PLoS ONE: TIA-1 Cytotoksisk granula-associerede RNA bindende protein Forbedrer Prognostisk Udførelse af CD8 i Uoverensstemmelse Repair-Kompetent Colorectal Cancer

Abstrakt

Baggrund

Tyder en confounding effekt af mismatch reparation (MMR) status på immunrespons i kolorektal cancer. Identifikationen af ​​medfødte og adaptive immunceller, der kan supplere den etablerede prognostiske effekt af CD8 i MMR-dygtige kolorektal kræft patienter, som repræsenterer 85% af alle tilfælde, er ikke blevet udført.

Metode /vigtigste resultater

tarmkræft fra en test (n = 1197) og ekstern validering (n = 209) kohorte af MFR-dygtige kolorektal kræft blev monteret på enkelte og multiple slag væv microarrays. Immunhistokemisk kvantificering (score 0-3) blev udført for CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD68, CD163, foxp3, GranzymeB, iNOS, mastcelletryptase, MUM1, PD1 og TIA-1 tumor-infiltrerende (TIL’er) reaktive celler. blev udført coekspression eksperimenter på friske kolorektal cancer prøver vha specifikke celle population markører. I forsøgsgruppen, højere antal CD3 + (p 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), foxp3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM1 + (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) og TIA-1 + TIL’er (p 0,001) var knyttet til gunstigt resultat. Justeret for alder, køn, TNM stadie og postoperativ behandling, højere CD8 + (p 0,001; HR (95% CI): 0,66 (0,64-0,68)) og TIA-1 + (p 0,001; HR (95% CI ): 0,56 (0,5-0,6)) var uafhængige prognostiske faktorer. Desuden blandt patienter med CD8 + infiltrater, TIA-1 yderligere stratificerede 355 (35,6%) patienter i prognostiske undergrupper (p 0,001; HR (95% CI): 0,89 (95% CI: 0,8-0,9)). Resultaterne blev bekræftet på valideringen kohorten (p = 0,006). TIA-1 + -celler var hovedsagelig CD8 + (57%), men også farvet for TCRγδ (22%), CD66b (13%) og kun sjældent til CD4 +, makrofag og NK cellemarkører.

Konklusioner

TIA-1 tilføjer prognostisk information til TNM stadie og adjuverende behandling i MMR-dygtige patienter med tarmkræft. Den prognostiske effekt af CD8 + TIL’er er forvirret af tilstedeværelsen af ​​TIA-1 +, som udmønter sig i bedre risiko lagdeling for ca. 35% af alle patienter med MMR-dygtige kolorektal kræft

Henvisning:. Zlobec I, Karamitopoulou E, Terracciano L, Piscuoglio S, Iezzi G, Muraro MG, et al. (2010) TIA-1 Cytotoksisk granula-associerede RNA bindende protein Forbedrer Prognostisk Udførelse af CD8 i Uoverensstemmelse Repair-Kompetent kolorektal cancer. PLoS ONE 5 (12): e14282. doi: 10,1371 /journal.pone.0014282

Redaktør: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanien

Modtaget: Juni 3, 2010; Accepteret: November 16, 2010; Udgivet: December 10, 2010

Copyright: © 2010 Zlobec et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne blev finansieret af Institut for Patologi, University Hospital of Basel, Forskning pool konto. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

prognosen for patienter med kolorektal cancer kan ses som et samspil mellem tumor- og vært-relaterede faktorer [1]. Eksperimentel beviser gennem de sidste 20 år yder støtte til begrebet immunosurveilllance i kræft, implicerer både medfødte og adaptive immunrespons [2]. I colorektal cancer, har CD3, CD4, CD8, CD20, Granzyme B, og foxp3 + tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL’er) blevet identificeret som potentielle indikatorer for resultatet, medens identifikation af cytotoksiske T-lymfocytter, mastceller og dendritiske celler som elicitorer af anti -tumor reaktioner har understreget nye veje for potentielle immunterapier [3], [4], [5].

i kolorektal cancer, balancen mellem vært og tumor-relaterede faktorer er eksemplificeret ved mismatch repair (MMR) deficiente sporadiske tilfælde, der tegner sig for ca. 15% af alle tumorer og præget af defekte MMR maskiner [6]. Patienter med disse MMR-deficiente cancere er beskrevet som havende rigelige CD8 + cytotoksisk T-celle infiltrere [7] og er ofte knyttet til mere “gunstige” tumor-relaterede funktioner, nemlig tilstedeværelsen af ​​en skubbende tumor grænse konfiguration, tilstedeværelsen af ​​en karakteristisk bånd af peritumoral lymfocytisk inflammation og lille tumor spirende, sidstnævnte en histomorfologisk kendetegnende for epitelial mesenkymale overgang [8]. Denne fænotypiske konstellation, med “tipping skalaen” til fordel for et stærkt forsvar kan delvist være ansvarlig for den mere fordelagtige samlede prognose for patienter med MMR-mangelfuld i forhold til MFR-dygtige tumorer [9]. Interessant, på trods af den kendte confounding virkning MMR status på immunologiske responser i colorektal cancer, omfattende analyser af celletyper involveret i immunreaktion og inflammation er endnu ikke blevet systematisk udført for MMR-dygtige cancere, der omfatter 85% af alle colorektale cancertilfælde.

Derfor er formålet med denne undersøgelse var at bestemme den ekstra prognostisk fordel, over udførelsen af ​​CD8 alene, på 12 vævsbaserede immunologiske biomarkører i MMR-dygtige patienter med tarmkræft. Disse proteinmarkører herunder CD3, CD4, CD45RO, CD68, CD163, foxp3, GranzymeB, iNOS, mastcelletryptase, MUM1p, PD1 og TIA-1 var specielt udvalgt til at dække det bredeste udvalg af mulige celletyper involveret i medfødte og adaptive immunrespons . Dette blev opnået ved hjælp af en indledende test gruppe på 1197 patienter og en ekstern validering kohorte af 209 patienter, henholdsvis med komplet klinisk-patologiske og opfølgende data.

Metoder

Etik Statement

skriftligt samtykke er givet fra patienterne for deres oplysninger, der skal lagres på hospitalet databasen og bruges til forskning. Brugen af ​​væv blev godkendt af de tilsvarende etiske komitéer af Universitetshospitalet i Basel og University of Athens. Frisk udtaget kliniske prøver, der indgår i denne undersøgelse blev indsamlet fra samtykkende patienter, der gennemgår kirurgisk behandling på Basel Universitetshospital.

Test Group

Patienter og specimen karakteristika.

1420 primære for- operativt ubehandlede, uselekterede sporadiske kolorektal cancer patienter behandlet på University Hospital i Basel mellem årene 1987 og 1996 blev inkluderet i denne undersøgelse. Haematoxylin og eosin (H NeoMarkers, MS-1103, monoklonale, 1:40 citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 ‘; CD20; Dako, M0755, monoklonale, 01:50 citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 ‘; CD4; NeoMarkers, MS-1528 monoklonale, 1:40 citratbuffer pH 6, 100 ° C, 60 ‘; CD68; Dako, M0876, monoklonale, 1:200, citratbuffer pH 6, 100 ° C, 15 ‘; GranzymeB; Novocastra, NCL-L-GRAN-B, 1:10, citratbuffer pH 6, 120 ° C, 10 ‘, iNOS; Abcam, ab15323, polyklonale, 1:100 ER1 buffer, 20 ‘, Mastcelletryptase; Dako, M7052, monoklonale, 1:2000, ingen hentning; MUM1; Dako, M7259, monoklonale, 1:50 citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 ‘; PD1; R TIA-1; Immunotech, IM2550, monoklonale, 1:250, ingen hentning; CD3; Dako, monoklonale, citratbuffer; 01:50; og CD45RO; Thermo Scientific UCHL-1, monoklonale, citrat buffer, 1:500. Negative kontrolprøver væv blev testet og gennemgik den samme protokol med det primære antistof udeladt.

proteinmarkører blev scoret af tre observatører (A.L., S. P., A. T.) ved at analysere antallet af positive celler pr væv microarray punch. Intet billede analyse software blev brugt. Det samlede antal immunreaktive celler i tumormikromiljøet blev evalueret, uafhængig af lokalisering (intratumoral eller stromal). Det samlede antal celler pr væv microarray patrice blev givet scoringer fra 0, når ingen positive celler var til stede, og scorer 1, 2 og 3, når 1-10 positive celler, 11-50 positive celler og 50 positive celler pr dorn kunne være observeret, henholdsvis. For PD1 og iNOS, blev sager scoret som det fuldstændige fravær eller tilstedeværelse af eventuelle positive celler.

Validering Group

221 uselekterede, ikke-sammenhængende kolorektal cancer patienter behandlet på Attikon Universitetshospital, University i Athen, Grækenland mellem årene 2004 og 2006 blev inkluderet som en uafhængig validering gruppe. H E slides blev revideret og kliniske data hentes fra patientjournaler (tabel 1). Klinisk resultat af interesse var kræftspecifikke overlevelsestid. En væv microarray af primære kolorektale kræft resektioner fra disse 221 patienter blev bygget. For at udelukke forspænding på grund af mulig tumor heterogenitet, havde hver patient multiple væv og tumorvæv slag taget fra formalinfikserede, paraffinindlejrede blokke ved et væv cylinder med en diameter på 0,6 mm, som efterfølgende blev overført til én modtager paraffinblok anvendelse af en hjemmelavet halvautomatiseret væv arrayer. Hver patient havde et gennemsnit på 4 tumor slag inkluderet på området, herunder to fra tumor centrum og 2 fra den invasive front. Immunhistokemi blev udført for det væv microarray ifølge protokollerne beskrevet ovenfor for forsøgsgruppen. Proteinekspression blev evalueret i overensstemmelse med den scoring beskrevet ovenfor af en erfaren mave-tarm patolog (EK).

Flowcytometrianalyse på friske kliniske prøver

Ti frisk udtaget kliniske prøver var indsamlet og tumorfragmenter blev hakket og enzymatisk spaltet for at opnå enkeltcellesuspensioner. Celler blev overflade farvet med fluoresceinisothiocyanat (FITC) -mærkede antistoffer specifikke for CD4, CD16 eller CD66b (BD Pharmingen, San Diego, CA) eller t-celle-receptor (TCR) γδ (eBioscience, La Jolla, CA) molekyler og med APC-mærkede antistoffer specifikke for CD56 eller Vα24-Jα18 TCR (BD Pharmingen). Efter vask blev cellerne fikseret med 2% formaldehyd og efterfølgende permeabiliseret med 0,5% saponin før intracellulær farvning med PE-mærket TIA-1-specifikke antistoffer (Immunotech, Marseille, Frankrig).

Study Design

undersøgelsen design er skitseret i figur 1. Kort fortalt efter udelukkelse af MMR-mangel sager fra testen kohorten, univariate analyser og multivariable overlevelsestid modeller blev vurderet til at identificere de stærkeste uafhængige prognostiske protein markører og deres samlede værdi. Den uafhængige prognostiske værdi blev efterfølgende evalueret på MMR-dygtige kolorektal kræftpatienter fra Validering Group.

(A) 1420 tarmkræft blev monteret på væv microarrays og immunfarvet for 13 protein markører og mismatch repair (MMR) proteiner. MMR-mangel tumorer blev udelukket. (B) 221 tarmkræft blev monteret i en multiple-slag væv microarray og immunfarvet for uafhængige prognostiske faktorer identificeret i Test Group. MMR-mangel tumorer blev udelukket fra analyse og validering af prognostiske effekter, der udføres på de resterende 209 patienter.

Statistisk analyse

For at undgå bias fra dichotomizing protein immunoreaktivitet, analyser var udføres ved at undersøge scorer 0, 1, 2 og 3 [11]. Kaplan-Meier-kurver blev anvendt til at vurdere indflydelsen af ​​protein-ekspression på samlet cancer-specifik overlevelse. Signifikans blev vurderet i univariat analyse med log-rank test. Cox proportional-farer modeller blev anvendt til at teste den samtidige indflydelse på den samlede kræft-specifikke overlevelse proteinekspression sammen med kendte prognostiske faktorer og antagelsen om proportionale farer blev testet ved at evaluere log (-log (overlevelse)) versus log af overlevelsestid grafer. Snarere end at udføre split-gruppe analyse blev alle multivariable modeller valideret og 95% CI opnået gennem 200 bootstrapped replikationer af oplysninger [12], [13]. Alle tests var to-sidet. Manglende variabler blev anset for at mangle tilfældigt. Ingen beregning blev udført snarere tilfælde-wise sletning blev udført når det er nødvendigt. P-værdier er rapporteret uden justering for flere korrektioner [14]. Alle analyser blev udført med SAS V9.1 (SAS Institute, Cary, NC, USA).

Resultater

Test Group

Kræft-specifik overlevelse analyse- univariat ( Figur 2)

iagttoges gunstigere overlevelsestid for patienter med højere antal CD3 + (p. 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), foxp3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM + 1 (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) og TIA-1 + TIL’er (p 0,001). Repræsentative mikrofotografier af disse protein markører og immunoreaktive celler er vist i figur 3.

Fremhævet markører er de, der viser en signifikant sammenhæng med prognose.

A) CD3, B) CD4, C ) CD8, D) CD45RO, E) foxp3, F) Granzyme B, G) iNOS, H) MUM1, I) PD1, J) TIA-1.

Kræft-specifik overlevelse analyse- Multivariable .

Væsentlige markører blev testet i to multivariable modeller. Vi først evalueret den prognostiske effekt af markørerne justering for effekten af ​​alder ved diagnose, køn, pT, PN, tumor kvalitet og vaskulær invasion. CD3 (n = 945, 434 dødsfald p = 0,128), CD4 (n = 1026; 491 dødsfald; p = 0,463), CD45RO (n = 866, 401 dødsfald; p = 0,181), foxp3 (n = 1091; 519 dødsfald ; p = 0,185), GranzymeB (n = 987; 479 dødsfald; p = 0,091), iNOS (n = 1023, 493 dødsfald; p = 727), MUM1 (n = 1082, 516 dødsfald; p = 0,173) og PD1 (n = 1096; 523 dødsfald, p = 0,389) viste ikke effekt på overlevelsestid efter justering for disse etablerede prognostiske parametre. I modsætning hertil CD8 (n = 1019; 489 dødsfald; p 0,001) og TIA-1 (n = 1005; 481 dødsfald; p 0,001) fastholdt deres meget positiv og betydelig indvirkning på patientens udfald

. en anden overlevelsestid model (tabel 2) virkningen af ​​CD8 og TIA-1 blev igen testet denne gang sammen med patientens alder ved diagnose, køn, pT, pN, metastase og adjuverende behandling. Resultaterne understreger en stærkt signifikant positiv effekt af to markører: (1) CD8 + (n = 292; 75 dødsfald HR: 0,66 (95% CI: 0,64-0,68) og (2) TIA-1 + (n = 290; 82 dødsfald ; HR: 0,56 (95% CI: 0,5-0,6))

Karakterisering af TIA-1-udtrykkende celler

da TIA-1 antages som markør for.. aktiverede CD8 + -T-celler, verificerede vi coekspression af TIA-1 på CD8 + T-celler ved flowcytometri på tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL’er) fra 10 frisk udtaget kliniske prøver. i pct TIA-1 + -celler lå i området fra 0,86 til 6,52 (betyder :. 3.7 ± 1.6) (figur 4A) Costaining med markører specifikke for definerede cellepopulationer bekræftede, at den større population af TIA-1 + celler er repræsenteret af CD8 + T-celler (57 ± 8%) efterfulgt af TCRγδ celler (22 ± 10% ) og CD66b + neutrofiler (13 ± 12%). i modsætning ubetydelige procentdele af CD4 + T-celler, makrofager (identificeret som CD16 + CD56- celler), NK-celler (identificeret som CD56 + celler), og NK /T-celler, (udtrykkende Va24-Ja18 TCR), blev observeret (figur 4 B, C). TIA-1-ekspression blev påvist på et flertal af infiltrerende CD8 + celler (64 ± 22%), mens den resterende fraktion (35 ± 22%) var TIA-1 negativ (figur 4C, D).

Enkelt celle suspensioner opnået fra frisk udtaget tumorprøver (n = 10) var overflade farvet med FITC- eller APC-mærkede antistoffer specifikke for de angivne overflademarkører og intracellulært farvet med PE-mærket anti-TIA-1 antistoffer. A) I pct TIA-1 + -celler B) Procentdelen af ​​CD8 + -celler, TCRγδ celler, neutrofiler (identificeret som CD66b + -celler), CD4 + -celler, makrofager (identificeret som CD16 + CD56- celler), NK-celler (CD16 + CD56 +) og NKT-celler (Vα24-Jα18 TCR +) observeret inden gated TIA-1 + celler. C) Repræsentant dot-plot, der illustrerer co-ekspression af TIA-1 og CD8 molekyler i gated lymfocytter på totale celler opnået fra klinisk prøvemateriale. D) Procentdelen af ​​TIA-1 + og TIA-1- celler inden gated CD8 + celler.

fænotypiske kombinationer af CD8 /TIA-1.

Vi analyserede næste de fænotypiske frekvenser af de 1019 kolorektal kræft med både evaluerbare CD8 og TIA-1 farvning. Tre større fænotyper blev observeret: tumorer negative for både CD8 (Score 0) og TIA-1 (Score 0) (n = 223; 21,9%), tumorer positive for CD8 men negative for TIA-1 (n = 366; 36%) og tumorer positive for både CD8 og TIA-1 (n = 350; 34,3%). Kun 80 tumorer var negative for CD8 og positive for TIA-1 (7,8%). På grund af disse små tal, blev gruppen af ​​CD8 negative tumorer klassificeres som en enkelt undergruppe uanset TIA-1-ekspression.

Kræft-specifik overlevelse analyse af CD8 + TIL’er stratificeret af TIA-1.

overlevelse tidsforskelle blev analyseret for de tre CD8 /TIA-1 fænotyper i 998 patienter, for hvem overlevelsestid var også tilgængelig. Samlet set blev der en betydelig forskel i kræft-specifikke overlevelsestid noteret mellem de tre grupper med patienter med større mængder af CD8 + /TIA-1 + TIL’er oplever det mest gunstige resultat, efterfulgt af CD8 + /TIA-1- sager og endelig ved CD8- patienter (p 0,0001, figur 5). Vi næste udførte multivariable analyse herunder prognostiske faktorer alder, køn, pT PN pM stadium samt postoperativ behandling og bestemt den ekstra fordel, stratificere patienter med tumorer med større mængder af CD8 + TIL’er by TIA-1. Blandt patienter med CD8-positive tumorer, en relativ risiko for død på 0,89: blev observeret for dem med samtidige TIA-1-positive tumorer (p 0,001; tabel 2) (95% CI 0,8-0,9). Disse resultater indikerer, at tilsætningen af ​​TIA-1 i tilfælde af CD8-positivitet forbedrer risikostratificeringen for 35,6% (n = 355) af patienterne.

Sakkuniga

En ekstern validering sæt blev analyseret for CD8 + og TIA-1 + TIL’er. I denne gruppe af MMR-dygtige kolorektal cancer, kun 7 patienter havde tumorer med CD8 + /TIA-1- TIL’er i univariable analyse, overlevelse tidsforskelle for patienter med CD8 + /TIA-1 + TIL’er var signifikant højere sammenlignet med patienter med fravær af CD8 + TIL’er (p 0,0001). Overlevelsestid forskelle mellem patienter med forskellig CD8 /TIA-1 fænotyper blev evalueret i multivariabel analyse med pT stadium pN stadium pM og adjuverende behandling. Blandt patienter med CD8-positive tumorer, TIA-1 positivitet førte til en relativ risiko på 0,79 (95% CI: 0,7-0,9). Sammenlignet med patienter med TIA-1-negative kræftformer (p = 0,006)

diskussion

De nye resultaterne af denne undersøgelse på 1406 MMR-dygtige patienter kolorektal cancer tyder det første, at højere antal TIA-1 + TIL’er udgør en gunstig og uafhængig prognostisk parameter og sekunder, at ud over CD8, TIA- 1 forbedrer prognostiske lagdeling af patienter med 35%.

Selvom den prognostiske betydning af rigelige CD8 + TIL’er tidligere er blevet etableret [3], [5], [15], [16], [17], det undersøgelsen går et skridt videre for at identificere markøren TIA-1 som en yderst relevant prognostisk parameter i kolorektal cancer og især i tumorer med markant cytotoksiske CD8 + TIL’er. TIA-1 er et cytoplasmatisk granul-associeret RNA-bindende protein angiveligt udtrykt i celler med cytolytisk potentiale, herunder 50-60% af CD8 + T-lymfocytter [18]. TIA-1 er blevet vist at være involveret i Fas-medieret apoptose i en række humane maligniteter, og at sensibilisere endotelceller til pro-apoptotiske stimuli samtidig øge NK-celle cytotoksisk aktivitet [19], [20], [21]. Vores resultater er i overensstemmelse med disse resultater. Her viser vi, at 64% af CD8 + TIL’er co-udtrykke TIA-1. Derudover identificerer vi en lille population af CD8 men TIA-1 + tumorinfiltrerende celler repræsenterer populationer af TCRγδ celler og neutrofiler og i mindre grad CD4 + -T-celler, makrofager, NK-celler og NK /T-celler.

Undersøgelser på de kliniske og prognostiske implikationer af TIA-1 + lymfocytter er for det meste begrænset til blodkræftsygdomme med både gunstige og ugunstige virkninger tilskrives overekspression af dette protein [22], [23]. Kun en håndfuld undersøgelser har evalueret TIA-1-ekspression på TIL’er i kolorektal cancer, der vedrører opregulering til apoptose og et øget antal TIA-1 + TIL’er i MMR-mangel tumorer [24], [25]. Interessant nok i vores MFR-dygtige sager, vi kunne ikke finde nogen sammenhæng mellem højere antal TIA-1 + celler og tumor udtryk for den anti-apoptotiske markør bcl-2, pro-apoptotiske markører Apoptose Aktivering Factor-1 (aPAF-1 ) og Mammalian Sterile20-lignende kinase 1 (MST-1) eller med p53 eller spredning Ki67 (data ikke vist). Imidlertid er vi ikke kun rapport, at øget antal af TIA-1 + TIL’er stærkt forbundet med en forbedret klinisk resultat, men udgør en selvstændig prognostisk faktor, i test og validering undersøgelse årgange. Vigtigst er det, vores resultater viser, at virkningen af ​​TIA-1 på resultatet er additiv til CD8, et resultat, der har betydning for 35% af alle patienter. Derfor er betydeligt mere positivt resultat af patienter med CD8 + /TIA-1 + TIL’er forhold til sager med CD8 + /TIA-1 TIL’er kan være tegn på en mere effektiv immunosurveillance ved TIL’er med en aktiveret og yderst cytotoksiske potentiale.

Resultaterne af denne undersøgelse også identificeret en række andre typer af TIL’er inden tumoren center som har en positiv effekt på prognosen, for eksempel foxp3. synes den prognostiske rolle tregs at variere betydeligt med tumortype muligvis indikerer differentierede roller disse celler i et væv-afhængig måde [26] – [28]. I kolorektal cancer, de fleste undersøgelser er i overensstemmelse med vores resultater indikerer, at et stort antal foxp3 tregs er et gunstigt prognostisk faktor for sygdomsfri og samlet overlevelse tid [10], [29], [30]. Men denne effekt, som fremhævet her, synes ikke at være uafhængig af CD8 +.

Selvom vores undersøgelse kan være begrænset af ufuldstændige kliniske oplysninger i nogle tilfælde, vi kunne stadig bekræfte den uafhængige prognostiske effekt af TIA-1 og dens modificerende i CD8 i 500 patienter med komplet TNM og information terapi. MMR status blev analyseret ved ekspression af proteinmarkører MLH1, MSH2 og MSH6 og kun tumorer med positivitet i alle tre markører blev inkluderet i denne analyse. Disse markører samt TIA-1 og CD8 anvendes rutinemæssigt i diagnostisk patologi, de to sidstnævnte for T-celle afstamning beslutsomhed og subtypning af lymfomer dermed støtte deres værdi som pålidelige forskning værktøjer samt [31], [32]. Brugen af ​​TMA’er ofte giver anledning til bekymring, at protein udtryk for heterogene tumorer ikke er tilstrækkeligt repræsenteret ved hjælp af denne teknik. Men i det daglige diagnostiske arbejde, er forekomsten af ​​TIL’er kendt for at være ganske homogene og mens en tumor slag blev udtaget i forsøgsgruppen, den ekstra inddragelse af en validering kohorte med et gennemsnit på 4 tumor slag pr tumor stikprøven bør minimere bias fra mulig tumor heterogenitet [33]. Desuden er vores studie fordele ved brugen af ​​test og validering kohorter, sidstnævnte repræsenterer en uafhængig, ekstern validering delmængde, som proteinmarkører blev vurderet af flere uafhængige patologer, hvilket yderligere bekræfter reproducerbarheden af ​​CD8 /TIA-1 pointsystem og effekt på resultatet.

for at opsummere, TIA-1 er et robust prognostisk immunologisk biomarkør, der bidrager til det kliniske resultat hos patienter med MMR-dygtige kolorektal kræft uafhængigt af TNM stadie og adjuverende behandling. Den kombinerede analyse af CD8 /TIA-1 identificerer en stor undergruppe af patienter, der har gavn af forbedret risiko lagdeling, som bør hjælpe til at skræddersy mere individuel klinisk ledelse for patienter med kolorektal cancer patient, men samtidig give en ny potentiel allé af undersøgelse for udviklingen af målrettet immunterapi.