PLoS ONE: Den rs10993994 Risk Allele for prostatakræft Resultater i klinisk relevante ændringer i Microseminoprotein-Beta Expression i Tissue og Urine

Abstrakt

Baggrund

Microseminoprotein-beta (MSMB) regulerer apoptose og anvendelse af genom-dækkende forening studerer rs10993994 enkelt-nukleotid polymorfisme i

MSMB

promotor har været forbundet med en øget risiko for at udvikle prostatacancer. Promotor risikoens beliggenhed allelen, og dens evne til at reducere promotor-aktivitet, foreslog, at rs10993994 risikoen allel kan resultere i nedsat MSMB i godartet væv, der fører til øget risiko prostatakræft.

Metode /vigtigste resultater

MSMB ekspression i benigne og maligne prostata væv blev undersøgt under anvendelse af immunhistokemi og sammenlignes med rs10993994 genotype. Urinary MSMB koncentrationer blev bestemt ved ELISA og korreleret med urin-PSA, tilstedeværelsen eller fraværet af cancer, rs10993994 genotype og alder debut. MSMB niveauer i prostatavæv og urin blev stærkt reduceret med tumorudvikling. Urinary MSMB var bedre end urin PSA på at differentiere mænd med prostatakræft på alle Gleason kvaliteter. Den høje risiko allelen var forbundet med heterogenitet MSMB farvning og tab af MSMB i både væv og urin i godartet prostata.

Konklusioner

Disse data viser, at nogle højrisiko alleler opdaget ved hjælp af genom-dækkende associationsstudier producere fænotypiske effekter med potentiel klinisk anvendelighed. Vi giver den første forbindelse mellem en lav penetrans polymorfi for prostatakræft og en potentiel test i humant væv og kropsvæsker. Der er potentiale for at udvikle væv og urin MSMB for en biomarkør for prostatakræft risiko, diagnose og overvågning sygdom

Henvisning:. Whitaker HC, Kote-Jarai Z, Ross-Adams H, Warren AY, Burge J, George A, et al. (2010) Den rs10993994 Risk Allele for prostatakræft Resultater i klinisk relevante ændringer i Microseminoprotein-Beta Expression i Tissue og urin. PLoS ONE 5 (10): e13363. doi: 10,1371 /journal.pone.0013363

Redaktør: Andrew Vickers, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, USA

Modtaget: Indtil 30. juni, 2010; Accepteret: September 1, 2010; Udgivet: 13. oktober 2010

Copyright: © 2010 Whitaker et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Forfatterne vil gerne anerkender støtten fra The University of Cambridge, Cancer Research UK (tilskud koder C522 /A8072 og C5047 /A8385), Institut for Cancer Research, The Everyman Campaign, EU FP7 Promark arbejdspakke og Hutchison Whampoa Limited og prostata Cancer Research Foundation. Forfatterne vil gerne anerkender støtten fra det nationale institut for Health Research, som finansierer Cambridge Bio-medicinsk forskningscenter, Cambridge, UK, Bio-medicinske Forskningscenter ved Institut for Cancer Research og Royal Marsden NHS Foundation Trust og Biomedical Forskningscenter i Central Manchester Foundation Trust. Forfatterne vil også gerne anerkender støtten fra National Cancer Research prostatakræft: Mekanismer for Progression og behandling (PROMPT) kollaborativ (tilskud kode G0500966 /75.466), som er finansieret væv og urin samlinger i Cambridge. Forfatterne vil også gerne anerkende den støtte fra Cancer Råd i Victoria og South Australia, Prostate Cancer Foundation of Australia, den victorianske Cancer Agency, Jack og Judy Baker for deres støtte ved NorthShore University Health System og The Ronald og Rita McAulay Foundation som understøtter IMPACT studiesamling. Douglas Easton er et Principal Research Fellow of Cancer Research UK. Hans Lilja er finansieret af National Cancer Institute [tilskud numre R33-CA127768-02]; Svensk Cancer Society [3455]; og svenske Forskningsråd (Medicin) [20095]. De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Dr. Hans Lilja besidder patenter på fri PSA og hK2 analyser. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle de PLoS ONE politikker om datadeling og materialer, som beskrevet online i vejledningen for forfattere.

Introduktion

Microseminoprotein-beta (MSMB) er den anden mest forekommende protein, der findes i sæd efter prostataspecifikt antigen (PSA) [1]. I modsætning til PSA, er MSMB ikke direkte reguleret af androgener og niveauet er ikke påvirket af hormon manipulation [2], [3], [4]. Prostata specificitet MSMB udtryk blev oprindeligt demonstreret i gnavere [5], [6] og støttet af udviklingen af ​​en prostata musemodel, der brugte den

msmb

promotor /enhancer region at målrette prostata specifikt udtryk [7], [8]. Men undersøgelser i mennesker tyder MSMB kan udtrykkes i en række sekretoriske og slimhinde væv, om end på meget lavere niveauer end i prostata [9], [10], [11], [12], [13], [14]. Salg

To genome brede associationsstudier (GWAS) har identificeret et tag lille (SNP), rs10993994 på 10Q der er stærkt forbundet med en øget risiko for at udvikle prostatakræft [15], [16]. Denne SNP er i 5 ‘UTR af

MSMB

. Risikoen allelen er fælles, med en frekvens på ~30-40% i europæerne og 70-80% hos mænd af afrikansk afstamning, og giver en øget risiko for prostatakræft på 1,3 (pr allel odds ratio). Denne forening er observeret i både europæere og afrikansk-amerikanere og synes at være uafhængig af alder af diagnose og tumor kvalitet [17]. Fin skala kortlægning har ikke identificeret andre uafhængigt tilknyttede varianter i regionen. Endvidere har en nylig undersøgelse i cellelinier vist, at risikoen allel (T) signifikant reduceret promotoraktiviteten af ​​genet til 13% af det i lav risiko allel (C) [18]. Da denne SNP ligger inden for

MSMB

proximale promotorregion reduceret promotoraktivitet foreslås at ske via ændret transkriptionsfaktorbindingssites såsom CREB [19]. Disse data antyder kraftigt, at rs10993994 T allelen kausalt forbundet med risiko prostatacancer, og at denne associering kan medieres gennem reduceret ekspression af MSMB protein i godartet prostata væv. Det er blevet rapporteret, at

MSMB

mRNA i cellelinjer blev reduceret i celler homozygote for den risiko allelen, hvilket tyder på en hypotese, hvorved reduceret MSMB ekspression i individer med rs10993994 risiko allel kan føre til reduceret regulering af cellevækst og en øget risiko for tumorigenese [19].

Adskillige grupper har undersøgt MSMB ekspression i prostatacancer og alle har fundet højere niveauer af MSMB i godartede og normalt væv eller serum sammenlignet med materiale fra tumorer [2], [ ,,,0],3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. Til dato ingen undersøgelser er afsluttet i urin. Høje niveauer af MSMB i godartet væv er konsistent med den hypotese, at MSMB binder til celleoverfladereceptorer og regulerer prostata vækst ved at styre apoptose eventuelt via MAP-kinase /AKT signalering [24], [25], [26].

Prostatacancer er den mest almindelige faststof mandlige kræft i Storbritannien. På nuværende bedste diagnostisk redskab er serum PSA mens urin PCA3-mRNA også anvendes som en nyttig diagnostisk test især til mænd med forhøjet PSA og en første negativ biopsi [27]. Imidlertid behovet for et digitalt før afprøvning rektal eksamen udelukker dens anvendelse som et screeningsværktøj. Urinary PSA er blevet rapporteret som et potentielt nyttigt diagnostisk værktøj i mænd med serum PSA 2,5-10 ng /ml og er af særlig interesse i screening og overvågning sygdom, da det er mere acceptabelt for patienterne. [28].

Vi har brugt immunhistokemiske undersøgelser af MSMB i godartet prostata væv til at demonstrere en sammenhæng mellem MSMB protein-ekspression og rs10993994 genotype. Vi har udviklet en urin ELISA-assay til at undersøge sammenhængen mellem urin PSA, MSMB niveauer og MSMB genotype at afgøre, om det har potentiale for klinisk brug som en screening eller diagnostisk værktøj.

Materialer og metoder

Etik Statement

Fuld etisk godkendelse blev opnået for alle menneskelige prøvesamlinger fra enten West Midlands Multi-Center Research Ethics Committee eller Trent Multi-Center Research Ethics Committee. Alle prøver blev opnået med skriftlig tilladelse og analyseret anonymt.

Patient kohorter

Tissue, blev blod- og urinprøver fra patienter med diagnosticeret prostatakræft fås fra Addenbrooke Hospital, Cambridge, UK (radikale prostatektomi indsamlet mellem 2001 og 2008) og The Institute of Cancer Research (biopsi og trans-urethrale prostatektomi indsamlet fra 1995-2002). Normal /godartet patienter blev rekrutteret som en del af IMPACT undersøgelse, en undersøgelse af prostatakræft risiko hos mænd med

BRCA1 /2

germline mutationer ved The Institute of Cancer Research (05 /MRE07 /25) [29]. Denne kohorte havde ikke tidligere prostata sygdom og omfattede mænd med muteret og vild-type (kontrol)

BRCA1

BRCA2

. Median alder, PSA og Gleason score på de kohorter, der anvendes givet i figur S1.

Ikke alle patienter havde god kvalitet væv til IHC, DNA til genotypning, serum PSA målinger og urin til rådighed. For at overvinde dette, blev patienterne opdelt i tre kohorter at besvare specifikke spørgsmål. 168 patienter med god kvalitet væv blev anvendt til IHC undersøgelsen er afbildet i figur 1. Prøver fra 133 af patienterne blev foretaget i et væv microarray (TMA) indeholdende flere kerner fra normale /benigne regioner ( 3), prostatisk intra-epitel neoplasi (PIN) og mindst to adskilte regioner af tumoren for hver patient. De resterende sager var en del af en ekstra TMA af unge debuterende patienter med prostatacancer (defineret som diagnosticeret på ≤60 år) fra England Genetic Prostata Cancer Study. Dette TMA inkluderet flere normale /benigne og tumor regioner i 35 patienter. n = angiver antallet af hændelser snarere end antallet af kerner undersøgte dvs. hvor blev fundet heterogene patologi begge regioner blev scoret selvstændigt.

MSMB immunohistokemi blev udført på TMA’er hjælp af en BondMax Autostainer. For alle sektioner kerner er vist med blåt og MSMB farvning i brun. (A) MSMB var ikke til stede i urothelium (venstre panel), sort pil – urothelium, hvid pil – prostata, sædblære (central panel), sort pil – sædblæren, hvid pil – prostata, blære (højre panel), sort pil – fedt celler, hvid pil – blære muscularis propria. (B) MSMB farvning i prostata er specifik for benigne kirtler (hvide pile) og ikke prostata tumorceller (Gleason 3) (sorte pile). MSMB også undladt at farve atrofiske godartede kirtler. Eksempler på de farvende kriterier (ingen /svage, moderate og stærk) påført på immunhistokemi. Resultaterne af farvningen var stærkt signifikante som beregnet ved anvendelse af en Kruskal-Wallis test. n betegner antallet af patologiske hændelser scoret.

Kun 145 patienter havde DNA, som kan anvendes til genotypebestemmelse, som vist i figur 2B. Komplet radikal prostata sektioner eller meget store vævssnit var tilgængelige fra 32 patienter fra Addenbrookes kohorte.

(A) Et eksempel på mega-blok farvning af store prostata sektioner viser homogen (venstre panel) eller heterogen (højre panel ) farvning. MSMB immunohistokemi blev scoret som før så stærk, moderat, svag eller tabt for hver patient og stratificeret efter genotype; T – høj risiko, C- lav risiko. p-værdier blev beregnet under anvendelse af en Kruskal-Wallis test. n er antallet af patologiske hændelser scoret.

For MSMB ELISA vist i figur 3 89 mænd med prostatakræft, der havde væv, DNA og en urinprøve blev brugt. De normale /godartede patienter blev rekrutteret som en del af IMPACT undersøgelse, en undersøgelse af prostatakræft risiko hos mænd med

BRCA1 /2

germline mutationer (n = 215). Alle urinprøver blev opnået forud for enhver digital rektal eksamen, opdelt i portioner og fryses straks ved -80 ° C. Hvor tilgængelig alder, PSA og Gleason score ved diagnose blev bestemt for hver patient.

Urinary MSMB og PSA blev bestemt og normaliseret til creatinin. (A) Urinary MSMB blev bestemt ved ELISA for den normale /godartet patient kohorte og en mindre kohorte med en prostatakræft diagnose. Det samme kohorte blev også testet for urin PSA og serum PSA værdier indsamlet. ROC-kurver blev genereret; AUC = areal under kurven, er konfidensintervaller angivet i parentes og p-værdier er angivet ved 95% konfidensniveau. Forskellen mellem urin MSMB og PSA ROC kurver p = 0,0021. Forskellen mellem urin MSMB og Tumoren kohorten blev yderligere stratificeret efter Gleason sum score (B). Urinary MSMB og PSA fra lave Gleason prøver (6 og 7) blev sammenlignet med høj Gleason (8 og 9) prøver og ROC kurver genereres og vises som før. Urinary MSMB blev også stratificeret efter den rs10993994 risikoen allel (C). n = antallet af personer undersøgt i hver gruppe.

Genotypning

Genotypning blev gennemført som tidligere beskrevet [15]. DNA blev ekstraheret fra fuldblod til serie 2 og 3, enten kommercielt ved GeneProbe eller med Qia-amp® DNA Mini Kit (Qiagen) ifølge producentens instruktioner. Genotypebestemmelse af prøver blev udført ved 5’exonuclease assay (Taqman ™) ved anvendelse af ABI Prism 7900HT detektion sekvens ifølge producentens instruktioner. Primere og prober blev leveret direkte af Applied Biosystems som Analyser-By-Design ™.

Immunhistokemi

Alle immunhistokemi (IHC) blev udført ved hjælp af en Bondmax automatiseret farvningsværktøjet og anti-MSMB antistof (Abcam) (1:400) på væv fra serie 1 og 2. for multi-normal /tumor-array en 48 core TMA fra Stretton Scientific blev brugt. Kerner blev modfarvet med hematoxylin og glider filmede med et Aperio scanningssystem. Patologi blev bekræftet af en specialist uro-patolog (AW) forud for scoring af enhver immunhistokemisk farvning. Scoring blev udført af to observatører, hvoraf den ene var en uro-patolog (AW), og en konsensus opnået. Sekventiel hæmatoxylin og eosin farvede snit blev anvendt til at bekræfte patologi. Farvning blev gradueret som; ‘Ingen’ – ingen farvning, “svag” – ikke alle epitelceller farves og bleg farvning, “moderat” – de fleste eller alle epitelceller farvet moderat, »stærk« – alle epitelceller farvet kraftigt (figur 1B). Hvor sektioner indeholdt heterogen farvning en generel konsensus blev opnået på grundlag af de relative andele af de forskellige scoringer. Hvor heterogen patologi eksisterede inden kerner, f.eks godartede og tumor regioner side om side, blev hver region scoret som en separat begivenhed. n = angiver antallet af hændelser snarere end antallet af kerner undersøgte

PSA og MSMB målinger

Serum og urin PSA (Gratis alt). kreatinin analyser blev udført af NIHR Cambridge Biomedical Research Centre Core Biokemi Assay Laboratory, Addenbrookes Hospital ved hjælp af ProStratus Free /Total PSA DELFIA kit (Perkin Elmer Life Analytisk Sciences) og Dimension RXL analysator (Siemens Healthcare). På MSMB ELISA alle procedurer blev udført under omrystning ved stuetemperatur. Brønde blev vasket mellem hvert trin tre gange med 0,05% PBS-Tween og en BioTek Elx50 platewasher. Seksoghalvfems brønde (Fisher Scientific) blev overtrukket natten over ved 4 ° C i muse-anti-PSP94 antistof (1:1000, Abcam) fortyndet i PBS. Brønde blev blokeret med 1% BSA (Sigma) i 1 time før 50 pi prøve eller standard blev tilsat til hver brønd in duplo og inkuberet i yderligere 2 timer. Serielle fortyndinger (25 til 0,78 ug /ul) af rekombinant PSP94 (rPSP94, R 20% variation i standardkurven blev anset for at have slået fejl, og gentages. Intra- og inter-assay variation var 8,8% og 22%. Virkninger på protein stabilitet viste sig at være 20% efter test ved frysning optøning 3 gange før analysering eller inkubere pre-fortyndet rPSP94 -3 i 4 timer ved stuetemperatur inden analysering. Recovery fra forskellige fluider blev bestemt til at være 20% ved fortynding rPRDX-3 i enten PBS, 0,1% bovint serumalbumin (Sigma) eller 10% gedeserum (Dako Cytomation). MSMB blev bestemt ved interpolation af værdier fra ikke-lineær regression af sigmoidal standardkurve. Koncentrationen af ​​alle urinprøver blev normaliseret under anvendelse af creatinin, målt ved anvendelse af et creatinin assaykit (R 0,0001, Figur 1B og figur S1) [2], [3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. MSMB farvning blev også konsekvent tabt i prostata intra-epitel neoplasi (PIN) sammenlignet med godartet væv (p 0,0001) tyder på, at det kan være et tidligt, kausal, begivenhed i tumorudvikling. Farvning for MSMB i godartet væv varierede fra homogen, som var mest almindeligt ses med stærk farvning (figur 2A, venstre panel) og variable, heterogen farvning ofte ses ved svag og moderat farvning (figur 2A, højre panel).

MSMB farvning i væv var signifikant associeret med rs10993994 genotype (p 0,0001), farvning er svagest hos mænd homozygote for den høje risiko allelen (TT) og stærkest i CC homozygoter (figur 2B). Der var ingen tegn på en sammenhæng mellem MSMB farvning og alder eller PSA på diagnose i denne ondartede serie af mænd (figur S3).

Vi bestemt urin niveauer af MSMB i 215 normale /godartede mænd med ingen historie prostata sygdom og 89 mænd med prostatakræft (figur S4). I overensstemmelse med foreningen i prostata væv var der et signifikant fald i urin MSMB hos mænd med tumorer sammenlignet med mænd uden tidligere prostata sygdom (Støtte Document 4A) (p 0,0001). Urinary MSMB væsentligt forbedret ved urin PSA, men ikke serum PSA, for prostatakræft diagnose i denne kohorte (forskel mellem urin MSMB og PSA ROC kurver 0,21, 95% CI: 0,075, 0,34, p = 0,0021) (figur 3A). Når tumorprøverne blev stratificeret i lav (6 og 7) og høj (8 og 9) sum Gleason scorer urin MSMB påvist høje niveauer af specificitet og følsomhed især sammenlignet med urin-PSA (figur 3B). Der var et signifikant fald i urin MSMB med høj risiko allel sammenlignet (TT) til lav risiko allelen (CC) (figur 3C) (p = 0,0319), selv om dette ikke blev afspejlet i en signifikant forskel i ROC kurver. Hævet godartet urin MSMB næppe reflekterer en øget benign prostata volumen som der ikke var nogen signifikant stigning i urin MSMB med alderen (Støtte Document 4B) (p = 0,543). For at demonstrere, at korrelationen var specifik for rs10993994 genotype vi sammenlignet urin MSMB niveauer og BRCA1 og BRCA2 kønscellelinie mutation status, som er kendt prostatakræft risikofaktorer [30], [31], og fandt nogen sammenhæng (figur S4).

diskussion

Dette er den første undersøgelse at beskrive forholdet mellem risikoen allel af tag SNP rs10993994 og MSMB niveauer i benigne og tumor prostatavæv og at korrelere proteinniveauet med genotype og aggressivitet prostata kræft. Den næsten fuldstændig tab af MSMB i PIN (figur 1B) antyder, at reduceret MSMB er en tidlig begivenhed i tumorudvikling overensstemmelse med en sammenhæng mellem prostatakræft risiko og rs10993994 genotype.

Der er stærke beviser forbinder rs10993994 SNP i

MSMB

promotor region til en øget risiko for at udvikle prostatakræft [15], [16]. MSMB er blevet undersøgt af en lang række grupper som en formodet prostatakræft biomarkør fordi niveauer i væv og serum formindskes eller tabt med udvikling af kræft [2], [3], [4], [12], [20], [ ,,,0],21], [22], [23] (figur 1B). Vi har bekræftet disse resultater og at MSMB er stort set prostataspecifikt på proteinniveauet i væv (figur 1A og figur S2). De seneste oplysninger tyder på, at når prostata tumorer har udviklet rs10993994 har ringe effekt på sygdomsudviklingen indikerer, at enhver stigning i risiko påvirker godartet kirtel og indledende tumor udvikling [17]. Dette er i overensstemmelse med tabet af MSMB som vi har bemærket i PIN, hvilket antyder, at stærkt reduceret eller tabt MSMB ekspression i godartet prostata er påkrævet for malign transformation. Forbindelsen mellem MSMB risikoen allel og udtryk i væv var meget signifikant (p 0,0001) (Figur 2B). Udtalte heterogenitet blev også bemærket i væv med moderat til lav udtryk oftest knyttet til TT-allelen (figur 2A).

Flere grupper har undersøgt MSMB niveauer i serum viser prognostisk værdi efter radikal prostatektomi [3], [32 ]. I overensstemmelse med tabet af MSMB i tumorogene kirtler (figur 1B) vi har vist en meget signifikant tab af MSMB i urin fra patienter med både lav og høj Gleason kvalitet prostatacancer blev sammenlignet med dem uden kendt prostata sygdom (figur 3A). Disse resultater sammenlignes favorabelt med urin-PSA som tidligere er blevet rapporteret at have potentiel klinisk anvendelighed til patienter med serum PSA 4-10 ng /ml [28]. Urinary MSMB var ikke så nøjagtige som serum PSA, den nuværende guld standard test til diagnosticering af prostatakræft (AUC på 0,97 til serum PSA og 0,77 for urin MSMB. Men vores kohorter repræsenterer ikke den falske positive og negativer ses, når der bruges PSA til befolkning screening antyder en mindre forudindtaget kohorte bør testes fastlægge den sande gavn for urin MSMB til screening prostatakræft. Selv om det er måske overraskende, at sådanne ændringer er så let kan påvises i betragtning af den potentielt lille antal tumorogene kirtler inden en ellers godartet prostata. Men vi har vist næsten fuldstændig prostata specificitet for MSMB protein tyder det usandsynligt, at signifikante niveauer af MSMB opstå fra enhver anden væv. det er sandsynligt, at en del af mænd i vores normale /godartet undersøgelse (median alder af 53 år), vil have en vis grad af benign prostatahyperplasi (BPH), men vi bemærkede ingen signifikant stigning i urin MSMB med stigende alder tyder på, at øget prostatavolumen har ringe effekt på urin MSMB (Figur S4).

urinary forskelle i MSMB med risiko allelen var betydelig, men ikke tilstrækkeligt diskriminerende vores relativt lille kohorte. Ændringer var uafhængige af andre etablerede genetiske risikofaktorer som

BRCA1

BRCA2

mutation (figur S4). Øget analysesensitivitet og afprøvning af en repræsentativ population kohorte sammenlignet med PSA er mere tilbøjelige til at påvise enhver sand klinisk betydning for anvendelse af urin MSMB at estimere risiko og diagnosticere prostatacancer. Urin er en yderst acceptabel biologisk foranstaltning for patienter og vores resultater viser, at MSMB er et potentielt mål for yderligere undersøgelse som en urin biomarkør til screening og diagnosticering af prostatacancer, uden behov for en digital rektal undersøgelse. I modsætning til PSA, har tidligere rapporter foreslået, at MSMB niveauer er upåvirket af hormon ablation terapi ofte anvendes i prostatakræft behandling, og vi har brug for at afgøre, om MSMB kunne være nyttigt i overvågningen sygdomsbyrde i patienter, der gennemgår forskellige former for behandling [2], [3] [4]. MSMB kan også være nyttigt til at opdage disse patienter med forhøjet PSA, men en negativ biopsi, der ville drage fordel af yderligere undersøgelser.

Kvantitativ RT-PCR undersøgelser af cellelinier har tidligere demonstreret en sammenhæng mellem rs109939994 T-allel og sænket MSMB mRNA, mest sandsynligt på grund af ændret transskriptionsfaktorbindende [19]. Påvisningen af ​​en lignende forening med urin MSMB og MSMB farvning i godartet prostata væv styrker årsagssammenhæng mellem MSMB udtryk og prostatakræft. I prostata MSMB menes at regulere apoptose via celleoverfladereceptorer, MAP-kinase og AKT [24], [25]. Vi hypotese, at reduceret MSMB udtryk hos mænd med høj risiko allelen kan reducere prostata celle apoptose og i sidste ende fremme mindre kontrolleret prostata vækst. Tabet af en så stor lovgivningsmæssig vej kunne fremme tumorigenese og give en forklaring på en øget risiko for at udvikle prostatakræft samtidig have ringe effekt på resultatet, når kræften har udviklet [17].

Vores resultater hæve den mulighed, at urin MSMB relateret til genotype kan være en nyttig biomarkør til screening for prostatacancer risiko og udvikling. Dette skal undersøges nærmere for at målrette de mænd med øget risiko for øget overvågning og tidlig indgriben og identificere de mænd med prostatakræft.

Støtte oplysninger

figur S1.

(A) I alt 168 tumorpatienter blev undersøgt, men ikke alle patienter havde væv, DNA og urin rådighed. Fra kohorten 168 havde væv, som omfattede godartet som blev anvendt i figur 1. 145 patienter havde væv og DNA og blev inkluderet i figur 2. 89 patienter havde også en urinprøve og kunne anvendes til ELISA vist i figur 3. (B ) Nærmere oplysninger om benigne og tumor kohorter, der anvendes i undersøgelsen

doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s001

(0,73 MB EPS)

Figur S2.

MSMB er prostataspecifikt i normale væv og tumorvæv. En multi-normalt væv TMA blev farvet for MSMB hjælp immunohostochemistry og en Bondmax Autostainer. Grupperingen indeholdt flere kerner fra følgende væv; hud, bryst, skjoldbruskkirtel, spiserør, nyre, blære, lunge, tyktarm, lever, ovarie, livmoder og mave. Repræsentative billeder fra testiklerne (seminom tumor), er bryst og prostata vist. MSMB farvningen er brun, kerner er blå og doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s002

(7.19 MB EPS)

Figur S3.

korrelation mellem genotype og alder /PSA på diagnose og immunhistokemisk farvning og alder /PSA på diagnosetidspunktet. n = antallet af personer undersøgt i hver gruppe. p-værdier blev beregnet ved hjælp af en en-vejs ANOVA med en Kruskal-Wallis korrektion

doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s003

(1,21 MB EPS)

Figur S4.

(A) Urinary MSMB niveauer blev sammenlignet ved ELISA og en 2-halet t-test. (B) Urinary MSMB værdier blev analyseret i henhold til alderen på de enkelte (år) på tidspunktet for prøvetagningen. (C) PSA målinger for den godartede kohorte stratificeret efter den rs10993994 genotype. (D) Urinary MSMB ændrer ikke med BRCA mutationer. Godartede mænd i Cohort 3 blev genotype for mutationer i BRCA1 og BRCA 2, som er kendt for at bibringe risiko for at udvikle prostatacancer. BRCA genotype blev sammenlignet med urin MSMB. Kontrol – ingen mutation, BRCA 1 – mutation i BRCA 1, BRCA 2 -. Mutation i BRCA 2. For alle grafer n = antallet af analyserede prøver og p-værdier blev beregnet ved hjælp af en en-vejs ANOVA med en Kruskal-Wallis korrektion

doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s004

(2,03 MB EPS)

tak

Vi vil gerne takke Dr. William J. Howat og Histopatologi /ISH Facility, Cancer Research UK Cambridge Research Institute for hjælpen med MSMB immunhistokemi. Vi vil også gerne takke Cancer Research UK Cambridge Research Institute Bioinformatik Core for statistisk bistand. Vi er meget taknemmelige for det nationale institut for Health Research Cambridge Biomedical Research Centre Core Biokemi Assay Laboratorium for hjælp med de biokemiske analyser.