interaktion [75]. Yderligere forskning er påkrævet for at afklare molekylære mekanismer bag den uafhængige prognostiske effekt af MPO + celler i CRC. Vigtigere er det, her viser vi, at CRC infiltrerende MPO + celler udtrykker CD16 Fcy mellemliggende affinitet receptor. Evnen af ​​granulocytter til at mediere antistofafhængig cellulær cytotoksicitet (ADCC) diskuteres. Men tilgængeligheden af ​​nye terapeutiske mAb med glycomanipuleret Fc fragmenter karakteriseret ved øget affinitet for Fcy receptorer [76] kan føre til en revurdering af effektor betydning granulocytter.

Inden for disse rammer er det fristende at spekulere, at neutrofil infiltration bør indgå i de nuværende prognostiske modeller for CRC [77], og at det kunne udgøre en vigtig roman lagdeling faktor for randomisering i specifikke kliniske forsøg.