PLoS ONE: hypometylering-Associated opregulering af TCF3 Expression og Gentagelse i fase II og III kolorektal Cancer

Abstrakt

Baggrund og mål

transskription faktor 3 (

TCF3

) implicerer Wnt signalvejen og regulerer E-cadherin udtryk, som er involveret i aggressivitet af tumorer. Denne undersøgelse har til formål at undersøge den rolle,

TCF3

forudsige prognosen for patienter med stadie II og III kolorektal cancer (CRC).

Metoder

Real-Time kvantitativ PCR var udført i 64 friske CRC væv og 6 cellelinjer at undersøge

TCF3

mRNA-ekspression. TCF3 proteinekspressionssystemer dynamik blev påvist ved immunhistokemi af 118 paraffinindlejrede prøver, og den kliniske betydning af TCF3 blev vurderet ved klinisk korrelation og Kaplan-Meier-analyser. Afvigende hypometylering af

TCF3

promotor blev også undersøgt ved hjælp af bisulfit sekventering og methylering specifik PCR.

Resultater

opregulering af

TCF3

mRNA var ofte påvises både i CRC væv med tilbagefald og metastase-afledt cellelinier. Udtrykket niveau TCF3 protein blev signifikant korreleret med histologisk type (

P

= 0,038) og sygdomsfri overlevelse tid (

P

= 0,002). Højere TCF3 udtryk angivet dårlige prognostiske udfald (

P

0,05, log-rank test). Multivariat analyse viste også stærk TCF3 proteinekspression og perineurale invasion var uafhængige negative prognosticators i CRC (

P

= 0,010, 0,000). Endvidere blev det vist, at promotor hypometylering af

TCF3

er forbundet med dets op-udtryk.

Konklusioner

Denne undersøgelse fremhævede prognostiske værdi af

TCF3

i fase II og III CRC. Den opregulering af

TCF3

, som hovedsageligt skyldes promotor hypometylering, er en af ​​de molekylære mekanismer, der er involveret i udviklingen og progressionen af ​​CRC

Henvisning:. Li C, Cai S, Wang X, Jiang Z (2014) hypometylering-associerede opregulering af

TCF3

Expression og Gentagelse i fase II og III kolorektal cancer. PLoS ONE 9 (11): e112005. doi: 10,1371 /journal.pone.0112005

Redaktør: Anthony WI. Lo, Queen Mary Hospital, Hongkong

Modtaget: April 10, 2014 Accepteret: Oktober 11, 2014; Udgivet: November 6, 2014

Copyright: © 2014 Li et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at for godkendte årsager, nogle adgangsbegrænsninger anvendelse på de data, der ligger til grund for resultaterne. Data er tilgængelige fra Fudan University Shanghai Cancer Center etiske komité for forskere, der opfylder kriterierne for adgang til fortrolige data. Anmodninger om adgang til data kan sendes til professor Sanjun Cai. (E-mail: [email protected])

Finansiering: Denne undersøgelse blev støttet af Postdoc Science Foundation of Heilongjiang provinsen (LRB87859), Medicinsk Scientific Research Foundation i Heilongjiang provinsen (2011-144), åbningen Projekt Key Laboratory of Medical Genetics of Heilongjiang videregående uddannelsesinstitutioner og Natural Science Foundation of Heilongjiang provinsen (H201332). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er en af ​​de tre førende årsager til kræft-relaterede dødsfald blandt verdensplan [1]. Trin II og III tumorer tilsammen repræsenterer omkring 70% af CRC patienter [2]. Regional lymfeknudemetastase er en af ​​de mest kraftfulde indikatorer for aggressivitet CRCs og hjælpemidler til at forudsige det kliniske resultat. Men en tredjedel af CRC patienter uden histologiske tegn på lymfeknude involvering dø inden for fem år efter operationen fra fjernmetastaser eller lokalt recidiv, der tydede på, at nodal status ikke kan forudsige det kliniske forløb af CRC tilstrækkeligt [3]. Det er derfor vigtigt at identificere prognostiske faktorer forudsiger dårligt resultat og vejledende terapi i fase II og III CRC.

Transskription faktor 3-gen (

TCF3

) blev placeret i kromosomal band 19p13.3.

TCF3

er en allestedsnærværende udtrykt transskription regulator og koder to grundlæggende helix-loop-helix (HLH) transkriptionsfaktorer, E12 og E47 [4]. Disse to proteiner er kendetegnet ved brede ekspressionsmønster og evne til at binde DNA [5] – [8]. Flere undersøgelser har rapporteret den nye rolle

TCF3

i eksperimentelle tumorer. Overekspression af TCF3 er blevet påvist i CRC [9], prostatacancer [10], [11], gastrisk cancer [12] og nyrecancer [13]. Som en transkriptionel repressor af E-cadherin,

TCF3

impliceret i epithelial til mesenkymale overgang og kan være forbundet med tumor aggressivitet [14]. Stigende transkriptionsaktivitet af

TCF /β-catenin

komplekset er den initierende begivenhed i de fleste kolorektale sporadiske tumorer [15]. Selv betydelige undersøgelser havde vist

TCF3

var en tumor promotor, dens rolle i kræft progression er stadig kontroversiel [16], [17]. Patel

et al

. forudsat tre scenarier at demonstrere potentialet

TCF3

regulerede mekanismer på molekylært niveau [11].

Målet med denne undersøgelse er at vurdere den kliniske betydning af

TCF3

i human CRC, og at undersøge mekanismer medierer overekspression af

TCF3

, der bistår tidligt at identificere en høj risiko gentagelse delmængde af patienterne med trin II og III CRC.

Materialer og metoder

Patienter og vævsprøver

Fra april 2000 til november 2004 64 friske CRC væv, 36 med gentagelse og 28 uden tilbagefald, blev indsamlet umiddelbart efter operation på Fudan University i Shanghai Cancer center (Shanghai, Kina ). Karakteristik af prøver blev vist i tabel 1. I alt 118 paraffinindlejrede prøver, 78 med gentagelse og 40 uden tilbagefald, blev indsamlet retrospektivt fra arkivalier opbevares i afdelingen for patologi på Fudan University i Shanghai Cancer Center (Shanghai, Kina) fra februar 1993 og marts 2004 disse prøver var fra forskellige patienter fra dem, der anvendes til mRNA-analyse (tabel 2).

Alle prøver undersøgte blev taget fra vitale kerner af Histopatologisk bekræftede kræft ved primær kirurgi hos patienter der ikke er genstand for nogen lokal eller systemisk behandling før operation. Tumor prøver blev gennemgået af mindst 2 erfarne patologer, og tumor fase blev tildelt på grundlag af systemet af Den Internationale Union Against Cancer. Ingen fase II, men alle fase III-patienter fik postoperativ kemoterapi, men ingen patient fik strålebehandling.

sygdomsfri overlevelse blev defineret som den forløbne tid fra datoen for den første diagnose til udseendet af lokale tilbagefald eller fjernmetastaser . Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter, og forskningen protokollen blev godkendt af den etiske komité på Fudan University i Shanghai Cancer Center.

Cellelinjer

Seks humane CRC cellelinjer blev opnået fra den amerikanske Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Tre er primær-tumor-afledte linier (SW480, Caco-2, HCT116), 2 er lymfe-knude-metastaser-afledte linier (SW620, LoVo), og 1 er abdominal vattersot-metastaser afledt linje (Colo205). Cellelinier LoVo og Colo205 blev dyrket i RPMI-1640-medium, hvorimod Caco-2 og HCT116 blev dyrket i Eagles minimale essentielle medium og McCoys 5a medium modificeret hhv. Både SW480 og SW620 blev dyrket i Leibovitz L-15-medium. Alle medier blev suppleret med 10% føtalt bovint serum (GIBCO, USA), penicillin 100 IU /ml og streptomycin 100 ug /ml ved 37 ° C i en CO 5%

2- fugtig atmosfære. Fremgangsmåden til cellekultur er tidligere blevet beskrevet [18].

mRNA analyse ved qPCR

Totalt RNA blev isoleret med en RNeasy Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Tyskland) og behandlet med DNase. Ifølge producentens instruktioner, blev cDNA’er syntetiseret med oligo-dT-primere (Promega, Madison, WI).

TCF3

-specifikke primere var 5′-CTCGAGAAGAACAGGCCAAG-3 ‘(forword) og 5′-GGGGCAGGTACTGAACACAT-3’ (tilbage). Glyceraldehyd-3-phosphatdehydrogenase (

GAPDH

) tjente som en kontrol for normalisering af genekspression og blev amplificeret under anvendelse af primere 5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ‘(fremadrettet) og 5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ (revers) . QPCR blev udført under anvendelse af standard PCR-cyklus på en Detektionssekvensen systemet ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems), og amplificeret cDNA blev påvist ved SYBR Green I dye (Qiagen GmbH, Tyskland). Data blev analyseret under anvendelse ABI Prism 7900 SDS software (Sequence Detection System 2.0; Applied Biosystems). Forhold mellem intensiteterne af målgenet og

GAPDH

signaler blev anvendt som et relativt mål for ekspressionsniveauet af målgener. Alle forsøg blev gentaget tre gange.

Immunhistokemi

Archival hæmatoxylin og eosin-farvede objektglas blev gennemgået af 2 erfarne patologer i accordence med WHO klassifikation 2000. En 3-differentieret histologisk grading system blev anvendt. Den TNM stadie blev evalueret i henhold til den 2002 Internationale Union Against Cancer klassificering.

En polyklonale kanin antihuman

TCF3

antistof (fortynding 1:400) blev opnået fra Abcam (Cambridge, UK). I undersøgelsen blev 4-um snit fra arkivering paraffinblokke afparaffiniseret og opvarmet to gange i 10 minutter hver i en mikrobølgeovn (500 W) før eksponering for det første antistof. Immunoperoxidasefarvning blev udført under anvendelse af 2-trins EnVision metode (DAKO, Glostrup, Danmark) ifølge producentens instruktioner og visualiseret med 3,3′-diaminobenzidin-tetrachlorid (Sigma, St. Louis, MO).

Cytoplasma og nuklear farvning blev målt for dette antistof. Positive celler blev talt ved 2 patologer, der var blind for det kliniske resultat. For klinisk-patologisk korrelation, vi brugte en 4-differentieret pointsystem (negativ til 3+), som tog hensyn til den procentdel af positive celler og farvning intensitet som tidligere [18] beskrevet. Den detaljerede fremgangsmåde blev brugt til at generere en score for hvert væv kerne som følger: ingen farvning eller farvning i 10% af tumorceller (score 0), svag /næppe mærkbar delvis farvning i 10% af tumorceller (score 1 +), svag til moderat farvning i 10% af tumorcellerne (score 2+) og stærk farvning i 10% af tumorcellerne (score 3+). Vi fortolket separat TCF3 – og 1+ som “lavt udtrykket» og

TCF3

2+ og 3+ som “stærkt udtryk ‘

bisulfit genomisk sekventering (BGS)

. genomisk DNA blev isoleret fra væv under anvendelse af DNeasy Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) og opbevaret ved -20 ° C før brug. DNA blev modificeret med EZ DNA-methylering-Gold Kit ™ (Zymo, Orange, CA) ifølge producentens anvisninger. Almindeligvis blev 1 pi modificeret DNA anvendt i efterfølgende PCR’er. Primerne til BGS er 5′-GTATAAGGTTGAAAATTTGGGT-3 ‘(fremad) og 5′-CTCCCTAAAATCCTAAAAATCTTA-3’ (revers). The PCR termocykling betingelser var 1 cyklus ved 95 ° C i 15 minutter; 30 cykler ved 94 ° C i 30 sekunder, 52 ° C i 30 sekunder og 72 ° C i 30 sekunder og afsluttende ekstension ved 72 ° C i 7 minutter. PCR-produkter blev oprenset med Gel Extraction kit (Qiagen), klonet i pMD20-T-vektoren (Promega, Madison, WI, USA), og derefter transformeret ind i

Escherichia coli

stamme DH10B. 10-15 kolonier blev udvalgt til at bekræfte tilstedeværelsen og størrelsen af ​​den klonede insert. Fem positive kloner for hver prøve blev udvalgt og amplificeret under anvendelse af vektoren universelle primere P2, 5′-GTAAAACGACGGCCAGT-3 ‘, P4, 5′-AGAGGATAACAATTTCACACAGGA-3’. Efter oprensning sekvensen af ​​PCR-produktet analyseres ved anvendelse ABI 3730 DNA Sequencer (Applied Biosystems).

Methylering specifik PCR (MSP)

Primerne for den methylerede sekvens af TCF3 genet var 5′ AATTTTATAGGAAAAAGGCGC-3 ‘(fremad) og 5′-AACCTCGAACGCACATACTA-3′ (tilbage). For umethyleret sekvens var 5’-TGGAATTTTATAGGAAAAAGCTGT-3 ‘(fremad) og 5′-AAAAACCTCAAACACACATACTA-3’ (tilbage). Qiagen HotStarTaq DNA polymerase blev anvendt til PCR. Termocykliseringsbetingelser anvendt, var 1 cyklus ved 95 ° C i 15 minutter; 30 cykler ved 94 ° C i 30 s, 53 ° C (for M primersæt) eller 51 ° C (for U primersæt) i 30 s og 72 ° C i 30 s; og endelig forlængelse ved 72 ° C i 7 min. PCR-produkter blev fyldt 2% agarosegeler efterfulgt af farvning med ethidiumbromid og gælder visualiseret under UV-belysning. En prøve blev klassificeret som hypermethyleret når methylering amplifikationsproduktet alene blev observeret, delvist methyleret når både methylerede og ikke-methylerede amplifikationsprodukter blev set, og umethyleret når det viste ikke-methylerede amplifikationsprodukter alene, eller hverken amplifikationsprodukter blev fundet. For den statistiske analyse blev de hypermethyleret og delvist methylerede prøver betragtes som den methylerede (M) gruppe og sammenlignet med den ikke-methylerede (U) gruppe [19].

Statistisk analyse

Statistiske analyser blev udført med Stata (version SE /10; StataCorp, College Station, TX). Foreningen blandt kategoriske data blev analyseret ved hjælp af χ2 test. Overlevelseskurver blev genereret af Kaplan-Meier-metoden, og univariate overlevelse distributioner blev sammenlignet med brugen af ​​log-rank test. Den multivariate Cox proportional hazard model blev anvendt til påvisning af uafhængige prognosticator. Den 2-tailed

P Drømmeholdet værdi for signifikans blev etableret på 0,05.

Resultater

TCF3

udtryk var opreguleret i tilbagevendende CRC væv og CRC – metastase-afledte cellelinjer

i 64 friske prøver,

TCF3

mRNA-ekspression var signifikant højere i tilbagevendende CRC væv end i dem uden recidiv (

P

= 0,026; figur 1a). Modtager-operator kurve (ROC) analyse viste, at den bedste afskæringsværdi at skelne mellem tilbagevendende og ikke-tilbagevendende CRCs var 0,0041. De arealerne under ROC-kurver var 0,668 (95% CI 0,534-0,803) (figur 1b). Relative mængder af

TCF3

mRNA i CRC cellelinjer blev udtrykt som N-fold forskel i forhold til Caco-2 og normaliseret til

GAPDH

som reference gen.

TCF3

mRNA-ekspression i SW620, LoVo, og Colo205 blev forhøjet 3,4-, 1.8- og 6.9 gange, sammenlignet med den for Caco-2. Ud fra følgende betragtninger

TCF3

mRNA niveauer af SW480 og HCT116 blev nedsat 0,5- og 0,4-fold, (figur 1c). For 118-immunfarvning prøver blev TCF3 proteinekspression signifikant associeret med recidiv (tabel 3).

(a) I tilbagevendende CRC,

TCF3

mRNA niveauer blev signifikant forøget comared til CRC uden recidiv ( Wilcoxon-test,

P

0,05). (B) ROC kurve, der viser effektiviteten af ​​

TCF3

forudsige gentagelse af CRC. Areal under kurven (AUC) = 0,668 (95% CI 0,534-0,803),

P Drømmeholdet værdi = 0,012. (C)

TCF3

mRNA-niveauer blev målt med qPCR i 6 CRC cellelinier.

GAPDH

signaler blev anvendt som et relativt mål for ekspressionsniveauet af målgener. De repræsentative resultater, udført i tre eksemplarer, er vist som gennemsnit ± SD.

Sammenhæng mellem

TCF3

proteinekspression og klinisk-patologiske træk

Positiv farvning var observeret primært i cytoplasma og nuklear af kræftcellerne. Analyse af TCF3 til udtryk i de 118 CRC væv viste, at 37% af prøverne viser stærk (2+ og 3+) intensiteter og 63% lave (- og +) intensiteter. Immunfarvning af TCF3 protein er illustreret i figur 2.

Eksempler på immunfarvning af TCF3 ved stærk ekspression (a, b) og lav ekspression (c, d) niveauer (forstørrelse x 400).

Der blev ikke observeret nogen signifikante forskelle med hensyn til alder, køn, størrelse, lymphvascular og perineurale invasion. Men den sygdomsfri overlevelse var signifikant lavere hos patienter med høj TCF3 proteinekspression end i dem med lav udtryk (

P

= 0,002), og TCF3 udtryk var signifikant associeret med histologiske form for kræft (

P

= 0,038). Tabel 2 viste forholdet mellem klinisk-patologiske funktioner og TCF3 proteinekspression in118 prøver.

TCF3

protein-ekspression og sygdomsfri overlevelse tid

univariat analyse af Kaplan-Meier plot afsløret at stærke TCF3 udtryk var signifikant associeret med ugunstige sygdomsfri overlevelse resultater (

P

= 0,0001). Kaplan-Meier kurver ikke påvise nogen forskel i overlevelse i CRC ifølge andre parametre, herunder køn, alder, tumor placering, og lymphvascular invasion (

P

0,05). Imidlertid overlevelse distributioner signifikant forskellige i CRC med og uden perineurale invasion. Karakteristiske plots af TCF3 ekspression og perineural invasion er vist i figur 3. Stærk TCF3 ekspression blev associeret med tilbagefald (tabel 3). Multivariat Cox-analyse viste, at perineural invasion, TCF3 proteinekspression, og kemoterapi var uafhængige variable (

P Salg = 0.00, 0,01, og 0,01) (tabel 4).

(a) Patienter med højt TCF3 udtryk (n = 44) viste en signifikant dårligere prognisis end dem med lav TCF3 udtryk (n = 74;

P

0,05; log-rank test). (B) Patienter med perineurale invasion (n = 17) viste signifikant dårligere prognisis end dem uden en sådan invasion (n = 101;

P

0,05; log-rank test).

Up-ekspressionen af ​​

TCF3

er forbundet med dets promoter CpG ø hypometylering

En CpG island omfatter ca. 2,3 kb blev fundet i den menneskelige

TCF3

gen promotorregionen (figur 4c). For at forstå den mekanisme af

TCF3

regulering i CRC, status for methylering i promotor-regionen i

TCF3

blev testet. Vi amplificeret og sekventeret promotorregionen af ​​

TCF3

hjælp natriumbisulfit-behandlede genomisk DNA fremstillet fra CRC væv. Mere tæt methylerede CpG sites (90,7% vs. 44,3%) blev påvist i engangsomkostninger CRC væv i denne undersøgelse (figur 4d, 4e og 4f). For yderligere at validere sekventeringsresultaterne blev promotorområdet kendetegnet ved MSP ved hjælp af methylering eller unmethylation-specifikke primere i 47 CRC prøver. Methylering af

TCF3

blev påvist i 23 af (95,8%) 24 ikke-tilbagevendende CRC prøver. I modsætning hertil var frekvensen af ​​methylering blev mærkbart lavere i tilbagevendende CRC prøver (16/23, 69,6%;

P

= 0,023, figur 5a, 5b). Endvidere blev det vist, at

TCF3

udtryk er signifikant associeret med status methylering, hvilket indikerer epigenetical inaktivering kan spille en vigtig rolle i regulering af

TCF3

udtryk (

P

= 0,001, figur 5c).

Placering af

TCF3

gen inden human kromosom 19 (ch19p13.3). (A) Exon struktur af det humane

TCF3

gen. (B) Struktur af 5′-enden af ​​den

TCF3

gen. Afbildning af den procentvise guanin (G) og cytosin (C) nukleotider tværs denne region, placering af CpG-dinukleotider i denne region, og grænserne for CpG øen (skraveret område). (C) Repræsentative eksempler på kromatogrammer af bindingssteder for CpG opnået fra bisulfit sekventering af

TCF3

fragment i CRC uden tilbagefald (d) og med tilbagefald (e, f).

M, methylerede allel; U, umethyleret allel. (C) Invers sammenhæng mellem

TCF3

promotor methylering status og genekspression niveau ved qPCR-analyse af

TCF3

udtryk i de 47 CRC væv. Baren er forholdet mellem

TCF3

GAPDH

mRNA ekspressionsniveauerne.

TCF3

ekspressionsniveauerne korreleret med status for methylering af genet (

P

= 0,001, Mann-Whitney U-test).

Diskussion

Vores undersøgelse undersøger sammenhængen mellem TCF3 udtryk og de klinisk-patologiske funktioner i patienter med stadie II og III CRC. Den TCF3 udtryk i tilbagevendende CRC væv blev fundet signifikant højere end i dem uden tilbagefald. Survival analyse viste, at stærke TCF3 proteinekspression og perineurale invasion var uafhængige ugunstig prognostiske faktorer, og kemoterapi var en uafhængig beskyttelsesfaktor. For at eliminere behandling skævhed forårsaget af adjuverende kemoterapi, vi analyserede sammenhængen mellem TCF3 udtryk og overlevelsestid i fase II og III patienterne. Kemoterapi påvirkede ikke sammenhængen mellem TCF3 udtryk og prognose (figur S1).

hypometylering af promoter CpG øer af onkogen er stand til at aktivere disse gener. For at bestemme om opregulering af TCF3 var forbundet med afvigende methylering, undersøgte vi frekvensen methylering i 47 CRC væv ved MSP. Den methylerede allel blev påvist i 39 af 47 (83%) testede tumorer. Hyppigheden af ​​methylering var signifikant lavere i tilbagevendende CRC prøver sammenlignet med tumorer uden tilbagefald (

P

= 0,023).

TCF3

udtryk i 39 tumorer med promotor methylering var signifikant lavere end i 8 tilfælde uden promotor methylering (

P

= 0,001), hvilket indikerer, at promotor hypometylering var den største mekanisme i opregulering af

TCF3

. Øget

TCF /β-catenin

signalering er en af ​​kendetegnene ved CRC [20]. Vi, heri give beviser methylering af

TCF3

er en almindelig begivenhed i kolorektale tumorer. Disse data antyder, at

TCF3

methylering inaktivering er nødvendig for den hæmmende onkogent potentiale af

TCF /β-catenin

signalering. Tværtimod afvigende hypometylering stiger

TCF3

udtryk, som er forbundet med gentagelse af trin II og III CRC.

Medlemmerne af

TCF

familie binder til phosphoryleret β- catenin [21] – [24] og regulere transskription af target gener, såsom

TCF

selv og onkogener

cyklin D1

c-myc

[25], [26]. Fejlagtig regulering af denne signalvej er en vigtig begivenhed i udviklingen af ​​flere maligniteter såsom coloncancer, melanom og prostatacancer. Udover fejlagtig regulering af

TCF /β-catenin

pathway i tumorceller, har det været kendt, at fejlfunktion af E-cadherin tillader tumorceller at invadere det omgivende væv [27]. E-cadherin ekspression er også reduceret eller fraværende i mange epiteliale cancere, herunder mave- og brystkræft [28] – [30]. Som transskriptionsrepressor, rolle

TCF3

er nedregulere E-cadherin under tumorprogression [31], [32].

TCF3

binder E-box elementer på den proksimale promotor site af E-cadherin fører til transciption inaktivering af E-cadherin, og E-cadherin nedregulering spiller en vigtig rolle i at reducere celle-celle adhæsion systemer og fremmer metastaser [33].

i betragtning af de omfattende data præsenteret i denne undersøgelse, foreslår vi, at overekspression af TCF3 i fase II og III CRC patienter var signifikant associeret med dårlig prognose og lav sygdomsfri overlevelse (figur 3), som bidrager til at identificere de høj risiko CRC patienter. Nogle fase II og alle fase III CRC sager kunne anses for adjuverende behandling [34]. Men er stadig uklart, hvilken rolle adjuverende kemoterapi hos patienter med stadie II tumorer [35], [36]. For at vælge høj risiko fase II-sygdom og maksimere fordelene ved adjuverende behandling, kunne en uafhængig prognostisk markør være nyttige i at identificere aggressive fænotyper indenfor fase II CRC. Vi har identificeret GAS1 som en faktor for at vælge patienter med høj risiko for tilbagefald i vores tidligere arbejde [18], og nogle interessante kandidatgener som prognostiske faktorer for disse prøver er også validere i vores laboratorium (upublicerede data). I denne undersøgelse viste vi, at stærke

TCF3

udtryk kan identificere en undergruppe af patienter med høj risiko for tilbagefald, og disse patienter kan derfor drage fordel af mere aggressiv behandling.

Som konklusion, vores data fremhæver den centrale rolle

TCF3

hypometylering i CRC tilbagevendende udvikling. Disse resultater understreger den potentielle prognostiske værdi af

TCF3

som biomarkør for valg adjuverende behandling til patienter med høj risiko for et dårligt resultat.

Støtte oplysninger

figur S1.

Kaplan-Meier estimeret overlevelsesrater efter TCF3 udtryk. Patienter med højt TCF3 udtryk viste signifikant dårligere prognisis end dem med lav TCF3 udtryk i fase II (a) og III-patienter (b) (

P

0,05, log-rank test)

doi.: 10,1371 /journal.pone.0112005.s001

(TIF)