PLoS ONE: den afkortede isoform af Somatostatin Receptor5 (sst5TMD4) er forbundet med dårligt differentieret Thyroid Cancer

Abstrakt

Somatostatin receptorer (ssts) er udtrykt i skjoldbruskkirtlen kræftceller, men deres biologiske signifikans er ikke godt forstået. Formålet med denne undersøgelse var at vurdere ssts i godt differentieret (WDTC) og dårligt differentieret kræft i skjoldbruskkirtlen (PDTC) ved hjælp af billedbehandling og molekylære værktøjer og dets forhold til effekten af ​​somatostatin analog behandling. Tredive-ni tilfælde af thyreoideakarcinom blev evalueret (20 PDTC og 19 WDTC). Depreotid scintigrafi og mRNA-niveauer af SST-undertyper, herunder den afkortede variant sst5TMD4, blev udført. Depreotid scanninger var positive i den tilbagevendende tumor i halsen i 6 af 11 (54%) PDTC, og patienter med lungemetastaser i 5/11 tilfælde (45,4%); sst5TMD4 var til stede i 18/20 (90%) af PDTC, er den tættest udtrykte SST-subtype, med en 20 gange forøgelse i forhold til sst2. I WDTC, sst2 var den mest repræsenterede, mens sst5TMD4 ikke blev fundet; sst2 blev øget betydeligt i PDTC i forhold til WDTC. Fem depreotid positiv PDTC modtog octreotid i 3-6 måneder i en pilotundersøgelse med ingen ændringer i størrelsen af ​​læsioner i tre af dem, og en betydelig stigning i den pulmonale og cervikale læsioner i de andre 2. Alle PDTC patienter behandlet med octreotid viste høj ekspression af sst5TMD4. ROC kurve analyse viste, at kun sst5TMD4 diskriminerer mellem PDTC og WDTC. Vi konkluderer, at sst5TMD4 er overudtrykt i PDTC og kan være involveret i den manglende respons på somatostatin analog behandling

Henvisning:. Puig-Domingo M, Luque RM, Reverter JL, López-Sánchez LM, Gahete MD, Culler MD, et al. (2014) den afkortede isoform af Somatostatin Receptor5 (sst5TMD4) er forbundet med dårligt differentieret kræft i skjoldbruskkirtlen. PLoS ONE 9 (1): e85527. doi: 10,1371 /journal.pone.0085527

Redaktør: Miguel López, University of Santiago de Compostela School of Medicine – CIMUS, Spanien

Modtaget: 13 september, 2013; Accepteret: November 28, 2013; Udgivet: 21 Jan 2014

Copyright: © 2014 Puig-Domingo et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. M. Puig-Domingo, JP Castaño, RM Luque og I. Halperin har modtaget foredrag gebyrer fra Novartis og Ipsen. M. Puig-Domingo har modtaget honorarer for deltagelse i advisory boards fra Genzyme. Dette arbejde er finansieret af følgende tilskud: BIO-0139, CTS-5051, PI-036-2012, BFU2010-19300, CIBERobn, (til R. M. Luque og J. P. Castaño); “Sara Borrell” program CD11 /00276 (til M.D. Gahete) og programmet “Juan de la Cierva” JCI-2009-05.675 (til L. M. López-Sánchez). Dette arbejde blev delvist støttet af Novartis Oncology Spanien (til M. Puig-Domingo og I. Halperin). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. M. Puig-Domingo, J. P. Castano, R.M. Luque og I. Halperin har modtaget foredrag gebyrer fra Novartis og Ipsen. M. Puig-Domingo har modtaget honorarer for deltagelse i advisory boards fra Genzyme. Dette arbejde er finansieret af følgende tilskud: BIO-0139, CTS-5051, PI-036-2012, BFU2010-19300, CIBERobn, (til R. M. Luque og J. P. Castaño); “Sara Borrell” program CD11 /00276 (til M.D. Gahete) og programmet “Juan de la Cierva” JCI-2009-05.675 (til L. M. López-Sánchez). Dette arbejde blev delvist støttet af Novartis Oncology Spanien (til M. Puig-Domingo og I. Halperin). Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Kræft i skjoldbruskkirtlen i papillær og follikulært godt differentierede former (WDTC) har en fremragende prognose med meget høje hærdningshastigheder efter kirurgisk behandling efterfulgt af radioaktivt iod [1], [2]. Men behandlingen af ​​patienter med dårligt differentieret (PDTC) radioaktivt jod (RAI) -refractory kræft i skjoldbruskkirtlen er kontroversielt og vanskeligt, med ingen effektiv behandling til rådighed, indtil for nylig opstået af multi-target tyrosinkinasehæmmere [3]. Det er normalt accepteret, at PDTC sker enten

de novo

eller fremskridt fra en allerede eksisterende WDTC gennem en flertrins proces af genetiske og epigenetiske ændringer. Nye molekylære veje og mål er under forskning for at opdage dedifferentieringen processen med skjoldbruskkirtlen cancerceller [4].

Somatostatin er et allestedsnærværende peptid fra centralnervesystemet-mave-tarmkanalen, der udøver mange biologiske funktioner i både endokrine og non -endocrine væv ved binding til sine fem receptorsubtyper (sst1-5) [5]. Ekspression af somatostatin receptorer (ssts) i tumorer, der opstår fra forskellige væv har været grundlaget for at bruge somatostatinanaloger som en bio-behandlingsmulighed hvilket fører til en stabilisering af tumorvækst og stigende patient overlevelsestid i nogle typer af kræft [6], [7 ]. Nylige og gamle undersøgelser indikerer tilstedeværelsen af ​​ssts i prøver af forskellige patologiske tilstande i skjoldbruskkirtlen, herunder ikke-medullær thyreoideacancer [8], [9]

sst receptor familie er blevet fuldt karakteriseret, og klassisk, 5 undertyper er blevet identificeret med forskellige biologiske implikationer i cellecyklus [8]. SST undertyper 2 og 5 er involveret i kontrollen af ​​hormonsekretion samt cellevækst, mens sst1, 3 og 4 er for det meste impliceret i ikke-hormonale funktioner [10] – [12]. Somatostatinanalog behandlinger, der anvendes i klinisk praksis involverer binding af sst2 og 5 med forskellig affinitet [13], [14], med sst2 har den maksimale binding affinitet til den mest anvendte forbindelser, octreotid og lanreotid [15], mens pasireotide er en ny sammensatte målrettet sst5 med højere affinitet [16], [17]. For nylig, er blevet identificeret to nye funktionelle humane sst5 varianter, den såkaldte sst5TMD4 og sst5TMD5, der genereres gennem ikke-kanoniske splejsning, og visning unikke molekylære /funktionelle egenskaber [18], [19]. Interessant sst5TMD4 er blevet påvist i patienter med GH-secernerende adenomer og brystcancer [19] – [21]. sst5TMD4 ekspression er blevet forbundet med dårligt respons på octreotid behandling i akromegali. Imidlertid er dens funktionelle betydning ikke godt beskrevet i anden form for tumorer.

Her har vi gennemført en retrospektiv undersøgelse på det molekylære niveau til at udforske det potentielle sammenslutning af SST undertyper fænotype, og især sst5TMD4, i WDTC og PDTC patienter, dens potentielle anvendelse som en biologisk markør og dets terapeutiske implikationer.

Materialer og metoder

undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-deklarationen, (revision af Edinburgh 2000) og blev godkendt af human Research Ethics Committee for Hospital Clinic de Barcelona (Comité Ético de Investigación Clínica, CEIC), Barcelona, ​​Spanien. Arten af ​​studiet blev forklaret for patienterne, og skriftligt informeret samtykke blev opnået i hvert tilfælde.

Patienter

Undersøgelsen bestod i 39 patienter (29 kvinder /10 mænd) fra to universitetshospitaler. Blandt disse 39 fag, 20 patienter havde PDTC (tabel 1) med gennemsnitlig alder 57 ± 13 år, (12 kvinder /8 mænd); fra de 20 PDTC sager, 18 var papillære tumorer og to var af follikulært oprindelse. Alle havde aktiv sygdom (stadie IV i TNM klassifikation), med en opfølgning fra 6 til 21 år, og ni af dem døde under opfølgning. Thyroglobulin koncentrationer i disse patienter varierede fra 4 til 29595 ng /ml. Alle patienter blev behandlet med en lignende terapeutisk protokol efter internationale guidelines [1], [2]. De patienter bærende PDTC behov for flere operationer, når det angives, og mere end en dosis af RAI; RAI terapi ikke længere bruges, når RAI optagelse blev negativ trods sygdomsprogression. PDTC patienter blev behandlet med thyroxin på suppressive doser mens godt differentierede sager modtaget thyroxin i en dosis målretning TSH en normal-lav værdi ( 2 mIU /ml). Alle PDTC tilfælde viste negativ RAI trapping kapacitet under deres udvikling og alle havde locoregional hals tilbagefald og /eller extracervical metastaser, enten i centralnervesystemet, knogler, lunge eller mediastinum påvist ved forskellige billeddannende procedurer, herunder ultrasonografi, CT-scanning, MRI, og

18F-FDG-PET scanning. For at kunne deltage i en pilotundersøgelse, hvor somatostatin analog octreotid ville blive administreret, i 11 ud af disse 20 patienter, blev en

99mTc-depreotid scintigrafi udført for evaluering af sst tilstedeværelse i den resterende primære tumorvæv og metastaser. Fem ud af de 11 patienter, hvor

99mTc-depreotid scintigrafi viste et positivt billede af den resterende primære tumor og /eller metastatisk væv og progressiv sygdom ved RECIST-kriterierne modtog behandling med langtidsvirkende somatostatin analog octreotid i doser på 30 mg IM /måned i en periode på 3-6 måneder i 2007 og 2008 (tabel 1)

de resterende 19 af de 39 patienter inkluderet i undersøgelsen udgjorde kontrolgruppen.; alle havde godt differentierede tumorer, er fri for sygdom på tidspunktet for undersøgelsen og tilsyneladende helbredt efter den første og enkelt behandling udføres på tidspunktet for diagnosen, som består i alt thyreoidektomi efterfulgt af 100 mCi RAI givet 3 måneder efter operationen. Gennemsnitsalderen for denne gruppe var 48 ± 8 år (10 mænd og 10 kvinder).

Imaging teknikker

99mTc-depreotid scintigrammer blev udført i 11 ud 20 patienter bærer en PDTC ( tabel 1). Depreotid er en somatostatin-analog binding til SSTR 2, 3 og 5 på celleoverflader, mere effektivt end octreotid radioaktivt mærkede forbindelser. Alle patienter var på hormonal undertrykkende behandling med thyroxin, når procedurerne imaging blev udført.

99mTc-depreotid blev fremstillet af et kommercielt tilgængeligt kit (NeoSpect®, Amersham Health, Buckinghamshire, UK). Den iv-injicerede dosis pr patient var 740 MBq (50 ug peptid) af

99mTc-depreotid. Scintigrafisk billeddannelse blev erhvervet med en dobbelt-head gamma kamera og en høj opløsning kollimator.

99mTc-depreotid billeder blev opnået ved 1 time og 3 timer efter injektion. opkøb af hele kroppen og single-photon emission computer tomografi (SPECT) af hoved, hals, brystkasse og mave Plane blev udført. For at evaluere hypermetabolisk tumoraktivitet,

18F-FDG-PET scanninger blev desuden opnået ved 1 time efter iv injektion af 370 MBq 18F-FDG hjælp af en dedikeret fuld ring PET scanner, med en aksial synsfelt på 15,2 cm og en maksimal opløsning på 3,8 mm transaxially og 4,0 mm aksialt.

Angivelse af ssts i kræft i skjoldbruskkirtlen væv og normal skjoldbruskkirtel

Bestemmelse af ssts udtryk ved kvantitativ real-time RT-PCR (qrtRT -PCR) blev udført i tumor paraffinindlejrede prøver af alle WDTC og PDTC patienter. I PDTC patienter blev prøver opnået på tidspunktet for kirurgisk reintervention for fremrykkende sygdomstilstand fra tumor væv af cervikal tilbagefald i alle tilfælde. Derudover blev prøver af normal skjoldbruskkirtlen (n = 7) opnået fra tumoren Biobank af tyskerne Trias Hospital og fra en pulje af prøver af normal skjoldbruskkirtel opnået på University of Córdoba blev også inkluderet i undersøgelsen. Konkret blev tumor og normal skjoldbruskkirtel prøver (4 sektioner af 5 um tyk) forarbejdet til et opsving af total RNA ved hjælp af RNeasy FFPE Kit, med DNAase behandling (Qiagen, Barcelona, ​​Spanien). Detaljer for RNA kvantificering, revers transkription (RT, 1 ug totalt RNA) og qrtRT-PCR for alle SST-subtyper er tidligere blevet rapporteret i detaljer 18,22. Det skal bemærkes, at en specifik standardkurve for hver transkript blev kørt med hvert sæt prøver at estimere kopital. Total RNA-prøver, som ikke blev revers-transkriberet blev kørt for at kontrollere for genomisk og /eller teknisk DNA-kontaminering (baggrund). For at kontrollere for variationer i mængden af ​​RNA, der anvendes i RT-reaktionen og effektiviteten af ​​RT-reaktionen, ekspressionsniveauet (kopital) af 3 housekeeping-gener (glyceraldehyd-3-phosphatdehydrogenase – GAPDH, β-actin og 18S) blev bestemt for hver prøve som tidligere beskrevet (19,20). GeNorm® 3.3 Visual Basic program til Microsoft Excel® (https://medgen.ugent.be/jvdesomp/genorm) [23] blev anvendt til at vurdere stabiliteten af ​​husholdning gener. De geometriske middelværdier for de kopiantal for GAPDH og β-actin inden hver prøve blev anvendt som en endelig normaliseringsfaktor (NF). Resultaterne blev derefter rapporteret som sst kopi nummer minus baggrund divideret med den tilsvarende NF.

Reaktion på octreotid behandling

En undergruppe af PDTP patienter refraktære over for radioaktivt jod behandling, progressiv sygdom ved radiologiske kriterier og positiv depreotid scanninger modtaget octreotid behandling i 3-6 måneder i en pilot medfølende protokol accepteret af patienterne og hospitalets etiske komité (tabel 1). Effekten blev vurderet ved hjælp af kriterierne RECIST (https://www.recist.com/index.html) og i henhold til ssts undertyper.

Statistisk analyse og Receiver Operating Karakteristiske (ROC) kurver af ssts udtryk

Kategoriske data blev beskrevet ved hjælp af frekvenser og procenter. For kvantitative variabler, mål for central tendens og spredning (middelværdi og standardafvigelse) er forudsat.

Bivariate analyse af de vigtigste variabler blev udført ved hjælp af 2 × 2 kontingenstabeller med X2 test til at vurdere væsentlige forskelle i frekvenser til kategoriske variabler. Den parametriske t-test blev anvendt til at sammenligne kvantitative data. I de kvantitative variabler ikke normalt fordelt, og den ikke-parametriske Mann Whitneys U-test blev anvendt, når det angives.

blev udført med den statistiske pakke for Social Sciences (SPSS) version 17,0 (SPSS, Chicago Alle analyser, IL, USA). Vi overvejede p 0,05 til at være statistisk signifikant

ROC (Receiver Operating Karakteristisk) blev udført til vurdering af diagnostisk test sensibilitet og specificitet.. Det blev brugt som et redskab til at måle, hvor godt udtryk for ssts kunne skelne mellem de to diagnostiske grupper (patienter med aktiv sygdom /patienter fri for sygdom). Den statistiske analyse af ROC kurver blev udført ved at beregne arealet under kurven (AUC) for hver receptor, og sammenligne dem med AUC for referencelinjen hjælp student-t-test.

Resultater

Ssts identifikation i dårligt differentieret kræft i skjoldbruskkirtlen ved

99mTc-depreotid imaging

i de 11 patienter (5 mænd og 6 kvinder) fra PDTC gruppe, hvor en

99mTc-depreotid blev udført, 9 viste livmoderhalskræft loco-regional tilbagefald og alle præsenterede metastaser af forskel størrelse i lungerne eller knogler identificeret enten ved CT-scanning og /eller MR og /eller knogle scintigrafi.

99mTc-depreotid scintigrafi var positiv i nakken i 6 af disse 11 patienter (54%), og i lungen blev fundet positive billeder i 5/11 (45,4%) (figur 1). Disse 6 tilfælde med negative lunge billeder havde mikrometastaser, som det fremgår af CT-scanning. I den eneste patient, der har knoglemetastaser, hvor

99mTc-depreotid scintigrafi blev udført, billedet var negativ.

18F-FDG-PET-scanning var positiv i 8/11 i lungerne og i nakken i 5/11 (tabel 1).

Respons på behandling med somatostatin-analog

Fem patienter, hvor

99mTc-depreotid scintigrafi positive billeder blev fundet enten i nakke og /eller lungen blev behandlet med den langtidsvirkende somatostatinanalog octreotid i doser på 30 mg i løbet af en periode på 3-6 måneder i en pilotundersøgelse. Respons på behandling blev vurderet ved hjælp af lunge CT-scanning og livmoderhalskræft ultralydsundersøgelse imaging henhold til RECIST kriterier. Hos 3 patienter, blev fundet nogen ændring i størrelsen af ​​læsionerne. I de resterende 2 patienter, var der en betydelig stigning i de pulmonale læsioner i ét og i den anden en betydelig stigning i størrelsen af ​​cervikale læsioner med tegn på intratumoral nekrose i en af ​​læsionerne. Behandlingen var veltolereret i alle tilfælde, med nogen særlig metabolisk komplikation; selvom én patient præsenterede abdominal ubehag, der forsvandt efter tidsmæssige fald i dosen af ​​octreotid. Alle behandlinger blev stoppet som ingen tilsyneladende ændring af udviklingen i sygdommen blev fundet og i 2 patienter tegn på progression virkede plausibelt. På grund af resultaterne af denne første sæt af behandlinger, blev ingen nye PDTC sager indgår i pilotundersøgelsen.

Angivelse af ssts i godt differentieret, dårligt differentieret kræft i skjoldbruskkirtlen væv og normal thyreoideavæv

Resterende primær cancer væv og metastaser prøver fra undergruppen af ​​patienter med billeddiagnostiske undersøgelser og

99mTc-depreotid scintigrafi plus 9 yderligere patienter (i alt = 20; tabel 1) bærer PDTC blev inddrevet for ssts udtryk studier. Prøver fra 19 patienter med WDTC fri for sygdom tilstand ved opfølgning blev også inkluderet i undersøgelsen, og derudover prøver fra 7 normale skjoldbruskkirtel og fra en pulje af normale skjoldbruskkirtel. En variabel mængde af mRNA for hver af de fem SST-undertyper blev fundet med ingen signifikante forskelle mellem aldre og køn (data ikke vist) i WDTC og PDTC grupper, samt blandt de normale thyreoideavæv. Mean mRNA indholdet af SST-undertyper i WDTC og PDTC er vist i figur 2. I WDTC, sst2 var den dominerende SST-undertype repræsenteret, efterfulgt af sst1 sst5 sst3 = sst4, mens ekspressionen af ​​sst5TMD4 og sst5TMD5 blev ikke fundet i WDTC prøver. I gruppen af ​​PDTC, den mest repræsenterede SST-subtype var langt sst5TMD4, som fandtes at vise en 23 fold-stigning i ekspression i forhold til den næste mest udtrykte SST-subtype, som var sst2, efterfulgt af sst1 sst3 sst4 sst5. Ekspression af sst5TMD5 blev ikke påvist i PDTC. I 2 ud af 20 patienter (10%) med PDTC, blev sst5TMD4 ikke detekteret. Når man sammenligner SST-undertype mRNA niveauer mellem WDTC og PDTC fandt vi, at sst2 udtryk var højere i WDTC sammenlignet med PDTC (317 ± 80

vs

158 ± 42, henholdsvis;. P = 0,08). Også ekspression af sst1 og sst5 tendens til stigende i den PDTC gruppen sammenlignet med WDTC patienter (173 ± 98 vs. 24 ± 4 til sst1 og 202 ± 62 vs. 114 ± 18 til sst5; p = 0,16 og 0,12, henholdsvis). Ingen forskelle eller tendens til forskel blev fundet i ekspressionsniveauerne af sst3 eller sst4 mellem PDTC og WDTC. Endelig alle 5 patienter, hvor octreotid behandling blev udført viste høj ekspressionsniveauer af sst5TMD4 (gennemsnit = 2286 ± 896).

mRNA kopi antal kanonisk (sst1-5) og afkortet (sst5TMD4) somatostatinreceptorer blev målt af qrtRT-PCR i et batteri af godt differentierede skjoldbruskkirtelkræft (WDTC) og dårligt differentierede skjoldbruskkirtelkræft (PDTC). Absolutte mRNA niveau værdier blev korrigeret med en normalisering faktor (NF) opnået som geometriske hjælp af kopi numre for GAPDH og β-actin. Værdier repræsenterer gennemsnit ± SEM (n = 19-20 patienter). Stjerner (***, s 0,001) indikerer værdier, der afviger væsentligt fra WDTC

Med hensyn til undersøgelse udført i normal thyreoideavæv, resultaterne viser klart, at ekspressionsniveauerne af sst5TMD4 er ganske lav i. disse normale prøver (20 ± 7 eksemplarer af sst5TMD4 /50 ng af total RNA), som understøtter tidligere data rapporteret af vores gruppe [18].

ROC kurver blev anvendt til at estimere effektiviteten af ​​de forskellige ssts ekspressionsniveauerne at skelne mellem de to diagnosegrupper (patienter med aktiv sygdom /patienter fri for sygdom; Figur 3). Jo tættere ROC-kurven er at det øverste venstre hjørne af grafikken (dvs. højere sensitivitet og specificitet), jo højere den samlede nøjagtighed af markøren anvendes. Mens udtryk for den kanoniske sst1-sst5 havde en lavere evne til at skelne mellem de to diagnosegrupper (ROC kurver svarende til referencelinjen), ROC-kurven af ​​de trunkerede sst5TMD4 ekspressionsniveauerne var signifikant forskellig fra referencelinjen (areal under kurven = 0,957; p 0,0001). Faktisk et snit score på 5 kopier af sst5TMD4, som faldt sammen med tilnærmelse ved middelværdien af ​​ekspressionen af ​​patienter fri for sygdom, gav en følsomhed på 90% og en specificitet på 84%. En optimal score større end eller lig med 8,5 kopier havde 90% følsomhed og specificitet. Derfor er vores resultater viser tydeligt, at ekspressionen af ​​trunkeret sst5TMD4 variant er den eneste markør, der kan anvendes i en følsom og specifik måde.

Discussion

RAI-refraktær PDTC er fundet i omkring 5-10% af alle follikulære celleafledte skjoldbruskkirtelkræft [1], [2]. Disse patienter har en dårlig prognose, som ingen effektive behandlinger er tilgængelige på nuværende tidspunkt 24,25 og dermed jagten på nye mål behandling, for det meste for fase III og IV tilfælde, er i øjeblikket i gang [3], [4].

Somatostatin regulerer mange fysiologiske funktioner i de fleste organer pattedyr og ikke-pattedyr arter gennem sine sst1-5 receptorer [10]. Derudover somatostatin og dets analoger viser antiproliferative aktioner, som gør dem anvendelige som koadjuvant behandling især for neuroendokrine tumorer [7], bortset fra deres anvendelighed ved akromegali [26]. I akromegali, er langtidsvirkende somatostatinanaloger forbundet med et fald på omkring 20% ​​i størrelsen af ​​adenomer efter 6-12 måneders behandling i en tredjedel af tilfældene [27]. Desuden radiomærket peptid-receptor målrettede behandlinger er en anden potentiel mulighed for nogle tumorer bærer ssts [28]. Tilstedeværelsen af ​​ssts er blevet rapporteret i normal thyroid væv og i kræft i skjoldbruskkirtlen [8]. Desuden er der i skjoldbruskkirtlen carcinom-cellelinier, somatostatin er i stand til at inhibere celleproliferation, selv i anaplastisk thyroidea carcinom-cellelinier [8]. Kvantitativ evaluering af ssts udtryk i kræft i skjoldbruskkirtlen har vist nogle uoverensstemmelser, med nogle forfattere rapporterer udtryk for sst1, 3 og 5, og andre udelukkende sst5 ved hjælp immuncytokemiske teknikker [8], [10]. Selv med disse uoverensstemmelser, har udtryk ssts i både follikulært og parafollikulær oprindelse kræft i skjoldbruskkirtlen væv for nylig blevet bekræftet af andre laboratorier [9], [11], [12], [29] -. [31]

i det sidste tiår tilstedeværelsen af ​​ssts i kræft i skjoldbruskkirtlen er også blevet udforsket af skjoldbruskkirtlen scintigrafi, for det meste ved hjælp af radioaktivt mærket octreotid og depreotid, men også med andre forskellige forbindelser [32], [33], fremme af udpegning af metastatisk væv ikke påvises med RAI Scan. Depreotid har en høj affinitet for sst2, 3 og 5, således at en effektiv erhvervelse af billeder i væv, der udtrykker disse receptorer. I vores PDTC patienter viste depreotid scintigrafi positive billeder i ca. 40-50% af dem i den cervikale tilbagevendende væv og /eller de extracervical metastaser, at den sidstnævnte primært i lunger. Således besluttede vi at udføre en pilotundersøgelse behandle 5 PDTC depreotid positive patienter har store metastaser med somatostatinanalogen octreotid, i et forsøg på at stabilisere eller reducere tumorvækst med resultatet af enten ingen forbedring eller endda en tilsyneladende hurtig vækst i to af de tilfælde. Som følge heraf blev behandling med octreotid trukket tilbage i alle patienter, og nye patienter blev ikke inkluderet. I den eneste tidligere lignende pilot undersøgelse offentliggjort hidtil, Kolhfuerst

et al.

[13] fundet lignende resultater, og konkluderede, at der ikke var nogen indikation for somatostatinanaloger behandling hos patienter med fremskreden PDTC.

Senere i 2009 efter disse patienter blev undersøgt og behandlet, vores gruppe [18] identificeret to nye funktionelle trunkerede varianter af sst5 med 5 og 4 transmembrane domæner. Vigtigt er det, ved hjælp af akromegali model, vi vist, at tilstedeværelsen af ​​disse SST varianter ætiologisk var knyttet til en manglende respons på væksthormon inhibering samt til de antiproliferative virkninger af somatostatin analog behandling [20]. Baseret på disse resultater, vi den hypotese, at patienter med PDTC potentielt kan udtrykke sst5TMD4 og, som et resultat, kan de være ikke reagerer på octreotid behandling. Vi har derfor efterfølgende undersøgt i en retrospektiv måde tilstedeværelsen af ​​sådanne trunkerede varianter af sst5, og demonstrerede for første gang sit eksklusive udtryk i PDTC væv som ingen tilstedeværelse blev fundet i WDTC prøver og normal skjoldbruskkirtel væv. Dette fund tyder på, at sst5TMD4 kan vises i kræft i skjoldbruskkirtlen som dedifferentieringen processen skrider frem, selv om den ultimative mekanisme sin afvigende udtryk er i øjeblikket ukendt. Således kan detektion af sst5TMD4 anvendes som en yderligere markør for dårlig prognose. Dette koncept understøttes af ROC kurver analyser indikerer, at sst5TMD4 identificerer nøjagtigt PDTC, med en følsomhed på 90% og en specificitet på 84%. I denne henseende sst5TMD4 har også for nylig blevet fundet i dårligt differentieret brystcancer [21], hvor det også er forbundet med en dårlig prognose. Endvidere ekspression af sst5TMD4 i MCF-7-brystcancercellelinier øger malignitet funktioner som invasion og proliferation evner. Dette forstærkes malign biologisk adfærd menes at være relateret til den stigning i aktiviteten af ​​phosphorylerede ekstracellulære signal-regulerede kinaser 1 og 2, p-Akt niveauer og cyclin D3 og ARP2 /3-komplekset ekspression [34]. Desuden sst2 ekspression, som er forbundet til en god respons på somatostatin-analoger, viste sig at være nedreguleret i PDTC i sammenligning med WDTC. Interessant sst5TDM4 har vist sig at interagere fysisk med sst2, ændre dens signaltransduktionsmekanismer og, som følge heraf blokerer dens antiproliferative medierede virkninger. Afskaffelse af sst2 signalering resulterer også i nedskrivning af en autokrin hæmmende feedback-loop, som kan ændre den cellulære fænotype og øge celledeling [23], [35]. Dette kunne forklare delvis den tilsyneladende stigning i tumorstørrelse i 2 af vores patienter behandlet med octreotid, som dets binding til sst5TMD4 ville have stimuleres yderligere den funktionelle undertrykkelse af sst2 aktivitet.

Selvom udformningen af ​​den terapeutiske del af nærværende undersøgelse kan have nogle begrænsninger, for det meste ikke findes en kontrolgruppe, som det var en pilotundersøgelse, de molekylære resultater af PDTC prøver studerede efterfølgende synes at forklare den tilsyneladende mangel på respons af octreotid behandling og støttet den kliniske beslutning om at stoppe inddragelse af flere patienter i pilotundersøgelsen. Med hensyn til de terapeutiske konsekvenser af vores resultater, mener vi således, at konklusionerne fra Kolhfuerst

et al

. [13] er fortsat gyldige. Der er tilstrækkelig klinisk og nu molekylær information til stat, som avancerede dedifferentierede kræft i skjoldbruskkirtlen har biologiske funktioner (dvs. høj sst5TMD4 og lav sst2), der kan forklare den manglende effekt eller endda mulige skadelige virkninger af somatostatin analog behandling i sådanne patienter, eller i det mindste i dem, der udtrykker sst5TMD4 i deres tumorer. Som den molekylære heterogenitet af skjoldbruskkirtlen tumorer er mere og mere tydeligt, yderligere forskning på sst5TMD4 varianten kan bane vejen for bedre at forstå sine molekylære funktioner og potentiel anvendelse som et diagnostisk eller endda terapeutisk værktøj i kræft i skjoldbruskkirtlen.

Tak

forfatterne takker Montserrat Gilabert (Novartis Oncology, Spanien), for hendes støtte til dette arbejde.