PLoS ONE: IL-17A Fremmer Migration og invasiv livmoderhalskræft celler ved koordineret Aktivering MMP Expression via p38 /NF-KB Signal Pathway

Abstrakt

Målsætning

IL-17A skuespil en vigtig rolle i mange inflammatoriske sygdomme og cancere. Vi havde til formål at undersøge effekten af ​​IL-17A på invasionen af ​​livmoderhalskræft celler og studere dens relaterede mekanismer.

Metoder

sårheling og matrigel transwell analyser blev anvendt til at undersøge effekten af ​​IL -17a på livmoderhalskræft cellemigration og invasion af et panel af cervicale cancercellelinier. Niveauerne af matrixmetalloproteinaser (MMP’er) og væv inhibitor af metalloproteinaser (TIMP’er) blev undersøgt under anvendelse af western blotting. Aktiviteten af ​​p38 og nuklear faktor-kappa B (NF-KB) signalvej blev registreret for.

Resultater

Her viste vi, at IL-17A kunne fremme migration og invasion af livmoderhalskræft cancerceller. Yderligere molekylær analyse viste, at IL-17A kunne opregulere de udtryk og aktiviteter af MMP2 og MMP9, og nedregulere udtrykkene for TIMP-1 og TIMP-2. Endvidere IL-17A aktiverer også p38 signalvej og forøget p50 og p65 nuklear ekspression. Derudover behandling af cervixcancer celler med de farmakologiske p38 /NF-KB-signal pathway hæmmere, SB203580 og PDTC, kraftigt restaureret roller invasion og opregulering af MMP’er induceret af IL-17A.

Konklusion

IL-17A kunne fremme migration og invasion af livmoderhalskræft celle via opregulering MMP2 og MMP9 udtryk, og ned-regulering af TIMP-1 og TIMP-2-ekspression via p38 /NF-KB-signal vej. IL-17A kan være et potentielt mål for at forbedre prognosen for patienter med livmoderhalskræft

Henvisning:. Feng M, Wang Y, Chen K, Bian Z, Jinfang Wu, Gao Q (2014) IL-17A Fremmer Migration og invasiv livmoderhalskræft celler ved koordineret Aktivering MMP Expression via p38 /NF-KB Signal Pathway. PLoS ONE 9 (9): e108502. doi: 10,1371 /journal.pone.0108502

Redaktør: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan

Modtaget: 23, 2014 Accepteret: August 31, 2014; Udgivet: 24 September, 2014

Copyright: © 2014 Feng et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Projektet blev støttet af National Natural Science Foundation of China (nr 81.070.536) og National Natural Science Foundation of Shaanxi-provinsen (nr 2014JM4143). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Livmoderhalskræft er den næsthyppigste årsag til kræft-relaterede dødsfald hos kvinder på verdensplan [1] og er en af ​​de eneste kendte kræftformer forårsaget af en virus, der kan seksuelt overførte. Nylige undersøgelser finder, at immunceller og deres udskilles cytokiner ikke kun kan bidrage til fjernelse af kræftceller, men også give en ordentlig mikromiljø for tumor udvikling samt fremme tumor progression [2], i hvilken den lokale tumor mikromiljø og funktionen tilstand af immunceller spiller vigtige roller [3].

Interleukin 17A (IL-17A) er et pro-inflammatorisk cytokin, og har vist sig bidraget til mange kroniske sygdomme. For nylig er IL-17A været også hyppigt findes i mange cancere, såsom ovariecancer [4], brystcancer [5], gastrisk cancer [6], og hepatocellulært carcinom [3]. Rollen af ​​IL-17A i udviklingen og progressionen af ​​disse cancertyper forbliver kontroversiel. Under anvendelse dyremodel, nogle undersøgelser finder, at IL-17A inhiberede tumorvækst og metastase gennem IFN-c producerende NK og T-celler [6], [7]. Andre undersøgelser viser, at IL-17A fremmet tumorvækst og metastase [8], [9]. Virkningen kan være korreleret med induktionen af ​​tumorfremmende mikromiljø ved tumorstedet [10].

tumormetastase er den førende årsag til dødelighed i forbindelse med cancer [11]. Kræftceller brug for at nedbryde ECM og invadere ind lymfe og vaskulære systemer til formidling til fjerne steder [12]. I denne proces, proteaser, såsom matrixmetalloproteinase (MMP’er), spiller en vigtig rolle [12]. Produktion og aktivering af MMP’er er afhængig af forskellige cytokiner, herunder TNF-α og IL-1 secerneret af tumorceller [13], [14], fibroblaster [15], [16] og makrofager [16]. Tidligere undersøgelser vist, at IL-17A kunne regulere MMP’er, IL-1 og TNF i parodontitis [17], og fandt, at IL-17 receptor mangel resulterer i nedsat ekspression af IL-1 og MMP3 /MMP9 /MMP13 i rheumatoid arthritis [18] , hvilket indikerer, at IL-17A også spiller en vigtig rolle i reguleringen af ​​MMP. MAPK signal pathway og NF-KB spiller en vigtig rolle i reguleringen af ​​produktionen og aktiviteten af ​​MMP [10], [19]. Og mange virkninger af IL-17A er korreleret med MAPK signalvej og NF-KB [10], [20], [21].

I vores undersøgelse fandt vi, at IL-17A kunne øge cellemotilitet og invasion af opregulering af MMP2 og MMP9 via aktivering p38-NF-KB-signal pathway.

Materialer og metoder

Etik erklæring

Denne forskning blev godkendt af den etiske Udvalget af Anden Affiliated Hospital, School of Medicine, Xian Jiaotong Universitet. Alle livmoderhalskræft patient deltagere med væv undersøgelse, forudsat at deres skriftligt informeret samtykke til at deltage i denne undersøgelse.

livmoderhalskræft prøver

livmoderhalskræft prøver til mRNA blev opnået fra 50 patienter livmoderhalskræft i departementet Obstetrik og Gynækologi, Second Affiliated Sygehus, School of Medicine, Xian Jiaotong Universitet. Alle patienter havde givet samtykke til væv samling på tidspunktet for operationen. Og alle enhederne blev diagnosticeret som den cervikale skællede kræft ved afdelingen for patologi. Blandt dem, 11 var fra cervikal biopsi og blev ikke medtaget i den statistiske analyse af invasion dybde og lymfe metastaser. Ingen af ​​patienterne havde modtaget kemoterapi, immunterapi eller radioterapi inden prøvetagning. Klinisk fase og histologiske klassifikationer var baseret på den internationale sammenslutning af Gynækologi og obstetrik (FIGO) klassifikationssystem. Vævsprøver blev delt i to portioner: den ene del blev frosset i -80 ° C i RNA-isolering og den venstre blev anvendt til patologisk diagnose

Cellelinier og eksperimentelle reagenser

HeLa, C33A. og Caski cellelinjer blev opnået fra American Type Culture Collection (ATCC) og blev opretholdt i Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM) suppleret med 10% føtalt bovint serum ved 37 ° C, 5% CO

2. Anti-MMP2, MMP9, TIMP-1, TIMP-2, β-actin, p38 og p-p38 blev opnået fra Cell Signaling Technology (Beverly, MA). Anti-NF-KB-p50, p65 /Rel A og histon H1 antistoffer blev indkøbt fra Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT) og alle andre kemikalier blev opnået fra Sigma (St. Louis, MO), medmindre andet er angivet.

Cellemigration og invasion assay

Cell migration og invasion evner blev testet ved sårheling og invasion assays. Cellemigrering vurderet af et sårheling assay. Celler blev dyrket i 6-brønds plade indtil sammenflydende sats nå 70-80% og derefter behandlet med eller uden IL-17A (50 ng /ml). Cellelaget blev såret ved anvendelse af en steril spids og udbredelsen af ​​sårlukning blev observeret og fotograferet. Invasion assay blev udført med 24 brønde BioCoat Matrigel Invasion Chambers (Becton Dicknson, Bedford, MA) ifølge producentens instruktioner. Efter dyrket i medium med eller uden IL-17A (50 ng /ml) blev celler podet på indre brønd og antallet af celler, invaderede gennem Matrigel blev talt.

RNA-isolering og real-time PCR-analyse

Totalt RNA blev ekstraheret fra dyrkede celler med TRIzol-reagens (Invitrogen), og mRNA ekspressionsniveauer blev målt ved QRT-PCR under anvendelse af et iQ5 flerfarvet real-time PCR Detection System (Bio-Rad) med SYBR Premix EX. Revers transskription blev udført med PrimeScript RT reagens Kit (Perfect tidstro TaKaRa) ifølge producentens instruktioner. For mRNA-analyse blev GAPDH mRNA-niveauer anvendes som intern normalisering kontrol. Fold ændringer blev beregnet og normaliseret med CT-metoden. Primere anvendt var som følger: GAPDH (GCACCGTCAAGGCTGAGAAC og TGGTGAAGACGCCAGTGGA); MMP1 (ACTCTGGAGTAATGTCACACCT og GTTGGTCCACCTTTCATCTTCA); MMP2 (CCGTCGCCCATCATCAAGTT og CTGTCTGGGGCAGTCCAAAG); MMP3 (AGTCTTCCAATCCTACTGTTGCT og TCCCCGTCACCTCCAATCC); MMP9 (GGGACGCAGACATCGTCATC og TCGTCATCGTCGAAATGGGC); MMP10 (CCCACTCTACAACTCATTCACAG og TCAGATCCCGAAGGAACAGAT); MMP13 (TGCCAGTGCCCTTAAATTCCA og CAACAGGGTCTCAAACCCCA); IL-17A (CAATCCCACGAAATCCAGGATG og GTGGAGATTCCAAGGTGAGG).

Zymografi

Celler blev behandlet med IL-17A ved 37 ° C i 24 timer, og prøver af konditioneret medium blev opsamlet. Passende volumener af ukogte prøver blev separeret ved 0,1% gelatine-8% SDS-PAGE-elektroforese. Efter elektroforese blev gelerne vasket to gange i 2,5% Triton X-100 ved stuetemperatur i 30 minutter og derefter inkuberet i reaktionsbuffer (10 mM CaCl2, 40 mM Tris-HCI og 0,01% NaN3, pH 8,0) ved 37 ° C i 12 timer. Coomassie brilliant blue R-250 gel pletten blev derefter anvendt til at farve gelen. Intensiteterne af båndene på gelerne blev beregnet med en billedanalysesystem (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA).

Kvantificering af MMP-2 og MMP-9-proteiner Salg

Celler blev podet ved en densitet på 1 x 10

5 celler /ml i plader med 6 brønde dagen før forsøget. Cellerne blev dyrket i frisk DMEM-medium suppleret med 1% FBS og parentale celler blev dyrket i frisk DMEM-medium suppleret med 1% FBS med eller uden IL-17A (50 ng /ml). Efter 48 timers inkubation blev cellesupernatanter opsamlet, og derefter MMP2 og MMP9 koncentrationer blev kvantificeret ved hjælp af ELISA-kits (Shanghai Westang Bio-Tech Co Ltd, Shanghai, Kina).

Western blotting-analyse

1 × 10

6 livmoderhalskræft celler blev suspenderet i 250 pi lysisbuffer (40 mmol /l Tris-HCI, 1 mmol /l EDTA, 150 mmol /l KCI, 100 mmol /l NaVO3, 1 % Triton X-100, 1 mmol /l PMSF, pH 7,5). De nukleare lysater blev høstet med NucBuster Protein Extration Kit (Novagen, Tyskland) ifølge producentens instruktioner. Proteinerne (50 ug) blev separeret ved 10% SDS-polyacrylamidgelelektroforese og overført til PVDF-membraner. Membranerne blev derefter blokeret i fedtfri mælk (5% i Tris-bufret saltvand med Tween-20, TBST) buffer ved 37 ° C i 1 time for at blokere ikke-specifik binding og blev derefter inkuberet natten over med antistoffer mod p38, p -p38, MMP2, MMP9, TIMP-1, TIMP-2, NF-KB-p50, p65 /RelA, histon H1 eller β-actin i TBST indeholdende 5% fedtfrit mælk ved 4 ° C. Derefter sekundære antistoffer blev inkuberet. Båndene blev detekteret med et forøget kemiluminescens (Amersham, ECL Plus, Freiburg, Tyskland) og eksponeret ved autoradiografi. Den densitometrianalyse blev udført under anvendelse Billede J software (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK).

Statistisk analyse

Alle data er vist som middelværdi ± standardafvigelse og analyseret under anvendelse SPSS 13.0 software (SPSS Inc., IL). Statistisk signifikans blev analyseret ved anvendelse af t-test.

P

. 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

Ekspression af IL-17A er positivt forbundet med metastaser af livmoderhalskræft

IL-17A mRNA-ekspression blev målt i 50 livmoderhalskræft væv ved real-time PCR. Association undersøgelse blev yderligere anvendt til at undersøge den kliniske betydning af IL-17A udtryk i 50 livmoderhalskræft prøver. Resultatet viste, at IL-17A-ekspression ikke korrelerer med patientens alder, FIGO stadium og tumorstørrelse, mens IL-17A ekspression blev signifikant korreleret til patienternes invasion dybde og lymfatiske metastase status (

P

0,01, studerende t-test, tabel 1). Disse resultater viste, at IL-17A kunne spille en vigtig rolle i livmoderhalskræft metastaser.

IL-17A øget motilitet af livmoderhalskræft celler

sårheling og matrigel invasion analyser blev udført for at yderligere teste rollen af ​​IL-17A på cervikal cellemotilitet. Resultaterne af sårheling viser, at vandringer HeLa, C33A og Caski-celler blev forstærket af IL-17A (fig. 1A og B). Endvidere Transwell assay viste, at behandling med IL-17A fremmer celleinvasion gennem matrigel (fig. 1C og D).

(A, B) sammenlignet med kontrolgruppen celler, IL-17A behandlede cervicale cancerceller ( HeLa, C33 a, og Caski) viste højere motilitet i en sårhelende assay. (C) Ved celle invasiv assay blev påvist virkningen af ​​IL-17A på celleinvasion (forstørrelse 100 x). (D) Samlet invasiv celle nummer i hvert kammer blev samlet. Værdier er repræsenteret som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *

s

0,05 og **

s

. 0,01 sammenlignet med kontrolgruppen henholdsvis

IL-17A opreguleret MMP2 og MMP9 udtryk og nedreguleret TIMP-1 og TIMP-2-ekspression i livmoderhalskræft celler

Som overekspression af MMP’er spiller en vigtig rolle i cancer metastaser [22], rolle IL-17A på MMPs udtryk i livmoderhalskræft cellelinjer (C33A og Caski) blev undersøgt. Udtryk for MMP1 blev MMP2, MMP3, MMP9, MMP10 og MMP13 opdaget af real-time PCR-analyse mellem IL-17A behandlede og ubehandlede celler. Som vist i fig. 2A, IL-17A forøgede ekspression af både MMP2 og MMP9, hvilket indikerer, at motiliteten fremme rolle af IL-17A kan være involveret med ekstracellulær matrix (ECM) remodeling.

(A) MMP’er ekspression blev detekteret ved real -tids PCR-analyse mod cervixcancer celler behandlet med og uden IL-17A. (B) Efter behandling med IL-17A i 24 timer, ekspressionen af ​​MMP2, MMP9, TIMP-1, og TIMP-2 blev detekteret ved Western blot-analyse i cervicale cancerceller. (C) Kvantificering af proteinniveauer af MMP-2, MMP-9, TIMP-1, og TIMP-2. MMP2 (D) og koncentrationer MMP9 (E) i supernatanter danner celler behandlet med eller uden IL-17A blev analyseret ved ELISA. (F) Virkningerne af IL-17A om aktiviteterne i MMP2 og MMP9 blev analyseret ved zymografi assay. (G) Kvantificering af aktiviteterne af MMP-2 og MMP-9. Værdier er repræsenteret som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *

s

0,05 og **

s

. 0,01 sammenlignet med kontrolgruppen henholdsvis

MMP2 og MMP9 spiller vigtige roller for kræft metastaser [12 ], og IL-17A kan påvirke ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9 [10]. TIMP’er, de endogene naturlige inhibitorer af MMP’er kan regulere aktiviteten og ekspressionen af ​​MMP’er [23]. Efter behandling med IL-17A, ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9 proteiner i cervikale cancercellelinier (C33A og Caski) blev øget, blev i mellemtiden ekspressionen af ​​TIMP-1 og TIMP-2-proteiner faldt (fig. 2B og C).

IL-17A forøgede sekretion og aktiviteten af ​​MMP2 og MMP9

MMP’er har rollen som ECM-nedbrydning, og er stærkt impliceret i invasion og metastase af maligne tumorceller [22]. I lyset af dette blev ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9 i cellesupernatanter analyseret ved ELISA. Som vist i fig. 2D og E, de C33A celler udskilles 425,55 ± 49,35 pg /ml /10

5 celler MMP2 og 75,01 ± 9,80 pg /ml /10

5 celler MMP9. IL-17A behandling signifikant øget MMP2 niveauer til 773,12 ± 60,12 pg /ml /10

5 celler (

P

0,05) og MMP9 niveauer til 148,89 ± 11,18 pg /ml /10

5 celler (

P

0,05). Lignende resultater blev observeret i Caski-celler. Det er klart, behandling med IL-17A bemærkelsesværdigt fremmet ekspressionen af ​​både MMP2 og MMP9.

Endvidere aktiviteten af ​​MMP2 og MMP9 udskilles af cervicale cancerceller blev undersøgt ved zymografi assay. Resultaterne viste, at IL-17A i væsentlig grad kan forøge nedbrydningen aktivitet af MMP2 og MMP9 i C33A og Caski cellelinjer (fig. 2F og G).

IL-17A regulerede MMP’er ekspression og invasion af livmoderhalskræft celler via aktiverende p38 /NF-KB signalvej

p38 signalvej spiller vigtig rolle i invasionen af ​​cervikale cancerceller. Efter behandling med IL-17A, blev phosphorylering niveau af p38 forøget (fig. 3A-B, E-F). Imidlertid blev ekspressionen af ​​den samlede p38 ikke påvirket. Som NF-KB signalvej blev rapporteret at være en nedstrøms mål for p38-signalering, og var i stand til at opregulere MMP2 andMMP9 ekspression, NF-KB /p50 og p65 /RelA ekspression blev også påvist. Vi observerede, at behandling med IL-17A signifikant forøgede nukleare ekspression af både NF-KB /p50 og p65 /RelA (fig. 3 C-D, G-H). For yderligere at definere det punkt i p38 /NF-KB signalvej, hvor IL-17A regulerer invasion af livmoderhalskræft celler behandlede vi livmoderhalskræft celler med SB203580 (a p38-inhibitor) og PDTC (a NF-KB inhibitor), og analyserede den invasive evne. Både SB203580 og PDTC kan vende invasion steg med IL-17A (fig. 4A-B, E-F). Desuden western blot analyse viste, at forbehandling af SB203580 og PDTC ophævet opregulering af MMP2 og MMP9 induceret af IL-17A (fig. 4C-D, G-H), hvilket yderligere understreger, at IL-17A reguleret MMP’er ekspression og invasion af livmoderhalskræft celler via aktivering p38 /NF-KB signalvej.

Ekspression af p38 og p-p38 blev påvist ved western blot-analyse i C33A (A) og Caski (E) celler behandlet med eller uden IL -17a i 24 timer. Kvantificering af proteinniveauer af p38 og p-p38 i C33A (B) og Caski (F). Værdier er repræsenteret som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg udført in triplo. * P 0,05 og ** p 0,01 sammenlignet med kontrolgruppen, henholdsvis. Western blot-analyse blev anvendt til at detektere nukleare p50 og p65 ekspression i C33A (C) og Caski (G) celler behandlet med IL-17A (50 ng /ml) ved angivne tidspunkter. Kvantificering af de nukleare proteinniveauer af p50 og p65 i C33A (D) og Caski (H) celler. Værdier er repræsenteret som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *

s

0,05 og **

s

. 0,01 sammenlignet med kontrolgruppen henholdsvis

C33A (A) og Caski (E) celler forbehandlet med SB (20 uM) og PDTC i 30 min, derefter inkuberet i nærvær eller fravær af IL-17A (50 ng /ml) i 24 timer. Celle- invasive evner blev udført af Boyden kammer invasion assay. Procentdelen af ​​invasiv sats af C33A (B) og Caski (F) celler blev udtrykt som en procentdel af kontrol. C33A (C, D) og Caski (G, H) celler blev behandlet og derefter underkastet Western blot at analysere proteinniveauer af MMP2, er MMP 9. Værdier repræsenteret som middelværdi ± SD af tre uafhængige forsøg udført in triplo. *

s

0,05 og **

s

. 0,01 sammenlignet med kontrolgruppen henholdsvis

Diskussion

Væsentlig evidens for, at visse kræftpatienter udviser en generaliseret immunosuppressiv status, men den inflammatoriske reaktion ved tumorstedet kan fremme tumorvækst og progression [24], [25]. Persisterende infektion med human papillomavirus (HPV) er en nødvendig årsag til livmoderhalskræft [26]. HPV-infektioner er almindelige, og livmoderhalskræft kan betragtes som en sjælden komplikation af denne fælles infektion [27]. IL-17A er en vigtig inflammatorisk cytokin i udviklingen af ​​mange inflammatoriske sygdomme og det er også ofte påvist i tumormikromiljøet [8], [28], [29]. Men indtil nu er lidt kendt om effekten af ​​IL-17A på livmoderhalskræft progression. Souza og hans medarbejdere har studeret korrelationen af ​​koncentrationen af ​​IL-17 på serum fra patienter og forskellige kvaliteter af squamous intraepithelial læsioner og invasive cervical carcinoma [30], for ikke at nævne den pro-metastatisk og invasiv virkning af IL-17A om livmoderhalskræft samt dens slave mekanisme. Her har vi vist, at IL-17A fremmes signifikant den invasive og metastatiske evne af cervikale cancerceller ved at regulere MMP /TIMP saldo via aktivering af p38 /NF-KB signalvej.

I den foreliggende undersøgelse, fandt vi, at IL-17A kunne øge migrationen og invasion evner livmoderhalskræft celler. Tidligere forskning viste, at IL-17A kunne fremme migrationen og invasion evner menneskelig brystkræft og levercellecancer celler [8], [10]. Disse resultater antyder, at IL-17A er tæt korreleret med invasion af cervicale cancerceller. For at tydeliggøre de relaterede mekanismer, vi undersøgt, om det fremmer virkningen af ​​IL-17A på celle invasion er gennem regulering udtryk for MMP og TIMP’er.

Under processen med metastaser, kræftceller har brug for at nedbryde ECM og invadere i blod- eller lymfekar, og nå andre væv og organer, derefter generere ny tumor. MMP’er og TIMP’er spiller en vigtig rolle i nedværdigende ECM [31]. MMP2 og MMP9 er ofte opdaget at være overudtrykt i solide tumorer og er forbundet med tumor invasion og metastase [22], [32]. Så vi undersøgte virkningen af ​​IL-17A på ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9. Resultater viser, at IL-17A kan opregulere ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9. TIMP’er virker gennem dannelsen af ​​en tæt og ikke-kovalent kompleks med deres beslægtede enzymer og er i stand til at påvirke de biologiske aktiviteter af MMP’er [33], [34]. I nærværende undersøgelse fandt vi IL-17A kunne ned-regualte ekspressionen af ​​TIMP-1 og TIMP-2. Disse resultater indikerer, at den fremmer virkningen af ​​IL-17A er korreleret med MMP og deres inhibitorer.

p38 signal pathway spiller også en vigtig rolle i reguleringen af ​​ekspression og aktivitet af MMP og TIMP’er [35], [ ,,,0],36]. Aktivitet af p38 signalvej kan opregulere ekspressionen af ​​MMP2 og MMP9 [10]. Tidligere undersøgelse viste, at IL-17A kan aktivere p38 signalvej [37], [38]. For yderligere at klarlægge mulige virkningsmekanisme (r) af IL-17A i fremme af livmoderhalskræft celleinvasion, vi undersøge virkningen af ​​IL-17A på phosphorylering af p38. Resultaterne viste, at IL-17A kunne opregulere phosphoryleringen niveau af p38. Resultaterne viste også, at behandling af inhibitor af p38 reduceret celleinvasion signifikant, ledsaget af en øget MMP2 og MMP9 proteinekspression og reducerede TIMP-1 og TIMP-2-protein-ekspression, hvilket antyder, at opreguleringen rolle af IL-17A i MMP2 og MMP9 ekspression kan være gennem aktivering af p38 signalvej. NF-KB har vist sig at være et centralt transkriptionsfaktor i reguleringen af ​​MMP2 og MMP9-ekspression [10], [39] og IL-17A er blevet rapporteret at være i stand til at aktivere NF-KB signalvej [40], [41 ], vi næste studerede, om IL-17A kunne aktivere NF-KB-signal vej. Resultaterne viste, at IL-17A kunne aktivere NF-KB, hvilket antyder, at opreguleringen rolle af IL-17A i MMP2 og MMP9-ekspression kan være gennem aktiveringen af ​​NF-KB signalvej.

Det kan konkluderes, virkningen af ​​IL-17A på livmoderhalskræft celle invasion og metastase kan føre til identifikation af nye diagnostiske markører og terapeutiske mål.

Tak

projektet blev støttet af National Natural Science Foundation of China (No.81070536) og National Natural Science Foundation of Shaanxi provinsen (No.2014JM4143).