PLoS ONE: REG4 Uafhængigt Forudsiger bedre prognose i Non-mucinøs Colorectal Cancer

Abstrakt

Introduktion

Kolorektal cancer (CRC) er en af ​​verdens tre mest almindelige kræftformer og forekomsten er stigende . For at identificere de patienter, som nyder godt af adjuverende behandling kræver nye biomarkører. Den regenererende islet-afledte gen (REG) 4 tilhører en gruppe af små sekretoriske proteiner involveret i celleproliferation og regeneration. Dens opreguleret ekspression forekommer i inflammatoriske tarmsygdomme også i gastrointestinale cancere. Rapporter om sammenslutningen af ​​REG4 udtryk med CRC prognose har været blandede. Vores mål var at undersøge tumor REG4 udtryk i CRC patienter og dets co-ekspression med andre tarm markører.

Metoder

Tumor udtryk for REG4 blev vurderet ved immunhistokemi i 840 på hinanden følgende kirurgisk behandlet CRC patienter i Helsingfors Universitet Central Hospital. Angivelse af MUC1, MUC2, MUC5AC, synapthophysin, og chromogranin blev evalueret i en undergruppe af 220 konsekutivt opererede CRC patienter. REG4 udtryk med klinisk-patologiske parametre, andre tarm markører, og virkningen af ​​REG4 udtryk på overlevelse blev vurderet.

Resultater

REG4 udtryk forbundet med gunstige klinisk-patologiske parametre og med højere samlet overlevelse fra ikke-mucinøs CRC (p = 0,019). For sådanne patienter under 65, dens udtryk var en uafhængig markør for lavere risiko for død inden for 5 år, at kræft; univariable hazard ratio (HR) = 0,57; 95% konfidensinterval (CI) (0,34-0,94); multivariable HR = 0,55; 95% CI (0,33-0,92). I ikke-mucinous CRC, REG4 forbundet med positiv MUC2, MUC4, og MUC5AC udtryk.

Konklusion

Vi viser, at vores viden for første gang, at REG4 IHC udtryk for at være en uafhængig markør for gunstig prognose i ikke-mucinøs CRC. Vores resultater modsiger dem fra undersøgelser baseret på kvantificering af REG4 mRNA-niveauer, en uoverensstemmelse berettiger yderligere undersøgelser

Henvisning:. Kaprio T, Hagström J, Mustonen H, Koskensalo S, Andersson LC, Haglund C (2014) REG4 Selvstændigt forudsiger bedre prognose i Non-mucinøs kolorektal cancer. PLoS ONE 9 (10): e109600. doi: 10,1371 /journal.pone.0109600

Redaktør: Anthony WI. Lo, Queen Mary Hospital, Hongkong

Modtaget: Juli 21, 2014 Accepteret: September 11, 2014; Udgivet: 8 oktober 2014

Copyright: © 2014 Kaprio et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Det forfattere bekræfter, at alle data, der ligger til grund resultaterne er fuldt tilgængelige uden restriktioner. Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer

Finansiering:. Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra Finska Läkaresällskapet, Kurt och Doris Palander Foundation, Sigrid Juselius Foundation, og medicinska understödsföreningen Liv och Hälsa, K. Albin Johansson Foundation, og en særlig statslig tilskud til forskning og uddannelse. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Verdens tredje mest almindelige kræftform, med en årlig incidens på over en million nye tilfælde, er kolorektal cancer (CRC) [1]. Dens kur er baseret på tidlig diagnose, radikale indgreb, og eventuel adjuverende behandling. En sådan behandling er rutine for stadie III patienter. Ved niveau II, fordelen af ​​adjuvans terapi er imidlertid uklar, idet ca. 80% af kirurgisk behandlet stadie II patienter overlever uden kemoterapi. Selvom vi ved, mange høje risikofaktorer; T4-scenen, lav differentiering, vaskulær invasion, tumor obstruktion, tarm perforation, og utilstrækkelig lymfeknude resektion, kan vi ikke altid identificere patienter, som vil drage fordel af adjuverende behandling. Det ville være gavnligt at finde nye biomarkører til at støtte i behandlingen beslutninger.

Regenerating holm-afledt gen (REG) proteiner repræsenterer en gruppe af små sekretoriske proteiner involveret i celledeling og regeneration, der også deltager i dannelsen af immunsystem [2], [3]. De hører til calcium-afhængige lectin (C-lectin) superfamilien og er inddelt i fire familier, REG I-IV, baseret på deres primære struktur. I strid med de andre REG proteiner REG4 binder polysaccharider uafhængigt af calcium [4]. De gener, der koder REG I til III gener er placeret på kromosom 2p12, mens den for REG4 er på 1p12-13. REG4 blev først klonet og identificeret af Hartupee et [5] al og Kämäräinen et al [6]. Indeholdende 158 aminosyrer og med en molekylvægt af vægten af ​​18 kDa er det fysiologisk udtrykkes i tyktarmen og tyndtarmen, med høj ekspression i enteroendocrine celler. [6], [7]. I mave epitel, er REG4 aktiveres under bestemte faser af differentiering og modning, dets ekspression er rumligt specifik, og det er blevet foreslået at støtte mucinøs og neuroendokrine differentiering eller [8], [9]. Opreguleret REG4 ekspression forekommer i inflammatoriske tarmsygdomme (IBD) [6] og også forekommer i mange maligniteter: tyktarm, mave og pancreascancer [10] – [12]. REG4 foreslås at deltage i carcinogenese og vævsregenerering, at virke som en antiapoptotisk faktor, og for at fremme proliferation og invasion [13]. De ultimative fysiologiske og patologiske roller REG4 stadig undvigende, dog. Ekspression af REG4 i GI-kanalen kræftformer har i flere undersøgelser syntes at være af prædiktiv og prognostisk værdi [10], [11], [14], [15]. Resultaterne i CRC har dog været kontroversiel: forøget udtryk er et tegn på dårlig prognose ifølge Numata et al [16], men ingen sammenhæng med prognose er opstået i andre undersøgelser [17], [18]

Denne undersøgelse havde til formål at vurdere i CRC rollen som REG4 som prognostisk markør og dens tilknytning til klinisk-patologiske parametre i en kohorte af 840 patienter. Desuden i en undergruppe af 220 patienter, vi fokuseret på sammenslutning af REG4 udtryk med andre markører: markører af mucinous differentiering MUC1, MUC2, MUC4, og MUC5AC, og også markører for neuroendokrine fænotype:. Synaptophysin og chromogranin

Metoder

patienter

undersøgelsen befolkning bestod 840 konsekutive kolorektal cancer patienter, der gennemgår kirurgi i 1983-2001 ved Institut for kirurgi, Helsinki University Central Hospital. En undergruppe af 240 omfattede fortløbende opererede patienter mellem 1998-2001. REG4 blev undersøgt i hele patientens serien, og de andre markører undersøgt i undergruppen. Den finske folkeregister Centre forudsat de opfølgende vital-status, der er nødvendige for at beregne overlevelse statistik, og Finlands Statistik forudsat dødsårsag for alle dem afdøde. Median alder ved diagnose var 66, med en median opfølgning på 5,1 år (spændvidde 0-25,8). Det 5-års sygdomsspecifikke overlevelse var 58,9% (95% Cl 55,0-62,8%). For undergruppen, median alder ved diagnose var 67 med en median opfølgning på 6,0 år (spændvidde 0-13,2). Det 5-års sygdomsspecifikke overlevelse var 64,8% (95% Cl 58,1-71,5%). Klinisk-patologisk karakteristika begge grupper er i S1.

Denne undersøgelse er i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen og blev godkendt af Kirurgisk etiske komité i Helsinki University Central Hospital (Dnro HUS 226 /E6 /06, udvidelse TMK02 §66 17,4 0,2013) og den nationale tilsynsmyndighed for Velfærd og sundhed gav tilladelse til at bruge vævsprøver uden individuel informeret samtykke i denne retrospektive undersøgelse (Valvira Dnro 10041 /06.01.03.01 /2012).

Tissue microarray

formalin-fikseret og paraffinindstøbte tumorprøver kom fra arkiverne i Patologisk Institut, Helsinki University Central Hospital. Repræsentative områder af tumor prøver på hematoxylin- og eosin-farvede objektglas var præget af en erfaren patolog. Tre 1,0 mm diameter stempler taget fra hver prøve blev monteret på hver modtager paraffin blok med en halvautomatisk væv microarray instrument (TMA) (Beecher Instruments, Silver Spring, MD) som beskrevet [19].

Immunhistokemi

TMA- og væv-blokke var frisk skåret i 4-um sektioner. Efter afparaffinering i xylen og rehydrering gennem en gradvist faldende koncentration af ethanol til destilleret vand, blev objektglassene behandlet på en forbehandling modul (Lab Vision Corp., Fremont, CA) i forbehandlingen buffer i 20 minutter ved 98 ° C i antigen-genvinding . Proceduren farvning af Dako REAL EnVision Detection-system, Peroxidase /DAB +, Kanin /Mus (Dako, Glostrup, Danmark), der anvendes en Autostainer 480 (Lab Vision). Væv blev inkuberet med primære antistoffer i én time ved stuetemperatur. Den REG4 antistof som beskrevet i [20], andre var fra kommercielle kilder. Antistoffer og deres fortyndinger er i tabel 1.

Scoring af prøver

REG4 cytoplasmatisk udtryk blev scoret i tumorceller som enten negativ positiv. MUC1 og MUC2 udtryk var cytoplasmatisk i tumorceller og blev scoret som negativ-low-moderat-høj ifølge intensitet. For yderligere statistisk analyse blev de grupperet i: lav (negativ til lav) og høj (moderat til høj). MUC4 og MUC5AC cytoplasmatiske udtryk blev scoret enten negativ eller positiv. Neuroendocrinic differentiering (negativ vs positiv) blev evalueret ved cytoplasmatisk synapthophysin og chromogranin positivitet. Farvninger blev bedømt uafhængigt af T.K. og J. H., der var blindet for kliniske data og resultat. Forskelle i scoring blev diskuteret indtil konsensus. Repræsentative billeder af udtryk er i figur 1. REG4 udtryk blev sammenlignet med spredning indekset med Ki-67 farvning, som vi offentliggjorde tidligere [21]

Repræsentative billeder af antistof farvninger i kolorektal cancer.; REG4-negative og -positive (A B), MUC1- negativ og -positive (C MUC2-negative og -positive (E F), MUC4-negative og -positive (G H), MUC5AC-negative og -positive (I J), synapthophysin-negative og -positive (K L ), chromogranin-negative og -positive (M N) Original forstørrelse var x 20.

statistiske analyser

Evaluering af sammenhængen mellem REG4 udtryk og klinisk-patologiske parametre eller MUC udtryk blev gjort ved den nøjagtige Pearson chi-square test, eller den nøjagtige lineære-by-lineær association test for bestilte parametre. Sygdomsspecifikke samlede overlevelse blev talt fra datoen for kirurgi til dato for død fra kolorektal cancer, eller indtil slutningen af ​​follow-up. Overlevelsesanalyse ved Kaplan-Meier-metoden blev sammenlignet ved log rank test. Cox regression proportional hazard model serveret for uni- og multivariable overlevelse analyse, justeret for køn, alder, Dukes klassifikation, og differentiering. Test af Cox model antagelse om konstante hazard ratio over tid involveret inddragelse af en tidsafhængig kovariant separat for hver testbare variabel. Hazard ratio for differentiering blev analyseret i to perioder (0 til 1,25 og 1,25 til 5 år) for at opfylde forudsætningerne for Cox-modellen, med den tidsafhængige Cox model. Interaktion vilkår blev overvejet og en vekselvirkning mellem REG4 udtryk og alder opstået. Vi beregnede derfor den prognostiske rolle REG4 separat for patienter under og over 65 år Alle tests var to-sidet. En p-værdi på 0,05 blev betragtet som signifikant. Alle statistiske analyser blev udført med SPSS-version 20.0 (IBM SPSS Statistics, versionen 20,0 til Mac, SPSS, Inc., Chicago, IL)

Resultater

Immunhistokemi

REG4. ekspression i tumorceller var cytoplasmisk og lidt granulært. Når der forekommer ekspression var tydelig i det store flertal af tumorceller, men med noget nukleart ekspression. I hele vævssnit, ingen tydelig forskel i ekspression forekom mellem den invasive front og resten af ​​tumoren. Øvrigt i hele sektioner, REG4 ekspression forekom i nogle tilfælde i normalt epitel, men blev nedreguleret i tumorceller. Angivelse af muciner, synapthopysin og chromogranin var cytoplasmisk, med noget nukleart udtryk

Af de 840 tumorer repræsenteret i TMA, kunne REG4 farvning blive evalueret i 793.; 580 (73,1%), blev scoret som negativ og 213 (28,9%) scorede som positiv. I en undergruppe på 220 tumorer, blev MUC1 ekspression evalueret i 206 (lav 83,5% og høj 17,5%), MUC2 ekspression i 210 (lav 17,1% og høj 82.9%), MUC4 ekspression i 208 (negativ 51,0% og positive 49,0% ), og MUC5AC ekspression i 205 (negativ 93,2% og positive 6,8%). Neuroendocrinic positivitet (enten /både synaptohysin- og chromogranin-positiv) kunne blive evalueret i 212 (negativ 92,9% og positive 7,1%).

REG4 i lymfe-knude metastaser

Baseret på TMA resultater valgte vi 10 patienter med Dukes C sygdom, 5 med REG4-positive tumorer og 5 med negative tumorer. Ingen af ​​patienternes REG4 negative tumorer viste positivitet i deres lymfeknuder-node metastaser, mens de 5 patienter med REG4-positive tumor, 2 viste positivitet også i deres lymfeknude metastaser (figur 2).

REG4- negativ ekspression i tumor og -positive i tilstødende epitel (A). Positiv REG4 ekspression i primær tumor (B) og negativ i dens tilsvarende lymfeknudemetastase (C) .Positive REG4 ekspression i primær tumor (D) og positive i dens tilsvarende lymfeknudemetastase (E). Original forstørrelse x 4 i figur A og x 20 i B-E.

REG4 og klinisk-patologiske parametre

Cytoplasmisk REG4 udtryk forbundet med mindre-fremskreden (p = 0,014), placering i den rigtige hemicolon (p = 0,035), og mucinøs histologi (p 0,0001). Vi så ingen forbindelse med alder, køn, differentiering, eller placering (colon vs. endetarmen) (Tabel 2). Som REG4 forbundet kraftigt med tumor histologi, vi analyserede mucinøs og ikke-mucinøs CRC separat. I ikke-mucinous CRC, REG4 udtryk forbundet med mindre fremskreden (p = 0,005) og højere differentiaton (p = 0,023). Ingen forening optrådte med alder, køn, tumor placering eller tumor side. (Tabel 3) I mucinous CRC, gjorde REG4 udtryk ikke forbinder med nogen clinocopathological parameter (data ikke vist). Ingen sammenhæng mellem REG4 og Ki-67 blev set i CRC eller i nogen af ​​de analyserede undergrupper (data ikke vist).

REG4 og andre tarm markører

I undergruppe af 220 tumorer, fandt vi, at REG4 udtryk signifikant associeret med højere udtryk for MUC2, MUC4, og MUC5AC, men ikke med MUC1 udtryk. Heller ikke REG4 udtryk associeret med markører for neuroendokrine differentiering. Det samme forblev tro, når ikke-mucinøs CRC blev analyseret alene (tabel 4). I mucinous CRC, REG4 udtryk forbundet med ingen andre markører undersøgt (data ikke vist).

Survival analyse

I ikke-mucinous, CRC REG4 positivitet var et tegn på positiv prognose ( p = 0,019, log-rank test); 5-års DSS for patienter med positiv cytoplasmatisk REG4 tumor-ekspression var 67,9% (95% CI 60,5-75,3) sammenlignet med 57,8% (95% CI 53,5-62,1) for dem uden cytoplasmatisk ekspression (figur 3). I mucinous CRC, ingen forskel optrådte (data ikke vist). Når vi stratificeret ikke-mucinøs CRC til patienter under eller over 65, REG4 udtryk var et tegn på positiv prognose hos patienter under 65 (p = 0,049, log-rank test.), Med ingen forskel for dem ældre (p = 0,195, log -rank-test). (S2 S3)..

Sygdom-specifik overlevelse analyse ifølge Kaplan-Meier-metoden til REG4 udtryk i ikke-mucinøs kolorektal cancer ved log-rank test

Cox regression univariable analyser bekræftede disse resultater, med REG4 udtryk være et tegn på en reduceret risiko for død inden for 5 år for ikke-mucinøs CRC. En væsentlig forskel opstod også for patienter under 65 (HR 0,57, 95% CI 0,34-0,94, p = 0,029), men ikke for dem ældre (HR 0,83, 95% CI 0,57-1,22, p = 0,34). Cox regression multivariable analyse for ikke-mucinøse CRC patienter under 65, korrigeret for køn, scene, og differentiering, viste, at REG4 var en uafhængig faktor for gunstig prognose (HR 0,55, 95% CI 0,33-0,92, p = 0,022) (tabel 5 ).

diskussion

Her viser vi ved immunhistokemi at REG4 udtryk i ikke-mucinøse kolorektal cancer associerede med gunstige klinisk-patologiske parametre og at REG4 er en uafhængig markør for gunstig prognose hos patienter under 65. REG4 udtryk associerede virksomheder med udtryk for andre intestinale markører:. MUC1, MUC2, og MUC5AC

REG4 udtryk var højere i lav-trins tumorer og i dem med af mucinøs histologi. Med mucinous tumorer udelukkes, REG4 ekspression forbundet signifikant med højere differentiering og lavt trin. REG4 udtryk også forbundet med MUC1, MUC2, og MUC5AC, hvilket understøtter konklusionen om, at REG4-positive tumorer er mere stærkt differentieret end er dem, der er REG4 negative. Disse resultater er i overensstemmelse med resultaterne af Li et al [17], som viste, at der til REG4, immunhistokemisk (IHC) udtryk i CRC associerede markant med højere differentiering og med fravær af venøs invasion. Desuden viste REG4 ekspression en tendens som association med lav T-stadium, fravær af lymfeknudemetastase, og lokal sygdom (Dukes A-B vs C-D). Lignende resultater vises for galdeblæren kræft, hvor positiv REG4 IHC udtryk, associerede virksomheder med højere tumor differention [22]. Kontroversielle resultater for CRC i Numata et al. viser, at højere REG4 mRNA ekspression forbinder med højere differentiering, dybere invasion (T-stadie), lymfe invasion, forekomst af levermetastaser, og mere fremskredent stadium [16]. De dog målte mRNA-niveauer ved PCR, ikke som vi gjorde egentlig proteinekspression.

associering mellem REG4 niveauer og karcinom har været under undersøgelse i både serum og væv. Forhøjet serumkoncentration af REG4 i carcinom patienter sammenlignet med raske kontroller har været en konstatering i bugspytkirtelkræft [12], mavekræft [11] og galdeblære kræft [22], hvilket indikerer, at serum REG4 kunne tjene som et diagnostisk biomarkør. Forøget REG4 IHC ekspression er blevet foreslået som en markør for dårlig prognose i gastrisk cancer [23], og forhøjede vævsniveauer af REG4 mRNA kan være en markør for dårlig prognose i CRC [16]. REG4 IHC udtryk har imidlertid vist, ingen effekt på prognosen i CRC [17], [18]. En årsag til dette kan være, at mucinøse og ikke-mucinøse kræftformer ikke blev analyseret separat. Også forskelle i antistoffer, farvning procedurer og analyse af farvninger kunne have afveg fra vores undersøgelse. I galdeblæren cancer, har REG4 IHC ekspression blevet forbundet med bedre prognose [22].

Vores resultater viser, at REG4 IHC udtryk er en markør for gunstig prognose i ikke-mucinous CRC, hvorimod ingen forskel opstod i mucinøs CRC. REG4 udtryk er konstitutivt højt i mucinøse tumorer (dvs. Pseudomyxoma peritonei, og mucinøse cystadenomas og mucocellular mavekræft) Dette kan forklare, hvorfor nogen klar variation i REG4 udtryk blev fundet af IHC i gruppen af ​​mucinøse CRC tumorer. Forskelle i REG4 ekspression var derimod tilsyneladende i ikke-mucinøs CRC. I vores patienter under 65, forhøjet REG4 var en uafhængig faktor for bedre prognose i ikke-mucinøs CRC. Det synes derfor sandsynligt, at REG4 mRNA-niveauer kan være forhøjet i CRC patienter med dårlig prognose, men dette er ikke oversat til protein. Yderligere undersøgelser er således berettiget at sammenligne REG4 mRNA niveauer med REG4 IHC fra sag til sag.

Vores resultater vedrørende fem par REG4-positive primære tumorer og deres tilsvarende lymfe-node metastaser viste, at fem lymfeknuder, kun to viste REG4 udtryk; dette kan indebære, at en REG4-negative underpopulation af tumorceller er mere tilbøjelige til at metastasere end REG4-positive celler.

REG4, udtrykkes i inflammatoriske tarmsygdomme og også i tilknytning til mavesår, betragtes som en markør af inflammation [6]. I nogle af vores hele-vævssnit tumorvæv farves negative for REG4, men den tilstødende godartet epitel udtrykt REG4 kraftigt, tilsyneladende repræsenterer en inflammatorisk reaktion mod tumoren.

Det er bemærkelsesværdigt, REG4 ekspression giver en mere gunstig prognose kun i CRC uden mucinøs differentiering. Faktisk har høj ekspression af REG4 optrådt i aggressive former for gastrointestinal cancer, der viser mucinøs fænotype-lignende mucocellular (signetring celle) karcinom i maven [9]. På den anden side, REG4 er også i stort omfang i mucin-rige cystadenomas af tillægget og i sin ondartede, dissemineret form pseudomyxoma peritonei, som er notorisk terapi resistent.

Et flertal af entero-endokrine celler i normal tarmslimhinden vise high fysiologiske udtryk for REG4 med co-ekspression af synaptophysin og chromogranin. Intestinale neuro-endokrine tumorer af både lav og høj kvalitet viser også REG4 positivitet, ofte med et eget anatomisk fordeling med den stærkeste ekspression i et enkelt lag af celler i periferien af ​​tumoren, der er i intim kontakt med det omgivende stroma [6] på baggrund af denne, det var noget spændende at synaptophysin- og chromogranin-positive CRC tumorer i denne undersøgelse forblev negative for REG4.

Flere rapporter tyder det onkogene rolle REG4 i udviklingen af ​​kræft i mave-tarmkanalen. De ultimative molekylære mekanismer har dog forblev undvigende. Bishnupari et al [24] rapporterede, at behandling af dyrkede colonadenocarcinom celler med rekombinant REG4 protein induceret phosphorylering af receptoren og Akt EGF. De foreslog, at REG4 er en transaktivator af EGFR /Akt signalvej. En yderligere belysning af den rolle exogent REG4 som en regulator af potentiel cellevækst er imidlertid afventer identifikation af det formodede REG4 receptoren. Ingen beviser for, at øget udtryk for REG4 sig selv inducerer kræft vækst, dog. Vores observationer på mus transgene for menneskelig REG4 cDNA under villin promotor, der fører til global overekspression af REG4 i tarmslimhinden inducerede ikke øget tumordannelse eller slimhinde hyperplasi (upublicerede data).

Regulering af REG4 udtryk er stadig dårligt forstået. Vi oprindeligt rapporteret kraftigt opreguleret ekspression af REG4 også i betændte IBD slimhinde IBD-lignende foci af gastritis-induceret intestinal metaplasi i maven [6]. Dette antyder, at inflammatoriske cytokiner kan påvirke REG4 ekspression. Neuroendokrine differentiering, på den anden side, som det ses i enteroendocrine celler, tilsyneladende medfører konstitutiv ekspression af REG4. Vi har for nylig rapporteret co-ekspression af REG4 med den neuronale transkriptionsfaktor Hath-1 (atonale, Math-1) i neuroendokrine tumorer [9]. Hvad mangler at blive etableret, er, om en regulator af REG4 udtryk er Hath-1.

I forhold til hele vævssnit, TMA teknik tillader analyse af større kohorter patient, men med en mindre andel af tumorerne evalueret. Dette udgør ikke noget problem her, men som det REG4 farvning mønster i vores hele afsnittet farvning var homogen. Af tekniske årsager, blev op til 5% af prøverne tabt i TMA-produktion og -staining proces. Styrken ved denne undersøgelse er et stort, godt karakteriseret CRC-patient kohorte med vores lange follow-up tid.

Her viser vi, at vores viden for første gang, at REG4 IHC udtryk er en uafhængig markør af gunstig prognose i ikke-mucinøs kolorektal cancer hos patienter under 65 år Disse resultater er i uoverensstemmelse med dem, der opnås ved at evaluere mRNA-niveauer; vores uoverensstemmelser med andres resultater berettiger yderligere undersøgelser.

Støtte Information

figur S1.

Clinicopathologic karakteristika studiepopulation og undergruppe befolkning

doi:. 10,1371 /journal.pone.0109600.s001

(DOCX)

Figur S2.

REG4 udtryk indikerer bedre prognose i ikke-mucinøs kolorektal cancer for yngre patienter. Sygdomsspecifikke overlevelse analyse ifølge Kaplan-Meier-metoden til REG4 udtryk i ikke-mucinøs kolorektal cancer hos patienter under 65 ved log-rank test

doi:. 10,1371 /journal.pone.0109600.s002

( TIFF)

Figur S3.

REG4 udtryk viser ingen forskel i overlevelse i ikke-mucinøs kolorektal cancer for ældre patienter. Sygdomsspecifikke overlevelse analyse ifølge Kaplan-Meier-metoden til REG4 udtryk i ikke-mucinøs kolorektal cancer hos patienter på 65 og ældre ved log-rank test

doi:. 10,1371 /journal.pone.0109600.s003

(TIFF)

tak

Vi takker Päivi Peltokangas, Gynel Arifdshan, og Elina Aspiala for deres fremragende teknisk bistand.